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RT—PCR检测草鱼呼肠孤病毒的方法研究 总被引:3,自引:0,他引:3
草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)为草鱼出血病的病原.本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)方法.该PCR体系中,上下游引物的最适终浓度为120nmol/L,最适退火温度为52℃.PCR特异性试验表明:所设计的引物只能扩增GCRV的核酸,而不能扩增嗜水气单胞菌BSK-10、WSSV以及正常CIK细胞的DNA或RNA.敏感性试验表明,当GCRV的反转录模板稀释至5-7时,PCR结果还为阳性.用所建立的RT—PCR方法对5份样品进行检测,结果表明本研究建立的RT—PCR检测方法可靠且可行. 相似文献
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将分离自中华鳖主要细菌性疾病如肠道出血性败血症、鳖穿孔病(疖疮病)、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株不同血清型的温和气单胞菌,用3.5%福尔马林溶液处理24 h灭活并添加蜂胶作为佐剂,制成总含菌量为6×109CFU/mL的四价菌苗。同时制备了针对中华鳖IgM的单克隆抗体3H3,并建立了由单抗3H3介导的三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)方法对四价菌苗的免疫效果进行评价。将研制的四价菌苗小批量免疫健康中华鳖,分别于免疫前及免疫后的100 d内,随机采集3只免疫组和1只对照组的中华鳖血清,利用所建立的TAS-ELISA测定血清中抗体ELISA效价。将免疫50 d的中华鳖分成4组,分别用4株病原菌以5LD5(09×106CFU/mL)进行攻毒,并用上述制备的四价疫苗进行免疫预防试验。结果显示:当中华鳖免疫后40 d,血清中抗体ELISA效价最高,为1:(1.28×104);中华鳖免疫后50 d,其免疫保护率均达到100%,同时对照组死亡率为100%。结果表明:以蜂胶为佐剂的鳖用四价细菌灭活疫苗所开展的免疫预防试验取得了良好的免疫效果,能有效地预防养殖鳖类主要病害的发生。 相似文献
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