PCR扩增人外周血淋巴细胞抗体基因的探讨

采用ＲＴ－ＰＣＲ法,以一组人抗体重链和轻链简并引物,直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Ｆｄ和κ轻链基因．结果提示：用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取细胞总ＲＮＡ,以Ｏｌｉｇ（ｄＴ）引导合成ｃＤＮＡ第一链,再经ＰＣＲ扩增的方法,是值得优先采用的方法．细胞总ＲＮＡ的提取不必追求高纯度,少量外周血即足以满足构建抗体库所需,简并引物可获得良好的扩增效果,为构建噬菌体抗体库奠定了基础     

食管癌组织HLA-I类抗原及相关分子的表达及意义

为探讨HLA抗原及相关分子在食管癌中的表达水平及其与病理学分型的关系，应用了5种HLA抗原及相关分子单抗，采用免疫组织化学方法(ABC法)对江苏省83例食管癌组织石蜡切片进行检测并结合肿瘤的临床病理资料综合分析．得出结果：HLA—B／C、HLA—A、β2m、LMP2、calnexin各分子的下调率分别为12％、25．3％、15．7％、19．3％、20．8％；丢失率分别为29％、33．7％、49．3％、24．1％、41．5％．其中LMP2位点的表达与肿瘤分型相关，随着食管癌分化程度降低，下调率增加．27例病例有淋巴结转移，但统计学分析各分子的表达与转移均无明显相关性．研究表明，食管癌中有明显的HLA—Ⅰ类分子表达下调或缺失．这种改变不利于T细胞依赖性的免疫治疗．     

高效电转化率条件的探索

对影响ＤＮＡ电转化效率的主要因素进行探索,结果表明：在相同的电场强度、电阻入电容条件下,电中时间的长短对电转化交谊级较大影响,电脉冲时间太长或太短均使转化效率降低;用对数生长早中期的细菌制备感受态细胞,经液氮速冻后储存于－７０℃,能获得高转化效率。     

PML分子不同剪接体的分型及其应用

早幼粒细胞白血病(Promyelocytic Leukemia,PML)基因位于15号染色体,含有9个外显子,通过对内含子不同的剪接方式产生7大类20余种不同的PML剪接体.为对PML不同剪接体进行分型,针对PML各剪接体C末端设计5对型特异性引物,通过PCR扩增产物的有无及大小来判断PML分子的型别.利用设计的引物,通过对已知类型的PML质粒进行分型,确定了分型引物的可行性.对一株肝癌细胞系QGY7701中表达的PML分子进行分型,发现其为PML剪接体IV型与II型的混合型.研究表明,利用所设计5对引物的扩增,可以判断出某种组织或细胞中表达的PML分子剪接体型别.