水稻叶绿体DNA的分离与鉴定

象其他高等植物一样,水稻细胞的核、叶绿体和线粒体中含有它的各种遗传信息.可过去大多水稻遗传方面的工作研究的是核基因组,而较少研究叶绿体基因组.叶绿体是重要的能量转换细胞器,是进行光合作用的场所.它不但含有光合作用所需的全部成分,而且具有能表达它们的遗传信息.近年来分子生物学     

2个水稻花发育相关MADS-box基因的全序列cDNA克隆及结构分析

一组具有MADS-box结构域的转录因子在控制花器官的诱导与发育中起着重要作用．以水稻广陆矮4号(Oryza sativa L．Guang-Lu—Ai No．4)幼穗总RNA为模板，根据MADS-box保守区的序列设计简并性引物。利用3′-RACE的方法获得了2个新的水稻花发育相关MADS-box基因，分别命名为FDRMADS3和FDRMADS4；并利用5′-RACE的方法获得了该2个基因完整的cDNA序列，包括完整的编码区，5′-UTR和3′-UTR．它们编码的蛋白质都具有典型的MADS-box结构域和半保守的K区，其与水稻中其他家族成员的MADS-box结构域同源性高达90％以上，这说明它们都是典型的MADS-box基因．     

一个与人类待定肿瘤抑制基因同源的水稻基因的分离

从水稻基因文库中筛选到一个与人类待定肿瘤抑制基因QM同源的基因,命名为OSQM2．该基因片断长为3．1kb,编码一个具有184个氨基酸的高度碱性的蛋白质,与其他已知QM基因相比,该基因具有一个非常特殊的启动子,包含许多在植物中已发现的与抗逆有关的顺式作用因子,如：“G盒”,“DRE盒”,“MYC盒”等,故而该基因有可能是一个新的受环境胁迫因子诱导的基因,Southern杂交表明它以单拷贝形式存在于基因组中。     

水稻基因组中U2snRNA基因连锁的分析

根据Ｕ２ｎＲＮＡ基因的保守性和结构特点设计引物,通过ＰＣＲ法扩增Ｕ２ｓｎＲＮＡ连锁基因间区的ＤＮＡ片段并进行顺序分析,证实在水稻中至少存在一组Ｕ２ｓｎＲＮＡ连锁基因。对水稻总ＤＮＡ的ＰＣＲ分析结果表明,水稻中可能还存在其他形式的连锁基因。ＰＣＲ方法可以有效地应用于结构保守基因的连锁分析中。     

扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达

采用TRIzol试剂一步法所抽提的总RNA的D（260）／D（280）值为1.82,甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带。根据扩展青霉所产碱性脂肪酶（Lip PE)N末端20个氨基酸残基序列和真核生物mRNA3‘端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT－PCR技术和3‘－RACE法扩增了Lip PE成熟肽编码区和3‘非编码区的cDNA,直接将该PCR产物克隆至pUCm-T载体中。序列分析表明,该碱性脂肪酶含有258个氨基酸,其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly。进一步采用Clot Tech公司的SMART^TM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip EP完整cDNA的分析测定。最后将编码完整脂肪酶蛋白的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,SDS－PAGE检测结果表明,所表达的GST－Lip EP融合蛋白分子质量约为53ku;免疫印迹（Western Blotting)技术证明了所克隆的cDNA确为编码扩展青霉WMC20718脂肪酶的基因。     

普通野生稻中NBS同源序列的克隆和分析

已知的植物抗病基因大多数具有核苷结合位点（NBS）和富含亮氨酸重复（LRR）。根据NBS的保守区设计引物,应用聚合酶链式反应（PCR）,从普通野生稻基因组中克隆了4个不同的NBS同源序列（OSNBA1－OSNBA4）。同源性比较显示它们均与非TIR类的NBS序列相似,其中,OSNBA1与双子叶植物拟南芥的RPS2基因更接近;OSNBA2－OSNBA4与单子叶植物水稻的XA1、RPR1基因更相似。     

