纸质包装箱的灭菌条件及其在屏障环境下的存放时限

目的研究实验动物纸质包装箱的灭菌条件及其在屏障环境下的存放时限。方法将包装箱用预真空高压蒸汽法灭菌,比较不同灭菌时间的灭菌效果;将彻底灭菌的包装箱在屏障环境下存放,检测不同存放时长下细菌生长情况。结果采用预真空高压蒸汽灭菌法抽真空3次、干燥5 min、121℃、25 min的灭菌条件能较彻底灭菌;存放时间3天以内,细菌检出率低。结论要实现包装箱灭菌彻底,灭菌时间需25 min;灭菌后的包装箱最好随灭随用,在屏障环境下存放的时间以不超过3天为宜。     

基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

目的 构建基于Cre- LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、 Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果 成功构建了基于Cre- LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL /6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg (EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论 成功建立运用Cre- LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。     

转基因动物模型在ALS发病机制研究及药物疗效观察中的应用

肌萎缩性脊髓侧索硬化症（Amyotrophic Lateral Sclerosis）简称为ALS,是严重危害患者身心健康的神经退行性疾病。本文简述了ALS的研究近况,着重介绍了转基因动物在该病机理研究和治疗性药物筛选方面的重要作用,转基因动物的使用和典型模型动物的商品化大大促进了该领域的研究进程。     

CB6F1-Tg( HRAS) Nifdc 小鼠与 CByB6F1-Tg( HRAS)2Jic 小鼠的脏器及血液生理指标测定与比较分析

目 的 比 较 自 主 建 立 的 C57BL / 6J-Tg ( HRAS) 转 基 因 小 鼠 与 BALB / cJ 小 鼠 的 杂 交 1 代 小 鼠 CB6F1-Tg( HRAS) Nifdc(简称 CB6F1-NIFDC)与日本转基因小鼠模型杂交 1 代小鼠 CByB6F1-Tg( HRAS) 2Jic( 简称 CB6F1-CIEA)的脏器及血液生理指标异同,丰富自建模型的基础数据。 方法 选取 8 周龄的 CB6F1-NIFDC 及 CB6F1-CIEA 各 10 只,雌雄各半,活体称体质量,随后解剖并测定其主要脏器质量及血液生理指标。 结果 自主建立的CB6F1-NIFDC 及日本引进的 CB6F1-CIEA 小鼠模型的部分脏器质量和血生理参数有差异性,脏器质量结果表明,雌性小鼠的心、肝、肺、左右肾等指标存在一定差异;雄性小鼠的肝、肺、左右肾、胸腺、左右睾丸指标质量有差异。 22项血液生理指标方面,雌性小鼠在 RBC、HGB 等 7 项指标差异极显著( P<0. 01) ;而雄性小鼠在 RBC、HCT 等 5 项指标差异极显著( P<0. 01) 。 结论 本文测定了两种模型脏器指标及生理指标,为自建模型在新药安全评价实验中的应用提供参考。     

自建 Tg. C57-ras V1. 0 小鼠模型与日本 Tg. rasH2小鼠遗传学及其杂交 1 代生物学特性比较

摘要:目的 比较自主建立的 Tg. C57-ras 小鼠与日本 Tg. rasH2 小鼠模型的遗传学及 Tg. C57-ras 转基因小鼠与BALB / c 小鼠的杂交 1 代小鼠(简称 CB6F1-NIFDC) 与日本 Tg. rasH2 转基因小鼠模型杂交 1 代小鼠(简称 CB6F1-CIEA)的生物学特性,为国内药物安全评价机构提供致癌性模型的多元化选择。 方法 对两种模型的遗传学及生物学特性进行比较,包括模型构建方法、转录水平、蛋白水平、生长曲线、血液生理数据等。 结果 遗传学特性:两种模型均采用转基因方法构建,转入 c-Ha-ras 基因序列无实质差异,拷贝数仅相差一个;两种模型的不同脏器在mRNA 水平基因表达具有相似性;日本模型肺组织的蛋白水平稍高于自主建立模型,但无统计学差异。 生物学特性:根据文献分析两种模型杂交 1 代的生长曲线有差异,但在致癌实验周期内两模型体质量差别不大;血液生理指标有部分差异。 结论 通过遗传学及生物学特性比较,自建模型可作为临床前药物致癌性评价的候选模型。     

R26-hSCARB2 小鼠生理生化指标的测定与分析

摘要:目的 测定 R26-hSCARB2 小鼠的血液生理生化指标,分析性别和周龄对上述指标的影响。 方法 分别取 20只 4 周龄和 8 周龄的 R26-hSCARB2 小鼠,雌雄各半。 取静脉血后,测定 22 项血液生理指标和 12 项血液生化指标,使用统计学方法分析各指标在性别和周龄间的差异。 结果 检测的 22 项生理指标和 12 项生化指标中,4 周龄的R26-hSCARB2 小鼠雌雄之间在淋巴细胞绝对值( LYM) 、 中性粒细胞百分率 ( NEUT% )及尿素( BUN)指标上具有显著差异( P<0. 05) ,白细胞计数( WBC) 、总胆固醇( CHO) 及甘油三酯( TG) 指标上具有极显著差异( P< 0. 01) 。 8 周龄的 R26-hSCARB2 小鼠雌雄之间在 WBC、LYM、单核细胞百分率( MON% ) 、嗜碱性粒细胞百分率(BAS% ) 、总蛋白( TP) 、磷( P)及 CHO 指标上具有极显著差异( P< 0. 01) ;在血小板计数( PLT) 、血小板分布宽度( PDW) 、中性粒细胞绝对值( NEUT) 、嗜酸性粒细胞百分率( EOS% ) 、白蛋白( ALB) 、碱性磷酸酶( ALP) 、葡萄糖( GLU) 及 TG 指标上,具有显著差异( P<0. 05) 。 不同周龄的 R26-hSCARB2 小鼠在 WBC、红细胞分布宽度( RDW) 、PLT、LYM、单核细胞绝对值( MON) 、淋巴细胞百分率( LYM% ) 、MON% 、丙氨酸氨基转移酶( ALT) 、天冬氨酸氨基转移酶( AST) 、TP、ALB、ALP、BUN、肌酐( CREA) 、葡萄糖( GLU) 、钙( Ca) 、P、CHO 及 TG 指标上具有极显著差异( P< 0. 01) ,在血小板压积( PCT) 、平均血小板体积( MPV) 、NEUT 及 NEUT% 指标上具有显著差异( P< 0. 05) 。 结论 性别和周龄都会影响R26-hSCARB2 小鼠的 血 液 生 理 生 化 指 标, 但 周 龄 对 该 小 鼠 的 血 液 生 理 生 化 指 标 的 影 响 更 显 著。 本 实 验 为R26-hSCARB2 小鼠的研究应用提供了基础的数据。     

