人胎盘G—蛋白ab3a cDNA的克隆

为了获取全长的小分子G－蛋白Rab3a，以用于研究Rab3a与其他蛋白相互作用关系，本实验以人胎盘总cDNA为模板，PCR扩增到人Rab3a cDNA全编码区。产物回收后克隆于质粒pYESTrp2的BamHI/Xhol位点，测序结果表明，本实验获得的Rab3a cDNA包含了起始和终止密码子。与PCR引物设计的参照Rab3a比较有5个核苷酸变异，与翻译的氨基酸序列完全一致。由此表明本实验获得的Rab3a cDNA可用于进一步研究。     

人胎盘G-蛋白Rab3a cDNA的克隆

为了获取全长的小分子G-蛋白Rab3a,以用于研究Rab3a与其他蛋白相互作用关系,本实验以人胎盘总cDNA为模板,PCR扩增到人Rab3a cDNA全编码区。产物回收后克隆于质粒pYESTrp2的BamHI/XhoI位点,测序结果表明,本实验获得的Rab3a cDNA包含了起始和终止密码子。与PCR引物设计的参照Rab3a比较有5个核苷酸变异,与翻译的氨基酸序列完全一致。由此表明本实验获得的Rab3a cDNA可用于进一步研究。     

神经生长抑制因子在体外可抑制嗜铬细胞瘤株PC12

神经生长抑制因子（GIF）又名金属硫蛋白－Ⅲ，是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白。采用MTT还原测定法测定了重组GIF对嗜铬细胞瘤株PC12和成神经细胞瘤株SY5Y生长的影响：重组GIF在体外可抑制PC12的生长；在浓度为100mg/L时，对PC12的抑制率约为25％；而当浓度为300mg/L时，对PC12的抑制率达到约50％。表明PC12可作为神经元模型来测定GIF的神经元生长抑制活性。GIF在体外不能抑制常用作神经细胞瘤株模型的SY5Y，表明GIF并不具有广谱的抑制神经细胞瘤株的作用；GIF抑制PC12可能就是针对它所具有的胆碱能神经元的某些特性。这对于揭示GIF的神经元生长抑制活性的作用机制有着重要意义。     

金属硫蛋白结合铅离子的竞争反应和置换反应研究

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到两种亚型的金属硫蛋白(MTs)：Zn₇MT-Ⅰ和Zn₇MT-Ⅱ,在酸性条件下脱金属得脱金属硫蛋白(apoMTs)。从镉诱导的家兔肝脏中分离纯化得：Zn₂Cd₅MT-Ⅰ和Zn₂Cd₅MT-Ⅱ。采用圆二色性(CD)光谱法和紫外(UV)吸收光谱法研究金属硫蛋白结合铅离子的竞争反应和置换反应。竞争反应显示：Pb²⁺和Zn²⁺竞争结合apoMT-Ⅰ形成的是金属混配的金属硫蛋白;而apoMT-Ⅱ的金属结合位点则完全被Pb²⁺所占据,表明apoMT-Ⅱ对Pb²⁺更为敏感。置换反应显示：Pb²⁺既不能置换出Zn₇MT-Ⅰ中的Zn²⁺,也不能置换出Zn₇MT-Ⅱ中的Zn²⁺;但Pb²⁺能完全置换出Zn₂Cd₅MTs中的Zn²⁺,且其置换行为也存在着亚型上的差异。提示Zn₂Cd₅MT-Ⅱ可能有效地解铅中毒。