Hirulog 18在大肠杆菌中的表达及其生物学活性检测

以化学合成的Hirulog18基因为模板,经PCR扩增、限制性内切酶Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ消化,将编码Hirulog18的基因片断插入表达载体pET-32b中编码硫氧化还原蛋白（Trx）基因序列的下游.用重组质粒转化感受态大肠杆菌-BL21（DE3）,并用IPTG诱导表达Trx-Hirulog18融合蛋白.复性、肠激酶酶切、Ni-Sepharose和HPLC纯化后,用质谱测定其分子量并进行活性测定.检测结果表明构建的PET-302b/Hirulog18能够在大肠杆菌中高效表达,表达的Hirulog18具有较低的凝血酶抑制活性并能够竞争抑制Angiomax活性.     

牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定

用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.     

对氯苯乙酮双缩硫代对称二氨基脲配合物及其抗癌活性的研究

合成了对氯苯乙酮双缩硫代对称二氨基脲（ＨＬ）及其与ＣｕＣｌ２、ＮｉＣｌ２、ＣｏＣｌ２的配合物,通过元素分析、红外光谱、紫外光谱、磁化率、摩尔电导等对配体和配合物进行了表征。测试了配体和配合物的抗癌活性。     

氨甲环酸与Wnt信号通路中含kringle结构域蛋白的结合对新生小鼠骨密度的影响

最近研究发现Wnt信号通路在骨形成过程中发挥重要作用Wnt受体如脂蛋白相关蛋白5（lrp5）和孤独受体（Ror2）的缺失或突变导致骨的不正常发育．Dkk是一个分泌型规范Wnt信号系统的抑制剂，通过与脂蛋白相关蛋白5和最近新发现的一种含kringle结构域的蛋白kremen形成三聚体复合物．这种复合物随即被细胞内吞，从而导致细胞表面Wnt受体脂蛋白相关蛋白5水平迅速下降，从而达到抑制Wnt信号通路的日地．通过对kremen和Ror2蛋白序列分析发现kremen和Ror2的胞外部分均含有一个结构上能与赖氨酸结合的kringle结构域．通过给怀孕母鼠注射一种赖氨酸类似物——氨甲环酸来研究kremen和Ror2的kringle结构域上的赖氨酸结合位点被占据对小鼠骨发育的作用．但是，研究结果表明AMCA组和对照组之间的骨密度并没有显著差异，揭示赖氨酸结合位点不参与骨的发育调控．     

三辛基氧化膦萃取钯热力学研究

研究了三辛基氧化膦（ＴＯＰＯ）从高氯酸介质中萃取钯的热力学。通过考察（ＴＯＰＯ）对Ｐｄ（Ⅱ）的影响,测出了萃取反应的表观平衡常数Ｋ,焓变ΔＨ,自由能变ΔＧ和熵变ΔＳ。     

3—硝基苯甲醛缩氨基硫脲与镍（Ⅱ）,钴（Ⅱ）,锌（Ⅱ）离子 …

合成并表征了３－硝基苯甲醛缩氨基硫脲（ＨＬ）与锌（Ⅱ）、钴（Ⅱ）,镍（Ⅱ）离子的５个配合物,并用体外试管法测试了配合物和配体的抗癌活性。结果表明：３－硝基苯甲醛缩氨基硫脲是通过亚胺基Ｎ原子和Ｓ原子与金属离子形成配合物,这些配合物的抗癌活性均强于自由配体,锌配合物对腹水癌细胞的杀死率为１００％。     

苯甲醛缩氨基硫脲,3—硝基苯甲醛缩氨基硫脲的过渡金…

合成并表征了苯甲醛缩氨基酸硫脲和３－硝基甲基醛缩氨基硫脲与Ｃｕ（Ⅱ）Ｃｏ（Ⅱ），Ｎｉ（Ⅱ），Ｚｎ（Ⅱ），Ｍｎ（Ⅱ）的９个配合物，并用体外试管法测试了配体和配合物的抗癌活性，结果表明，配体ＨＬ＾１和ＨＬ＾２是通过亚氨基Ｎ原子和Ｓ原子与过渡金属离子形成配合物，这些配合物的抗癌活性均强于配体，Ｚｎ（Ⅱ）和Ｃｕ（Ⅱ）配合物对腹水癌细胞的杀死率均为１００％。     

二-(2-乙基己基)二硫代磷酸萃取钯机理的研究

报道了二－（２－乙基己基）二硫代磷酸（Ｄ２ＥＨＤＴＰＡ）从高氯酸体系中萃取钯的机理,结果表明,钯的萃取率随ＰＨ的增大而增大,与高氯酸根离子浓度的无关,采用斜率法测算萃合物组成的ＰｄＬ２。     

双苯乙酮亚胺硫脲Cu(Ⅰ),Zn(Ⅱ),Fe(Ⅱ)配合物的直接电化学合成

用电化学金属阳极氧化法在非水溶剂中合成了苯乙酮双缩硫代对称二氨基脲(HL)与Cu(Ⅰ),Zn(Ⅱ),Fe(Ⅱ)的配合物,通过元素分析、红外光谱、紫外光谱、磁化率、摩尔电导等对配合物进行了表征.