卵巢局部瘦素受体缺失对卵巢生殖功能影响的分子机制

为探索卵巢局部瘦素信号缺失对卵巢自身功能的影响,进行以下研究:①对瘦素长受体(LR)缺失(LR-)的雌性B6.Cg-m+/+Leprdb小鼠及其同窝出生的有完整LR的雌性野生型C57BL/6J小鼠(LR+)进行卵巢交互移植,在同一雌性野生型C57BL/6J小鼠体内构建两侧卵巢不同的LR基因型,分别标记为KO(卵巢LR-)、WT(卵巢LR+)两组.②监测卵巢的周期变化;动情周期恢复后各组均予GnRH-a降调节后取材,RT-PCR检测分子生物学指标.结果显示:①卵巢移植术后小鼠仍有正常的动情周期,经GnRH-a降调节后,小鼠失去动情周期的变化;②RT-PCR结果显示,KO组卵巢中Star、Cyp17、Cyp19、Jak2、Star3、Pias3 mR-NA的表达量均明显低于、WT组,Ob-Rb mRNA在KO组卵巢中无表达,WT组有表达,Socs3 mRNA在两组间表达无明显差异.研究表明,卵巢内存在完整的瘦素信号传导通路;瘦素受体缺失及外周糖脂代谢环境对卵巢功能的影响并不重要,重要的是下丘脑-垂体对卵巢的调控作用,其对卵巢作用的分子机制是调控卵巢甾体激素合成酶基因的表达.     

不同表型的多囊卵巢综合征患者雄激素代谢的差异研究

多囊卵巢综合症是妇产科最常见和最复杂的生殖内分泌疾病,本文研究不同类型的多囊卵巢综合征患者雄激素代谢的差异,从而探讨多囊卵巢综合征(PCOS)Rotterdam标准的不同诊断指标,对我国患者卵巢雄激素合成的影响,具有重要的理论意义和临床应用意义.用尿促性素(150 IU)和绒促性素(5000 IU),对8例正常对照组、PCOS患者的17例多囊组(Ⅰ组)、14例高雄组(Ⅱ组)和21例复合组(Ⅲ组)妇女行卵巢兴奋试验,观察孕酮、17羟孕酮和雄烯二酮的血浓度的变化,并计算雄激素合成关键酶-17α羟化酶和17,20裂解酶的功能状态和活性.PCOS的Ⅲ组和Ⅱ组的雄激素合成酶均亢进,以前者更加明显;PCOS的Ⅰ组和正常对照组的雄激素合成酶相似,基本正常.PCOS的单纯卵巢多囊形态学并无雄激素合成的异常,但综合分析,仍可诊断为PCOS,Rotterdam标准适用我国患者.     

绒毛膜促性腺激素刺激对多囊卵巢综合征患者血管活性因子的影响

探讨促排卵治疗对多囊卵巢综合症(PCOS)患者血管活性因子血管紧张素-Ⅱ(AT-Ⅱ)、白介素-6(IL-6)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响.21例PCOS患者与8例正常女性在自然或人工月经周期的第2 d卵泡期进行绒毛膜促性腺激素(HCG)促排卵,于试验前及试验后3、6、12、18、24 h静脉取血,放免法测定血清AT-ⅡI、L-6I、GF-1浓度.HCG刺激后PCOS组的血清AI-Ⅱ水平在各取血时点均升高,但只有3 h取血点是显著升高(P<0.05).PCOS组HCG刺激后各时点的血清AI-Ⅱ水平均高于对照组,也只有3 h取血点是显著高于对照组.血清IL-6及IGF-1水平在试验前后各时间点间差异均无显著性.结果提示HCG刺激促进PCOS患者外周血AT-Ⅱ水平升高.     

