中国地鼠卵巢细胞培养上清中重组骨形态发生蛋白2的三步纯化法(英文)

骨形态发生蛋白2(BMP-2)是转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员,在骨组织工程领域被广泛应用.如今,BMP-2的商业生产所受关注程度与日俱增.这里建立了一种方便且低成本的方法,将人重组骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)从中国地鼠卵巢细胞系(CHO)培养上清中纯化出来.该方法由三步组成:肝素亲和层析,Q-Sepharose离子交换层析和SephacrylS-200凝胶过滤,得率约29%.从1L培养上清中能得到约0.26mg的纯度在95%以上的rhBMP-2成熟二聚体,并通过异位成骨实验组织学分析证实了其生物活性.因此,该方法在CHO培养上清中纯化rhBMP-2方面具有潜在的应用价值.     

苯甲醛缩氨基硫脲Cu（Ⅰ）,Zn（Ⅱ）配合物的直接电化学合成

用电化学金属阳极氧化法在非水溶剂中合成了苯甲醛缩氨基硫脲与Ｃｕ，Ｚｎ配合物，通过元素分析，红外光谱，紫外光谱，磁矩，摩尔电导等对配合物进行了表征。     

正确认识素质教育内涵,改革课堂教学方法

本文针对当前素质教育改革中出现的一些问题,系统地分析了素质教育的内涵和外延,阐述了素质教育的本质特征,提出了实现素质教育所必需的课堂教学改革方法.     

氢氟酸腐蚀玻璃实验现象与机理探讨

对氢氟酸腐蚀玻璃实验现象进行了研究,发现了新的实验现象,并探讨了反应机理与反应表示式.     

缩氨基硫脲过渡金属配合物及其抗癌活性

合成并表征了苯甲醛缩氨基硫脲（ＨＬ）和３－硝基苯甲醛缩氨在硫脲（ＨＸ）与Ｃｕ,Ｃｏ,Ｚｎ,Ｍｎ的６个配合物,用体外试管法测试了配体和配合物的抗癌活性,结果表明,配体ＨＬ和ＨＸ是通过亚氨基Ｎ原子和Ｓ原子与过渡金属离子形成配合物,这些配合物的抗癌活性均强于配体,Ｚｎ（Ⅱ）和Ｃｕ（Ⅱ）配合物对腹水癌细胞的杀死率均为１００％。     

重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定

刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeI/SacI酶切并插入载体pET25b ( )中构建重组表达质粒pET25b ( )/ETI .重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体.包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化,每升培养液可获得14 mgrETI ,其纯度超过92 %.活性测定表明,rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用,但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性,抑制常数Ki分别为5 .14×10-9,9 .4×10-8和2 .08×10-8mol/L.     

2-氯苯甲醛缩氨基硫脲Ti(Ⅳ)、Ni(Ⅱ)配合物的直接电化学合成

在以2-氯苯甲醛缩氨基硫脲(HL)为配体的非水溶剂中,用Ti、Ni金属做阳极,用电化学金属阳极氧化法合成了2-氯苯甲醛缩氨基硫脲与Ti(Ⅳ)、Ni(Ⅱ) 的金属配合物.通过元素分析、红外光谱、紫外光谱、磁化率、摩尔电导等对配体和配合物进行了表征.     

重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化

将化学合成的rhPTH(1-34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET-35b( ),使rhPTH(1—34)融合于纤维素结合结构域(CBDdos)的羧基端,并得到高效表达．融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经Factor Xa裂解释放出rhPTH(1-34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1-34)纯品．每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1-34)．经质谱测定,所得样品的分子量为4117．0Da,与rhPTH(1—34)理论分子量一致．     

重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定

用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中,经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经IPTG诱导,Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性处理,从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白．经凝血因子Xa酶切、Zn—Sepharose亲和层析以及反相高效液相色谱纯化获得3．8mg重组人胸腺肽．小鼠胸腺细胞凋亡实验表明,重组人胸腺肽能显地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡,且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系．