废水处理系统中功能菌株特异分子标记

用40条10碱基随机引物对油脂化工废水处理系统中分离到的降解脂肪酸和脂肪胺功能菌株FA-2。FA-3及对照菌株进行RAPD分析。筛选出长度为700bp的FA-2的特异性片段,并克隆到pMD 18-T载体上．根据测序结果,设计了1对SCAR(sequence characterized anlplfied region)引物,通过SCAR-PCR反应,获得SCAR标记,并通过对20个培养样品进行PCR扩增,验证了标记特异性．结果表明该标记可作为特异的分子标记用于污水处理系统中功能菌株FA-2的监测．     

反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse line probe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3'、5'对称加有poly-C的特异性探针和5'标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1 ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5％以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100％,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09％(103/105)、100％ (43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.     

肝片吸虫保护性抗原基因在卡介苗中的表达

用ECoR　I酶切合肝片吸虫保护性抗原基因FH3的重组质粒pUC18／FH3，回收FH3(约1．0kb)片段并测定其碱基序列．FH3片段以正确相位插入到E．coli—分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV261中，构建含有肝片吸虫保护性抗原基因的重组穿梭质粒．通过电转移法转化卡介苗，斑点杂交实验汪明，重组卡介苗中含有此抗原基因．热诱导FH3基因在卡介苗中的表达，并对基图表达产物进行别SDS—PAGE分析．结果显示，表达产物相对分子量为22kD．     

转生长激素基因彩鲫(Colorful Curcain carp)的获得及检测

转基因育种技术加快了鱼类育种速度,已成为鱼类分子生物学研究的重点．以往用于转基因鱼研究的基因元件基本上都是来自哺乳动物,从基因安全的角度讲,构建全鱼“元件”的转基因鱼是转基因鱼市场化的前提．作为观赏鱼类的彩鲫,色彩丰富,体形优美,但其生长速度缓慢,通过转基因方法可望生