全长人PPAR-γ的表达、纯化与结构确证

目的建立表达、纯化结构完整的全长人PPAR-γ的方法。方法构建pReceiver-B01-PPAR-γ质粒并转化E．coliBL21（DE3）细胞，诱导表达重组蛋白，优化细胞生长条件；利用亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化重组蛋白；胶内酶解重组蛋白，用离子阱质谱仪分析二维AgilentHPLC-Chip纯化的酶解片段；基于MS／MS搜索IPI、Swiss．Prot、NCBInr和MSDB数据库，鉴定重组蛋白。结果在优化的细胞生长条件（TB介质、37℃、0．8mMIPTG、诱导3h），从每升TB中可获得280mg重组蛋白；两步纯化后，获得176mg、纯度为95％的均质重组PPAR-γ蛋白；经质谱分析和搜索蛋白质数据库，获得均匀地分布在整个PPAR-γ多肽链中的33个阳性肽段，覆盖率为60％，表明重组蛋白为结构完整的全长人PPAR-γ。配体结合活性位点S289、H323、H449和Y473无突变，保证全长人PPAR-γ与配体结合的生物学活性。结论本文所建立的方法能成功用于大量表达结构完整的全长人PPAR-γ，有利于进一步的结构、功能研究和活性配体的筛选。     

动画“夫妇何求”中的幽默元素分析

幽默在动画创作中有不可忽视的地位,没有幽默就没有动画的生命力。"夫妇何求"这部作品采用幽默的各种表现手法,讽刺了生活中的某些夫妇关系,从而达到教育大众的目的。     

艺术设计专业大学生创新实践活动基地建设的探讨

本文通过对创新实践基地构建形式、课程与实践体系建设、创新实践能力培养等几方面的探讨,充分认识到创新实践活动基地对艺术设计专业大学生创新能力培养的重要性。     

点、线、面元素在城市景观设计中的运用——以咸宁市人民广场景观设计为例

点、线、面三要素的和谐组成对于景观平面设计和平面布局有很大的借鉴与指导意义。通过点、线、面三个造型元素来表达景观空间中三维造型要素,让景观设计中的平面造型、视觉层次和空间秩序组织方面更加合理。