含内蛋白子融合表达载体的构建与人神经营养因子-3的初步表达

为了构建一个含蛋白质剪接元件的表达载体 ,将 3.38kb的 p Ex Sec 的多克隆位点 (Eco R /Bam H )处插入一个含多个酶切位点的 49bp寡聚核苷酸。然后将 p MYB12 9中 intein- CBD基因片段移插入上述经改造的p Ex Sec I中 ,构建成含内蛋白子的表达载体 p Ex IC。根据人神经营养因子 - 3(h NT- 3)的已知 DNA序列 ,设计含 NdeI/Xho I酶切位点的引物 ,用 PCR法从人全血总 DNA中扩增 h NT- 3,再插入 p Ex IC载体中 ,构建成 p Ex IC- h NT- 3重组质粒。经转化后 ,工程菌 E.coli BL 2 1(DE3) /p Ex IC- h NT- 3在 L B培养基中获得融合表达 ,根据 intein的自剪切原理 ,在还原剂 DTT作用下 ,初步获得了约 14k D的 h NT- 3目的蛋白。     

维生素C二步发酵利用液氮管菌悬液制备种液的研究

在维生素C二步发酵中，所需进罐种液的生产工艺，传统方法是利用菌种保藏斜面通过干接法或湿接法接种所得。菌种斜面的制备周期较长，并且不同批次的斜面质量不同，不利于种液质量及发酵生产的稳定。本文对Ⅱ步菌种通过用液氮管法制备种液用于进罐的工艺进行了研究，并对两种种液生产方法进行了比较。