MTT比色法和ELISA方法检测重组人rhM-CSF的活性

应用家蚕幼虫表达的重组人巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＭ－ＣＳＦ）为材料，探索了ＭＴＴ比色法和ＥＬＩＳＡ方法测定ｒｈＭ－ＣＳＦ活性的最佳实验条件，并将这两种方法测定ｒｈＭ－ＣＳＦ精品、粗品和原料的结果与软琼脂集落刺激法所得结果进行了比较。结果表明：ＭＴＴ比色法灵敏度较高，结果稳定可靠，周期较短，可用于批量检测和精确定量。ＥＬＩＳＡ方法简便快捷，特异性高，适用于大批量检测。可根据不同检测要求选择不同的检     

阿拉拉特小麦染色体的C-带和N-带分析

应用Ｃ－分带和喧技术对阿拉拉特小麦（Ｔｒｉｔｉｃｒｍ ａｒａｒａｔｉｃｕｍ Ｊａｋｕｂｚ,２ｎ＝２８,Ａ＾ｂＡ＾ｂＧＧ）的根尖细胞进行染色体构成分析,结果分析,结果表明：（１）Ｃ－分带和Ｎ－分带方法均可以使阿拉拉特不麦染色体显示稳定带型;（２）根据带型可以明确区分阿拉拉特不麦各条染色体;（３）阿拉拉特小麦Ａ、Ｇ组染色体带型与普通小麦Ａ、Ｂ组染色体带型差异明显,利用分带方法可以区分阿拉拉特小麦与普通     

人M-CSF与SCF融合蛋白的构建及其在昆虫细胞中的表达

应用重组DNA技术构建M-CSF与SCF的融合基因并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pVL1392中,通过与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)DNA共转染草地夜蛾细胞Sf9,融合基因插入AcNPV基因组.重组病毒感染单层Sf9细胞后,表达产物分泌到胞外培养液中,用MTT比色法和TF-1细胞株可检测到表达产物与IL-3的协同效应.上述研究为开发具有应用价值的新型细胞融合因子奠定了基础.     

MTT比色法在检测重组人GM—CSF生物活性中的应用

探索了ＭＴＴ比色法的一系列实验条件，并利用ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ－１，测定了家蚕基因工程生产的重组人ＧＭ－ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的生物活性，并与半固体培养集落刺激法进行了比较。     

鼠伤寒沙门氏菌purB受purR调控的实验证据

通过遗传图和序列同源性分析获得了鼠伤寒沙门氏菌purB核苷酸序列。为揭示鼠伤寒沙门氏菌purB是否受purR调控,对purB基因的PUR box进行了功能分析。PCR扩增野生型PUR box和其第14位保守碱基发生突变（C→T）的DNA片段。分别与从鼠伤寒沙门氏菌野生型菌株LT2提取的P urR粗制品进行了凝胶阻滞实验。结果表明,purB基因的PURbox与PurR阻遏蛋白有很好的结合能力,而突变的PUR box则不能与PurR阻遏蛋白结合。可见,野生型鼠伤寒沙门氏菌purB与嘌呤从头合成途径中其他结构基因一样是受purR基因协同调控的。此外还对不受调控的实验现象的机制做了研究。结果表明purB组成型表达是purB::MudJ基因融合发生在PUR box上游（－554bp)的结果。这一结果还为鼠伤寒沙门氏菌purB基因与其上游ycfC基因属于同一操纵子提供了有力的证据。     

PUR盒与purR自发突变体的分离及其突变频率的比较

在早期的鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成途径调控研究中,曾发现诱变条件下PUR盒的突变频率比purR高出一个数量级.为了进一步对此现象加以研究,文中以purR超阻遏突变体(purR s )为出发株,在以乳糖为惟一碳源的基础培养基上简易、快捷地分离到大量独立的PUR盒(PURbox)和purR自发突变体.对其中5个PUR盒和4个purR突变体作了突变位点分析,结果显示每个突变体的突变位点均发生在预定的靶DNA-PUR盒或purR上.PUR盒和purR突变频率比较表明,虽然两者DNA大小相差两个数量级(1∶100),但自发突变频率之比仅为3∶7.由此,认为PUR盒的高突变频率与诱变无关.在自发条件下,PUR盒同样具有高突变频率.文中对这一奇特现象做了推测性的解释.     

