大鲵输卵管组织学结构观察

运用光学显微镜观察了大鲵雌性输卵管组织学结构的特点.输卵管是前端细后端粗的长而且弯曲的管状结构,长度约为体长的1.5~3倍.管壁从内到外分别由粘膜层、粘膜下层、浆膜下层和浆膜层4部分组成.不同区段输卵管在组织学结构上存在有差异,比较观察认为,不同区段输卵管的结构是与其功能相适应的.     

波纹唇鱼神经肽Y基因的克隆及原核表达

以波纹唇鱼为实验对象,采用同源基因克隆技术和RACE技术得到神经肽Y基因的cDNA全长序列.波纹唇鱼npy的cDNA全长序列为645 bp,包含59 bp的5'UTR、300 bp的ORF和286 bp的3'UTR.分子进化的比对分析表明,波纹唇鱼NPY前体与斜带石斑鱼和锯隆头鱼的亲缘关系最近.波纹唇鱼ORF编码99个氨基酸,NPY前体多肽包括:信号肽、成熟肽、Gly-Lys-Arg翻译后加工位点和羧基末端侧翼肽段(CPON).该NPY前体的预测分子质量为11.27 kD,理论等电点为5.51.采用pET-32a(+)原核表达系统构建波纹唇鱼npy基因的原核表达重组子pET-32a(+)-NPY,并获得重组菌株.对重组蛋白表达菌株进行培养条件优化,结果表明:该菌株在30℃,0.6 mmol/L IPTG,培养时间8 h的条件下,重组蛋白的表达效率最高.     

尖塘鳢属鱼类线粒体16SrRNA基因序列变异及分子系统进化

为探讨尖塘鳢属鱼类的系统发育关系,笔者通过PCR法得到云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢和尖头塘鳢的线粒体16SrRNA基因部分序列（569bp）,并结合从GenBank中下载的平头沙塘鳢、溪鳢及刺盖塘鳢的16SrRNA基因部分同源序列,分析了6种塘鳢科鱼类的系统发育关系．运用MAGA4．0软件分析可知,塘鳢鱼类6个种之间存在142个变异位点,其中简约信息位点57个,转换／颠换之比为1．6,表明塘鳢科鱼类16SrRNA基因序列转换／颠换未达饱和;6种塘鳢科鱼类之间的序列差异在0．054～0．147之间,其中平头沙塘鳢和刺盖塘鳢的序列差异最大（0．147）,线纹尖塘鳢与云斑尖塘鳢的序列差异最小（0．054）,且种间序列差异不大．通过NJ,ME,MP系统树的建立,表明线纹尖塘鳢与云斑尖塘鳢的亲缘关系最近,且尖塘鳢属与塘鳢属鱼类的同源性不高,验证了传统分类学把尖塘鳢独立成属的科学性．     

中国大鲵（Andrias davidianus）产卵期输卵管分泌特征及卵外胶膜研究

利用组织学观察、扫描电子显微镜及凝胶电泳分析技术,研究中国大鲵产卵期输卵管结构及分泌特征,探讨了输卵管与卵外胶膜形成的关系．产卵期中国大鲵输卵管显著增长,管壁增厚,管径增大,输卵管粘膜上皮向腔内突起形成皱襞,内表面纤毛密集,单管状腺分支增多,腺细胞内充满胶质．产卵期中国大鲵输卵管这些结构特征与其功能是相适应的．产卵期中国大鲵输卵管液蛋白成分电泳检测显示中国大鲵输卵管液的分泌主要集中在弯曲部的中后段．卵外胶膜与输卵管液的蛋白成分比较也表明：弯曲部中后段输卵管液与卵外胶膜存在有较多相同蛋白带,该段是构建中国大鲵卵外胶膜的主要场所。     

雌核发育棕点石斑鱼EST-SSR的开发验证

通过人工雌核发育棕点石斑鱼(Epinephelus fuscogutatus)的转录组序列,共获得了24 359个微卫星位点,棕点石斑鱼转录组的微卫星重复基序具有不同的分布特征,其中以单碱基(34.05%)、二碱基(37.58%)和三碱基(22.75%)为主要的EST-SSR基序重复类型.根据微卫星引物设计原则,随机筛选了93个EST-SSR位点来进行引物合成和多态性检测,最终开发了48个具有多态性的微卫星标记,并在不同棕点石斑鱼群体中进行了初步的验证.结果显示:每个位点等位基因数(Na)为2～22,平均等位基因数为9;观测杂合度(H_0)为0.111～1.000,期望杂合度(He)为0.636～0.940;多态信息含量(PIC)为0.538～0.922个,表明48个EST-SSR位点均表现出高多态性(PIC 0.5).结果表明:基于雌核发育棕点石斑鱼转录组数据,开发微卫星标记是可行的.本研究所开发的具有多态性的微卫星标记可应用于棕点石斑鱼及其近缘种的遗传多样性分析和分子标记辅助育种研究.     

