D-核糖提取工艺的研究

核糖发酵液用饱和醋酸铅除去菌体、杂蛋白,然后通过ＡＢ－８ 树脂进行脱色,脱色液分别经过００１×７,２０１×７ 树脂脱盐后,经过浓缩,于２０１×４ 硼酸型阴离子交换树脂进行分离。以０．０２ ｍ ｏｌ／Ｌ四硼酸钠缓冲液为洗脱液,将其中核糖流分浓缩、加甲醇除去硼酸根后,加乙醇减压浓缩得到白色核糖固体。     

火菇素纯化流程的改进

利用前文建立的火菇素免疫单向琼脂扩散定量检测技术 ,对火菇素纯化流程作了定量监测 ,针对一、二、三等金针菇原料的不同特点 ,对纯化技术作了相应改进 ,可分别使火菇素的提取率提高 71 .3% ,1 87.6%和 2 1 7.9% ,1Kg风干子实体的火菇素产量达到 1 0 9.1mg ,52 .3mg和 2 7 0mg .     

火菇素抗体探针的制备与高灵敏度的火菇素定性技术的建立

从金针菇子实体浸提液中提取了抗癌活性物质火菇素 ,将纯化的火菇素用Freund佐剂乳化后注射到新西兰白兔体内 ,经数次加强免疫后采血并分离了抗血清 ,应用免疫学方法检测与硝酸纤维素滤膜上抗原蛋白相结合的抗体探针 ,检测极限可达 2 0 - 4 0pg的抗原信号     

火菇素cDNA的初步免疫学筛选

火菇素是一种具有抗癌活性的简单蛋白，从金针菇中分离纯化火菇素的方法如下：金针菇子实体经乙酸液浸提、硫酸铵和乙醇分级沉淀后，通过DEAE-Sephadex A-50除去色素和部分杂蛋白，最后经CM．Sephadex C-50离子交换柱层析分离，得到了电泳均一的纯化蛋白．以火菇素为抗原制备的抗血清为探针对构建的金针菇cDNA表达文库进行免疫印记筛选，对获得的阳性克隆进行PCR、酶切以及在大肠杆菌中诱导表达等初步鉴定，为进一步确证、克隆火菇素基因打下了基础．