用正交设计优化甜菜RAPD反应体系

采用正交设计对甜菜的RAPD反应体系进行优化．应用L25（5^6）正交表,研究了Taq、Mg^2＋、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,并进行量化分析,试验结果表明用这种方法建立的甜菜RAPD-PCR优化反应体系为：25μL反应体系中含1×Buffer、1．0mmol／L Mg^2＋、1U TaqDNA聚合酶、0．25mmol／L dNTPs、0．4μmol／L随机引物及25ng DNA模板．     

茂原链霉菌谷氨酰胺转胺酶基因克隆、序列分析及原核表达

以茂原链霉菌(Streptomyces m obaraensis)的基因组DNA为模板,利用PCR的方法扩增出谷氨酰胺转胺酶(Transglutam inase,TGase)的完整基因片段.序列分析结果表明,该片段全长1 246 bp,包含一个完整的ORF,长度1 146 bp,编码395 aa,分子量为44 kD左右.该基因的核酸序列及推导的氨基酸序列同已知微生物来源的若干TGase相比,序列相似性均很高,并且发现与酶催化活性有关的一些motif,如酰胺化位点等;在此基础上,又进一步对其二级结构进行分析并完成了TGase三维结构的建模.将编码TGase酶的基因片段插入到原核表达载体pQE30Xa中,并转化大肠杆菌(E.coliJM109).SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导后该基因得到表达,表达产物的酶活为2.2 U/mL.     

新疆主要梨品种ISSR分析

为建立一种简单、快捷的方法以鉴定梨种质资源，对CTAB法、SDS法和高盐法3种DNA提取方法进行了比较．结果表明，改良的CTAB法较为适合梨基因组DNA的提取．通过对TaqE，Mg^＋，dNTP“模板DNA”和primer不同浓度的优化实验以及对PCR反应程序的优化筛选，建立了适合梨基因组ISSR分析的技术体系．运用该体系对梨品种进行ISSR分析，结果表明，从100对引物中筛选出的10对引物能扩增清晰带且多态性好，从而达到鉴定梨种质资源的目的，并且应用该体系构建了新疆主要梨的遗传图谱和数字指纹图谱．