中国大鲵（Andrias davidianus）的胚胎发育

对中国大鲵(Andrias davidianus)胚胎发育过程的外部形态及器官发育特点进行了详细地描述,为中国大鲵胚胎发育制定出完整的分期标准.中国大鲵胚胎发育过程依据形态学和组织学特征可以划分为6个阶段:卵裂阶段、囊胚阶段、原肠胚阶段、神经胚阶段、器官形成阶段、孵化阶段,共20个时期.从整体上来看,中国大鲵的胚胎发育特征与东方蝾螈(Cynops orientalis)、黑斑蛙(R.nigromaculata)大体相似,主要的差异表现在早期卵裂方式以及消化系统的发育方面.形态学及组织学观察表明,中国大鲵卵裂并非盘状卵裂类型.同时,中国大鲵胚胎发育过程中前三次卵裂均为经裂,胚胎消化系统的发生发育迟缓,无平衡器或口吸盘等,这些均为中国大鲵胚胎发育的显著特点.     

不同培水方式对斜带石斑鱼育苗池中浮游生物群落的影响

 斜带石斑鱼在中国的养殖主要位于南方,养殖规模仍不及其他海水养殖鱼类,如卵形鲳鲹、海鲈、军曹鱼等。苗种培育成活率低是造成斜带石斑鱼养殖业发展滞后的主要“瓶颈”之一,这与石斑鱼仔鱼开口期缺乏适宜的生物饵料有关,尤其是浮游动物的缺乏。为此,文中设计了4种不同培水方式,研究其对斜带石斑鱼育苗池中浮游生物群落的影响。方式1中分别添加益生菌、虾片40 mL·m^-3和4 g·m^-3（组1）,方式2中分别添加益生菌、虾片80 mL·m^-3和8 g·m^-3（组2）,方式3中添加小球藻液2.5 L·m^-3（组3）,方式4中添加小球藻液5 L·m^-3（组4）。每组设3个重复。育苗池规格2.5 m ×4.0 m×1.1 m（宽×长×高）。结果表明,组1和组2中浮游植物、浮游动物种类数高于组3和组4。益生菌和虾片的添加可显著提高育苗池中浮游植物及浮游动物密度。整个育苗过程中。组2所含浮游动物密度维持在较高水平(1.3 × 10.5~2.1 × 10.5 ind·L^-1),组1和组2中浮游动物密度要显著高于组3和组4(P≤0.05)。从实验中可看出石斑鱼育苗池中添加一定量的益生菌和虾片,可获得较丰富的浮游动物群落,为石斑鱼仔稚鱼生长提供活饵料。     

热应激对波纹唇鱼免疫功能的影响

为了研究波纹唇鱼对热应激效应的基因表达差异,本研究运用高通量RNA-seq技术在热应激和常温条件下,对波纹唇鱼的基因进行了转录组测序. DEGs鉴定结果表明:1655个基因受热应激诱导后差异表达;GO富集分析显示:表达上调的基因包括MCM、DNA复制起始等与细胞组成和生物过程相关的基因;而表达下调的基因主要集中于ERK等与机体免疫应答相关的因子;实验结果表明:热应激会导致波纹唇鱼免疫应答相关基因的下调,也可能会导致其免疫应答功能的下降.波纹唇鱼在热应激条件下的免疫功能下降可能是导致其死亡的原因,这为波纹唇鱼资源保护和人工养殖技术提供了理论支持.     

棕点石斑鱼胚胎发育的观察

在观察了自然产卵的棕点石斑鱼胚胎发育过程的基础上,依据各个发育阶段的形态变化特征制订了系统的分期标准.棕点石斑鱼胚胎发育可划分为受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官发生和孵化6个阶段,共23个时期.比较同属其他石斑鱼的胚胎发育发现:不同种石斑鱼胚胎发育速率的差别可能与物种成鱼大小的差别存在一定的联系:石斑鱼卵子油球的状况可能作为卵子质量的参考.此外,养殖条件下棕点石斑鱼自然产卵有较强的规律性,这对其人工繁育和育苗有非常好的帮助.