中华鳖dct基因克隆及表达分析

为了阐明中华鳖酪氨酸酶家族成员dct基因的结构与表达特征,根据Ensembl数据库的中华鳖dct基因序列设计引物,运用RT-PCR技术进行开放阅读框(opening reading frame,ORF)克隆,并进行生物信息学分析,进而采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q-PCR)技术检测正常体色和黄色中华鳖肺、肾脏、裙边和肌肉组织的mRNA表达水平.结果显示中华鳖dct基因ORF区全长1 578 bp,编码525个氨基酸,2种体色鳖dct基因序列完全一致;氨基酸序列分析得C末端无L-亮氨酸基序;N末端含有1个信号肽结构域;预测蛋白(成熟肽)分子质量为56.449 ku,理论等电点为6.67,不稳定指数为38.71,表明DCT蛋白是酸性稳定蛋白;预测DCT蛋白为亲水性蛋白;含有跨膜结构域、类表皮生长因子结构域、层粘连蛋白型类表皮生长因子结构域和2个铜离子结合结构域.系统发育树分析显示,在dct基因进化过程中,中华鳖与绿海龟和锦龟的亲缘关系较近.q-PCR结果表明:dct基因在同一个体各组织中均有表达,肺组织中相对表达量最高,且极显著高于其他3种组织;黄色中华鳖肺、肾脏和裙边组织dct 表达水平与正常体色鳖的相应组织均存在显著性差异.结果表明,中华鳖体色变异与dct基因突变无关,但dct基因表达改变可能对体色变异起了一定的作用.     

拒马河浮游植物群落特征及水质评价

2004年4月至11月对拒马河北京段的浮游植物进行了调查研究,共鉴定出203种浮游植物,隶属8门29科64属,其中以硅藻门种数最多,占种类总数的64.04%.4月至11月硅藻在各采样点出现频度均为100%,其数量占藻类总数的73.92 %,说明硅藻为优势类群,浮游植物的群落结构属于硅藻型.浮游植物的平均密度为77.88×104个/L,呈现出明显的季节变化,并且各采样点也有差别.依据污染指示种判断拒马河的水质为β-中度污染至寡污染水体,依据Shannon-Weaver多样性指数判断总体为寡污染水体.从以上评价指标综合分析,拒马河水质污染较轻,为寡污染水域,但可能有向中污染类型转化的趋势.     

白洋淀鲫外寄生周丛小车轮虫种群动态及车轮虫病的药物治疗

2010年4-10月对河北省白洋淀鲫Carassius auratus体表寄生的周丛小车轮虫Trichodinellaepizootica种群动态进行了研究,还应用中草药和化学药品进行了车轮虫病的药物治疗,以作为生产实践中鱼类车轮虫病控制的参考依据.结果表明,15～30℃周丛小车轮虫在鲫体表都能寄生,5月出现第1个高峰,8月达到第2个高峰(全年的最高峰),说明春夏季车轮虫病爆发的几率较高,表现出明显的季节性.以自然感染车轮虫的麦穗鱼Pseudorasbora parva为材料,分别采用雷丸槟榔散、百部贯众散、复方中草药Ⅰ和Ⅱ、苦参、青蒿和铜铁合剂等药物进行室内模拟的药物治疗实验.结果表明:中草药发挥作用所需时间比较长,一般要连续用药3～5d才有比较好的杀灭效果.用铜铁合剂进行杀灭实验时,实验剂量低,杀灭效果较好,但是实验期间有部分鱼类死亡.上述结果有助于预测车轮虫病发生的季节变动规律,从而及时采取防治措施,还有助于选择合适的治疗药物种类、剂量和施用时间,对车轮虫病进行治疗.     

嗜水气单胞菌噬菌体的分离与性质研究

本文自中华鳖养殖水体中成功分离得到水产常见致病菌——嗜水气单胞菌的噬菌体,并对其理化性质进行了研究。结果表明,该噬菌体对碱性环境具有抗性,但对酸性环境敏感,pH<5时几乎无噬菌斑形成;与宿主菌的吸附时间大约为20 min;对紫外辐射敏感,20 s的紫外照射便使大量的噬菌体死亡;对高温敏感,超过50℃时,噬菌体便失去活性。     