遗传修饰小鼠模型基因型鉴定技术要点介绍

摘要:近年来,随着生物医学研究及基因编辑技术的发展,出现了越来越多的动物模型。 由于制作方法的不同,其基因型鉴定技术方法也不一样,导致基因型鉴定的工作存在混乱无序的现象。 本文根据遗传修饰小鼠模型制作方法进行分类,介绍了随机转基因小鼠、条件性基因敲入小鼠、基因敲除小鼠三类常见模型的基因型鉴定技术要点,规范遗传修饰小鼠模型基因型鉴定方法,保证动物实验材料的准确性,从而推动动物模型在基础和应用科技领域的应用与发展。     

动物实验管理系统的设计与开发

主要讲述动物实验管理系统的开发背景,设计思路,动物实验管理系统各模块功能介绍以及技术实现。     

B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠在MNU 给药后的体质量、脏器质量、血液学及血生化指标的测定

摘要: 目的测定自主建立的p53 + / － 基因敲除小鼠( B6-Trp53tm1 /NIFDC) 在N-甲基-N-亚硝基脲( N-Methyl-Nnitrosourea,MNU) 给药后体质量、脏器质量、血液学及血生化指标,为临床前药物安全评价致癌性实验短期体内替代试验候选遗传修饰动物模型提供背景性数据。方法共设计4 个组: 阴性对照组( 野生型小鼠) 给予生理盐水、溶媒对照组( B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠) 给予枸橼酸缓冲液、MNU 组1 ( B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠) 给予75 mg /kg MNU、MNU 组2( 野生型小鼠) 给予75 mg /kg MNU,阴性对照组和MNU 组2 每组野生型小鼠各20 只,雌雄各半,溶媒对照组和MNU 组1 每组B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠各20 只,雌雄各半,测定其体质量、主要脏器质量、相对脏器质量、血液学及血生化指标,并进行统计分析。结果MNU 组1、MNU 组2 动物体质量降低与阴性对照组、溶媒对照 组相比都存在显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。MNU 组1、MNU 组2 动物心脏、肝脏、脾脏、肺脏、胸腺和颌下腺的绝对质量与阴性对照组、溶媒对照组相比有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。MNU 组1 和MNU 组2 动物心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺和颌下腺的相对质量与阴性对照组、溶媒对照组相比有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。MNU 组1 和MNU 组2 动物均发现NEU、LYM%、LUC%、ＲBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、ＲDW、HDW、CHCM、CHDW、PDW、MPV 及PLT 等15 个指标与阴性对照组和溶媒对照组相比有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。另外,MNU 组1 和MNU 组2 均发现TP、ALB、CＲEA、UＲEA、TCHO、TG、CA 等7 个指标与阴性对照组和溶媒对照组有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) ,MNU 组2 的AST 与阴性对照组和溶媒对照组有显著性升高( P ＜ 0. 05) ,但MNU 组1 和MNU 组2 组间没有显著性统计学差异。结论本文测定并分析了自主建立的p53 + / － 基因敲除小鼠( B6-Trp53tm1 /NIFDC) 和野生型小鼠分别给予MNU 及枸橼酸缓冲液后的体质量、脏器质量、血液学及血生化指标,该模型有望将来用于临床前药物安全评价致癌性实验短期体内替代试验。     

p53+ /－ 基因敲除小鼠的脏器质量及血液学参数测定

摘要: 目的测定自主建立的p53+ /－ 基因敲除小鼠的脏器及血液生理生化指标,并比较周龄、性别对各项指标的影响。方法选取4 周龄和8 周龄的p53+ /－ 基因敲除小鼠各20 只,雌雄各半,测定其主要脏器质量及血液生理指标。结果不同周龄和性别的p53+ /－ 基因敲除小鼠部分脏器质量和血生理生化有差异性。4 周龄和8 周龄小鼠在体质量等这21 项指标上都有差异显著性( P ＜ 0. 01) ,且在左肾上腺等8 项指标上差异存在统计学意义( P ＜ 0. 05) 。4 周龄的雌、雄小鼠在ＲDW、总胆固醇( CHO) 这2 项指标上差异存在显著性( P ＜ 0. 01) ,仅肺这1 项指标上差异有统计学意义( P ＜ 0. 05) ,其余指标之间无明显差异; 而8 周龄雌雄小鼠在体质量等16 项指标上雌雄间都有显著性差异( P ＜ 0. 01) ,在HCT 等9 项指标上存在差异( P ＜ 0. 05) 。结论本文测定并比较了不同周龄及性别的p53+ /－ 基因敲除小鼠的脏器及血液生理生化指标,为该模型的合理利用及商业化供应提供了背景数据。