SARS-CoV灭活疫苗制备及小鼠免疫研究

用Vero细胞大量增殖SARS-CoV病毒, 使用β-丙内酯作为灭活剂灭活病毒后, 用Sepharose 4 FF层析柱纯化病毒颗粒得到灭活疫苗, 并经Western-blot, 质谱, ELISA和电子显微镜检测证实. 用纯化的灭活疫苗加入或不加入氢氧化铝佐剂, 以不同的剂量免疫小鼠, 能够诱导小鼠产生抗体, 加入氢氧化铝佐剂组所产生的抗体高于不加入佐剂组.     

用免疫组化法检测感染乳鼠组织和培养细胞中的SARS病原体

用病理组织学和免疫病理学方法检测严重急性呼吸综合征(SABS)患肺组织标本接种乳鼠和培养细胞的病理变化和病原体。轧鼠的肺、肝脏、脾脏等病变明显,在肺、脾脏、胸腺、肝脏、心肌组织中查到阳性应反应细胞,接种的Vero E6细胞也呈阳性反应。试验方法可用于检测SABS临床标本和实验标本中的病原体,为病原学、动物模型和致病机理的研究提供了基础资料。     

SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察

观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果,为进一步的临床研究奠定基础.将BJ01株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清,经β-丙内酯灭活和超滤浓缩,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗.经HPLC分析其纯度为97.6%,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒.蛋白质印迹(westernblotting)分析表明,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应.纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准.用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体,可阻止SARS病毒在猴体内增殖,且对SARS病毒攻击具有保护作用.在低中和抗体情况下,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象.猴体免疫SARS灭活疫苗后,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫,均未发现局部和全身副反应,表明SARS灭活疫苗对猴体是安全的.     

两种杂交群（BALB／c♂×不同♀系）与BALB／c小鼠繁殖性能及单抗腹水产量的比较

对两种杂交群（ＢＡＬＢ／ｃ♂×ＫＭ，ＢＡＬＢ／ｃ♂×ＬＡＣＡ♀）的繁殖能力及制备单抗腹水的产量同ＢＡＬＢ／ｃ近交系进行比较。实验表明，两杂交群的各项繁殖指标均优于ＢＡＬＢ／ｃ，总离乳鼠数分别为ＢＡＬＢ／ｃ的１．９８、２．０７倍，接种人肺炎支原体Ｆ８瘤细胞，ｋＣＦ１（ＢＡＬＢ／ｃ×ＫＭＦ１小鼠）的腹水产量为ＢＡＬＢ／ｃ的２．５倍，效价相同；制备六种单抗腹水ＬＣＦ１（ＢＡＬＢ／ｃ×ＬＡＣＡＦ１）的产量均优于ＢＡＬＢ／ｃ，分别为ＢＡＬＢ／ｃ的１．１７～２．８８倍，除Ｅ１０抗体滴度低外，其它各抗体效价相同或接近于ＢＡＬＢ／Ｃ。     

SARS相关病毒(BJ01株)的全序列及其比较分析

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新发现的急性传染病. 对一株已确认为SARS病原体的冠状病毒(BJ01)进行了全基因组序列测定, 并与其他已知病毒进行了比较分析. 该病毒基因组全长为29.725 kb, 含11个可读框(ORFs), 由1个稳定区和1个可变区组成, 其中稳定区编码RNA依赖性RNA聚合酶, 包括两个ORFs；可变区含有4个蛋白质编码序列(CDSs), 分别编码病毒的4个结构蛋白(S, E, M, N蛋白). 此外, 可变区还包括5个非典型的预测蛋白(PUPs). 此病毒基因的排列顺序与其他已知的冠状病毒一致. 通过与已知RNA病毒的序列比对, 可以确认该病毒属于冠状病毒科(Coronaviridae). 与GenBank中已知的5个SARS相关病毒全基因组序列的比较分析显示, 已在30个核苷酸位置上检出序列差异, 总体突变率为0.1%, 其中15个变异位点在编码区, 可能会导致蛋白质的氨基酸改变(异义突变). S蛋白中已发现3处可能引起该蛋白质物化特征变化的变异, 而该蛋白质可能参与病毒与宿主间的免疫反应. 与病毒包膜形成相关的M蛋白中则已发现两处氨基酸变化. 进化分析表明, SARS病毒可能不是来源于人类, 但没有证据证明是人为制造的. 为了阐明SARS相关病毒的病因学以及排除其他可能的SARS病原体的存在, 仍需进行更深入的研究.