Cu2+ 对钝顶螺旋藻(5pirulina platensis)的毒性影响

利用CuSO     

中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗的研制及免疫效果

为通过免疫防治途径控制嗜水气单胞菌引起的多种中华鳖疾病,采用复乳化-溶剂挥发法制备缓释微球疫苗,通过灌胃方式免疫中华鳖(体质量150～200 g),每只灌胃0.05 g或0.1g,微球含灭活菌约为6.75×1010/g.免疫应答反应结果显示,缓释微球疫苗体外释放可持续近40 d,血清抗体效价、白细胞吞噬率、白细胞吞噬指数及淋巴细胞转化率最高分别可达512,71.25％,1.51和77.25％.结果表明:中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗可以达到注射灭活菌液疫苗的水平,且持续性略优于注射免疫.通过灌胃方式(0.1 g/只)、注射方式分别对中华鳖进行免疫,研究攻毒后的免疫保护率,结果显示注射免疫组和微球疫苗免疫组的免疫保护率均为85％.免疫应答实验和攻毒实验结果分别证明了中华鳖口服缓释微球疫苗免疫的持续性和有效性.     

低氧胁迫对日本沼虾能量代谢和抗氧化代谢的影响

本实验对日本沼虾进行低氧(2±0.5mg/L,8h)胁迫和常氧恢复(7±0.5mg/L,2.5h)处理,通过测定能量代谢及抗氧化体系的相关酶活及其中间代谢产物的浓度,讨论低氧胁迫对日本沼虾能量代谢的影响机理及其抗氧化响应机制。结果显示:随着低氧胁迫时间的延长,肌肉乳酸含量显著高于对照组(7±0.2mg/L);肝胰腺和肌肉中糖原含量及精氨酸激酶(AK)活力则显著低于对照组(P0.05);肝胰腺和肌肉组织谷胱甘肽S-转移酶(GST)活力显著升高(P0.05)。恢复常氧阶段,肌肉中乳酸含量逐渐降低至常氧水平;肝胰腺和肌肉组织糖原含量及精氨酸激酶活力与对照组相比仍显著降低(P0.05);肝胰腺和肌肉组织GST活力逐渐下降,接近正常水平。结果表明:除进行氧代谢外,低氧胁迫和常氧恢复状态的机体也需要进行无氧酵解和磷酸精氨酸代谢为自身供能。日本沼虾抗氧化系统受到低氧胁迫的影响,机体脂质过氧化程度升高,说明机体受到氧化损伤。     

应用多元分析方法评价白洋淀水质现状

应用国家标准《水质-微型生物群落监测-PFU法》获得原生动物群落的特征参数,结合化学监测得到的数据,于2004年4月对枯水期白洋淀水质进行了综合评价.监测结果表明,枯水期白洋淀的主要超标因子是N—NH3,COD,BOD5等,其中N—NH3严重超标.将生物监测和化学监测的结果进行主成分聚类分析发现,府河入淀口南刘庄与圈头2个采样点污染最重,表明府河污水仍是白洋淀的重要污染源,同时淀内村庄产生的内源性污染也已产生重要影响.     

Cu~(2+)对钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)的毒性影响

利用CuSO4 溶液研究了Cu2 + 对钝顶螺旋藻 (Spirulinaplatensis)的毒性影响。Cu2 + 在24和48h时对钝顶螺旋藻的半数有效浓度 (EC50)分别为46.84和23.91μmol/L,对钝顶螺旋藻的安全浓度为1.869μmol/L。与其他藻类相比 ,钝顶螺旋藻对Cu2 + 耐受性较强     

单增李斯特菌致流产小鼠子宫中Th1和Th2细胞因子的变化

为探讨Th1和Th2细胞因子在单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)致小鼠流产中的作用,用LM感染妊娠小鼠和小鼠巨噬细胞,统计胚胎存活率,酶联免疫测定(enzyme linked lmmuno sorbent assay,ELISA)小鼠子宫组织中和巨噬细胞培养基中主要的Th1和Th2细胞因子水平.结果显示,LM诱导的流产小鼠子宫中Th1细胞因子水平显著增加,溶血素O(listeriolysin O,LLO)基因缺陷型(Δ hly)LM感染组胚胎存活率和子宫中Th1、Th2细胞因子水平无显著变化;LM感染的巨噬细胞分泌的Th1细胞因子和白细胞介素-4(interleukin, IL-4)水平显著增加,IL-10水平显著降低,Δ hly LM感染组Th1和Th2细胞因子水平无显著变化.因此,LM感染后子宫中Th1/Th2细胞因子失衡诱导了小鼠流产,这可为临床防治LM诱导的流产提供科学依据.