昆虫血淋巴蛋白质的淀粉胶电泳

淀粉胶电泳用于蛋白质成分的分析,分辨力十分高.自1955年Smithies用来分析人血清蛋白成分以来,对于各种动物血液及其他组织液蛋白成分的分析,包括个体种属间的差异,正常、病理下的比较,发育变异时的变化等诸方面,应用已十分广泛.从1956年开始,陆续有人报导淀粉胶电泳应用于昆虫血淋巴的研究结果.Chen发现果蝇(Drosophila)幼虫血淋巴含有7种蛋白质成分,库蚊(Culex)为4种.Barlow报导了落叶松锯蜂(Pristiphora erichsoni Htg)的预蛹为4种蛋白质成分,家蝇(Musca demosica L.)幼虫为     

水稻中一种RNA结合蛋白cDNA的筛选和结构分析

植物叶绿体基因组全结构的阐明,已充分揭示该遗传体系兼有原核生物和真核生物基因组的特征。在叶绿体基因中,除存在一些内含子结构外,还具有像rpl12这样复杂的分割式基因。同时,不同基因的转录速度也存在着显著的差异。这些都意味着叶绿体基因在转录后必然有着复杂的剪接加工过程。RNA结合蛋白是一类在RNA加工中起重要作用的蛋白。Li等首次从烟草叶绿体中分离到与RNA转录直接相关的RNA结合蛋白,并且证明它们是由细胞核编码,在细胞质中合成后再输入到叶绿体中去的。至今,已从烟草、菠菜以及拟南芥菜等植物中发现了约10种核编码的叶绿体RNA结合蛋白,它们有类似的构造特征。我们从水稻cDNA文库中首次筛选到一个RNA结合蛋白(cp28)的基因,其相应的肽链由264个氨基酸组成。和其他叶绿体RNA结合蛋白相仿,它也包含有两个RNA结合结构域(称为consensus sequence-type RNA-binding domain,即CS-RBD),其中各含有一个由8个氨基酸组成的高度保守的一致顺序(ribonucleoprotein consensus sequence,即RNP-CS)。N端区域的传送肽(穿膜信号肽)由60个氨基酸组成,其后是一段负电荷十分集中的酸性肽段,但传送肽和酸性肽段的氨基酸顺序与其他植物的RNA结合蛋白的同源性很低。根据全长肽链的同源性比较,我们还分析了水稻cp28     

水稻基因组中U2snRNA基因的结构分析

对水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因的结构分析结果表明单子植物水稻的Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因以多基因家族的形式存在,且Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因中存在连锁现象。３个新的水稻Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因和已报道的ＦＤＲＧＵ２－３一样,编码区上游除含有植物ＵｓｎＲＮＡ基因共有的ＵＳＥ和ＴＡＴＡ元件外,还含有单子叶植物ＵｓｎＲＮＡ所特有的ＭＳＰ元件,且具有保守的四茎环二级结构,基因成员间的同源性最低为８５．１＾     

水稻花发育相关MADS-box基因的克隆

以水稻幼穗总ＲＮＡ为模板,利用３′－ＲＡＣＥ克隆了８个接近于全长的水稻ＭＡＤＳ－ｂｏｘ 基因的ｃＤＮＡ．在ＧｅｎＢａｎｋ 的数据库中查询表明,其中２个ＦＤＲＭＡＤＳ１,ＦＤＲＭＡＤＳ２分别与已报道的水稻ＭＡＤＳ－ｂｏｘ 基因Ｏｓ－ＭＡＤＳ５和ＯｓＭＡＤＳ４５有极高的同源性,另外６个为新的尚未见报道的水稻ＭＡＤＳ－ｂｏｘ 基因．系统进化树分析表明ＦＤＲＭＡＤＳ１,ＦＤＲＭＡＤＳ２和ＦＤＲＭＡＤＳ４可能与Ｃ组基因的功能相关;ＦＤＲＭＡＤＳ３,ＦＤＲＭＡＤＳ６和ＦＤＲ－ＭＡＤＳ７可能与Ａ 组基因的功能相关