重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定 |
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引用本文: | 吴盛,陈新园,陈均勇,刘莉莉,朱镇华,孙自勇,张燕,刘建宁.重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定[J].南京大学学报(自然科学版),2004,40(1):49-57. |
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作者姓名: | 吴盛 陈新园 陈均勇 刘莉莉 朱镇华 孙自勇 张燕 刘建宁 |
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作者单位: | 南京大学分子医学研究所,南京,210093 |
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基金项目: | 国家重大科技专项"创新药物和中药现代化"(2002AA2Z3451) |
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摘 要: | 用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中,经过KpnI/SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游.将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经IPTG诱导,Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性处理,从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白.经凝血因子Xa酶切、Zn—Sepharose亲和层析以及反相高效液相色谱纯化获得3.8mg重组人胸腺肽.小鼠胸腺细胞凋亡实验表明,重组人胸腺肽能显地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡,且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系.
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关 键 词: | 胸腺肽 大肠杆菌 表达 纯化 鉴定 酶解 |
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