费尔干猪毛菜液泡膜氢离子焦磷酸酶基因SfVP的克隆、序列分析及表达

植物液泡膜氢离子焦磷酸酶(Vacuolar H+-PPase,VP)能够酸化液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性方面发挥着着重要作用。本研究采用RT-PCR结合RACE方法,从费尔干猪毛菜中(Salsola ferganica)克隆得到液泡膜质子焦磷酸酶基因SfVP,该基因的cDNA全长2738 bp,包含1个2301 bp的完整开放读码框(ORF),编码766个氨基酸的多肽。氨基酸序列分析表明其属于H+-转运无机焦磷酸酶超家族成员,具有典型的H+-PPase结构域,其疏水性较强,含有12个跨膜螺旋结构。SfVP序列比对显示具有H+-PPase的3个保守序列CS1、CS2和CS3,其中CS1中含有保守的底物催化位点,与烟草的NtVP氨基酸序列相似性为95.3%。半定量RT-PCR结果表明,SfVP的转录表达丰度随着600 mmol/L NaCl处理时间的增加而升高,处理12 h后显著增加并一直维持在较高水平。     

棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化

为进一步探讨脱氢抗坏血酸还原酶的生物学功能,克隆棉花的脱氢抗坏血酸还原酶基因,对该基因进行了原核表达,并对重组蛋白进行纯化和分析。通过RT-PCR方法扩增脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,利用BamH I和Xhol I酶切位点将其克隆至组氨酸(histidine,His)融合蛋白表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(isopropy--βD-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物,并用亲和层析柱纯化重组表达的pET28a-DHAR蛋白。结果表明:重组体PET28a-DHAR经测序和酶切鉴定证实构建成功。导入大肠杆菌BL21进行表达,SDS-PAGE分析目的蛋白高效表达,相对分子量为26 kD左右,并获得了纯化的His-DHAR融合蛋白。     

一种面向SIP洪泛攻击的检测方法

针对SIP洪泛攻击检测与防御的研究现状,结合SIP洪泛攻击的流量和SIP用户的实际环境特点,提出了一种基于泊松分布的自适应网络环境变化的检测方法,包括参数初始化、基于概率密度的检测机制和SIP消息过滤器。根据泊松分布和正态分布建立请求消息数目模型,利用概率密度和检测因子建立检测机制可信度,SIP消息过滤器利用指数加权移动平均(EWMA)机制解决因为网络环境的变化导致检测效率下降问题。模拟实际的SIP网络环境进行建模,采用SIP模拟呼叫器发起不同概率的呼叫模拟不同的网络状况。实验结果表明,设计的方法能够实时地检测SIP洪泛攻击,有效地改善针对不同时间段的SIP洪泛攻击的检测效率,适应复杂的网络环境。     

层次分析法在电气安全评价因素权重分配中的应用

层次分析法是一种将难于定量化的复杂问题,逐层分解为一系列可定量化的简单问题,从而进行较简单求解的数学方法,该方法是一种常用的系统分析、系统评价方法.介绍了层次分析法的原理和方法,通过一实例,探讨和应用层次分析法在考察和系统分析某车间电气安全主要影响因素后,对其进行了综合安全评价.     

棉花腈水解酶基因GhNIT响应非生物胁迫和激素的表达分析

腈水解酶是植物中调控生长素合成色胺(Tryptamine,TAM)途径的关键酶,在生长素的合成及进一步调控植物发育和逆境胁迫响应过程中发挥着重要作用。为了认识腈水解酶在植物生长发育中的功能,本研究在前期获得棉花腈水解酶基因GhNIT的基础上,分析了该基因参与棉花纤维发育的表达特征及组织特异性特征,结果表明:Gh NIT基因在棉花开花后16 d和25 d的纤维组织中及花器官(花瓣和花药)中具有较高的表达。克隆获得该基因1500 bp的启动子序列并进行了顺式作用元件分析,pGhNIT启动子包含典型的核心元件TATA框和CAAT框,此外,还包含TC-rich repeats、MBS等元件,尤其是包含许多响应非生物胁迫和激素的元件如热激、干旱和氧化等胁迫响应元件以及赤霉素(Gibberellic acid,GA)和光响应元件,如Box-4、Box-1、G-box等。pGhNIT启动子元件组成分析结果暗示该基因的表达可能受非生物胁迫和植物激素的诱导。进一步以棉花幼蕾为材料进行干旱、高温、低温、黑暗、氧化胁迫等逆境处理,及赤霉素和生长素处理,分析Gh NIT基因的表达特征,结果表明:GhNIT在4℃处理3 h后被显著诱导表达,且其在黑暗处理16 h再恢复光照后表达量增加;此外,Gh NIT的表达显著受高温、聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)和H2O2诱导;在GA处理2 h和吲哚-3-乙酸(Indole-3-cetic cid,IAA)处理1 h后,GhNIT的表达显著上调。本研究结果可为深入研究腈水解酶参与棉纤维发育及调控植物生长发育的重要功能提供良好参考。     

体育教学中应注重培养学生自我锻炼能力

高校体育教育是为人体提供根本保证,而学生自我锻炼能力的培养是通过体育教育来完成的,因此,要促进学生身心发展,增强体质,就要注重培养学生的自我锻炼能力,为终身体育奠定基础.     

基于P2P的SIP系统体系结构的研究

P2P网络结构区别于Client/Server结构或Browser/Server结构最显著的特点是整个网络不存在中心节点(或中心服务器),其中的每一个节点大都同时具有信息消费者、信息提供者和信息通讯等3方面的功能.而目前的SIP系统是一种C/S模式的网络结构,可扩展性和健壮性差.详细地分析了P2P和SIP的关键技术,研究了怎样将P2P架构融合到SIP系统中提高SIP系统可靠性,扩展性,健壮性,实现零配置.最后,提出了一种基于P2P的SIP系统体系结构的详细方案.基于P2P的SIP系统支持基本的用户注册,呼叫建立和支持语音、视频和多媒体通信等高级服务.