利用分子标记研究小麦遗传群体的赤霉病抗性鉴定方法

针对小麦赤霉病抗源苏麦3号构建的两个小麦重组自交系遗传群体苏麦3号／Alondra和苏麦3号／安农8455，采用单花接种、表土接种及自然发病3种不同的接种方法进行小麦赤霉病抗性接种鉴定，并根据苏麦3号赤霉病抗性主效QTL的连锁分子标记Xgwm 493和Xgwm 533．1分别对群体进行抗性连锁分析．检测结果表明，在温室单花接种所获得的鉴定数据中，标记的赤霉病抗性连锁效应最高，P值分别小于0．0001，抗性鉴定结果最为准确．研究表明，对小麦赤霉病这种由数量性状控制，受外界环境影响较大的真菌病害进行抗扩展性的遗传研究，应采用控温控湿条件下的单花滴注接种鉴定方法最为合适．     

人尿激酶原变体(K151E,R154G)在家蚕中的高效表达

Ｔｈｅｓｉｌｋｗｏｒｍｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｉｓａｗｅｌｌ ｋｎｏｗｎｅｃｏｎｏｍｉｃａｌｗａｙｏｆｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｒｅｃｏｍ ｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ .Ｉｎｔｈｉｓｌｅｔｔｅｒ ,ｔｈｅｃＤＮＡｏｆａｍｕｔａｎｔｏｆｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ(ｒｓｃｕ ＰＡ) ｇｅｎｅ ,ｍｓｃｕ ＰＡ(Ｋ1 5 1Ｅ ,Ｒ1 5 4Ｇ) ,ｗａｓｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｏｉｎｃｌｕｄｅｔｈｅｎａｔｕｒａｌｕｒｏｋｉｎａｓｅ(ｕ ＰＡｏｒＵＫ)ｓｉｇ…     

丝氨酸蛋白酶抑制剂可抑制昆虫细胞表达的蛋白质降解

干细胞因子是一种多功能细胞因子,能在多级造血水平与其他细胞因子协同作用促进造血干/祖细胞及各种血细胞的存活、增殖和分化.重组人二连体干细胞因子具有比干细胞因子单体更高的比活,可以避免副反应.重组人二连体干细胞因子在Sf9细胞和大肠杆菌中表达时,发现有特异性降解.片段缺失实验证实切割位点位于重组人二连体干细胞因子的145位到165位氨基酸之间.丝氨酸蛋白酶抑制剂aprotinin和PMSF能抑制这种特异性降解.试验了不同浓度的aprotinin和PMSF对Sf9细胞存活和重组人二连体干细胞因子产量的影响,显示当aprotinin的浓度为1.0μg/mL时,重组人二连体干细胞因子的产量是没有加aprotinin时产量的2倍,而且aprotinin可以完全抑制这种特异性降解.     

二连体人干细胞因子基因的构建及其在昆虫细胞中的表达

应用DNA重组技术构建两端为人干细胞因子 (hSCF) 1～ 16 5肽编码区 ,中间为柔性连接肽 (GGGGSGGGGSGG)编码区的头尾相连的二连体基因 (dSCF) ,并将其插入杆状病毒转移载体 pVL1392中 .重组转移载体 pVL1392 dSCF与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒AcNPVDNA共转染草地贪夜蛾细胞Sf9,经胞内同源重组和 4轮筛选获得纯净的重组病毒AcNPV dSCF .重组病毒感染Sf9单层培养细胞时 ,主要以分泌形式表达二连体蛋白 ,经MTT比色法测得dSCF的表达量约为 1180units/3× 10 6cells .WesternBlotting鉴定了昆虫细胞表达的重组人二连体干细胞因子 (rhdSCF) ,两种主要产物的分子量分别为 4 0kDa、4 9kDa .