卵泡膜细胞的胰岛素抵抗对其雄激素合成的影响以及胰岛素增敏剂的调控机制

为探索卵泡膜细胞人工诱导胰岛素抵抗后其雄激素合成的变化,以及胰岛素增敏剂曲格列酮、二甲双胍对胰岛素抵抗卵泡膜细胞的调控作用,采用猪卵巢内卵泡膜细胞进行体外培养,地塞米松诱导,构建胰岛素抵抗的细胞模型,用曲格列酮和二甲双胍分别处理模型细胞,检测培养液中葡萄糖和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和雄激素合成关键酶的mRNA表达变化.结果表明:卵巢内卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后能明显增进其雄激素合成能力:曲格列酮、二甲双胍均能降低胰岛素抵抗的卵泡膜细胞的糖代谢异常和雄激素水平.     

孕期高雄大鼠子代实验性多囊卵巢综合征模型构建

通过母体高雄环境建立子代实验性多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,并证明此模型大鼠存在卵巢局部胰岛素抵抗。方法是给孕16d的雌鼠皮下注射丙酸睾丸酮,诱导其子代雌鼠发生PCOS,观察子代大鼠体重、动情周期变化、性激素变化及糖代谢变化、卵巢重量和卵巢形态变化、肌肉组织蛋白印迹测定PI-3K和MAPK通路关键蛋白的表达、卵巢免疫组化和蛋白印迹测定PI-3K和MAPK通路关键蛋白的表达确定。结果显示:①动情周期失去规律变化,提示无排卵;②血清17-OHP,A2,T升高;③卵巢组织学检查可镜下看到早期发育的较多的小卵泡、闭锁卵泡,囊状扩张卵泡明显增加,颗粒细胞层数减少,黄体数量明显减少;④OGTT:1h血糖及胰岛素高于对照组,模型组存在着胰岛素抵抗;⑤卵巢局部PI-3K和MAPK途径关键蛋白有表达;⑥卵巢局部蛋白印迹测定PI-3K和MAPK途径关键蛋白IRS-1,P85,GLUT4降低,ERK1升高。由此表明:①此模型大鼠符合PCOS的诊断标准;②此模型大鼠存在卵巢局部胰岛素抵抗。     

电针对多囊卵巢综合征模型系统的调控

通过母体高雄环境建立子代雌性大鼠高雄激素血症和胰岛素抵抗模型,探讨针刺对孕期高雄化大鼠的治疗效果以及针刺调节卵巢局部胰岛素信号传导关键分子磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK),明确针刺治疗胰岛素抵抗的分子机制。在Wistar雌性大鼠颈背部皮下注射丙酸睾丸酮,连续3d。以其所生雌鼠作为实验对象,观察其体重及动情周期,检测血清性激素,17-羟孕酮(17-OHP)、雄烯二酮(A2)及OGTT试验测血糖、胰岛素水平,然后给予针刺治疗,观察其对生殖与代谢功能的影响。运用免疫组化及蛋白印迹方法,检测骨骼肌和卵巢组织中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI-3K85)、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)、细胞外信号激酶-1(ERK-1)和17羟化酶(CYP17)蛋白表达。结果显示:①模型鼠无排卵,高雄、糖耐量减低,胰岛素抵抗;②针刺可以恢复动情周期,降低体重,降低LH、17-OHP、A2、T水平,升高E2水平;降低OGTT试验1h血糖水平,降低空腹和1h胰岛素水平,降低HOMA指数;③骨骼肌和卵巢局部产生胰岛素抵抗后,相应的IRS-1、IRS-2、PI-3K85和GLUT4的蛋白表达下降,ERK-1、CYP17的表达升高;针刺能逆转蛋白的异常表达。由此得出以下结论:①孕期注射丙酸睾丸酮,所生子代雌鼠有生殖和代谢异常,符合PCOS患者临床特征;②针刺能够降低雄激素,降低血糖,提高胰岛素敏感性,降低体重;③针刺能够调节模型动物骨骼肌和卵巢局部胰岛素信号传导蛋白表达和卵巢局部雄激素合成酶表达。     

鸦胆子油乳对子宫内膜异位症大鼠VEGF的影响

为鸦胆子油乳对子宫内膜异位症模型大鼠血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达的影响及其机理,以雌性Wistar大鼠为研究对象,用自体移植法制作子宫内膜异位症模型,用鸦胆子油乳腹腔给药治疗,疗程结束后观察异位囊肿消失情况,并用免疫组化及蛋白印迹法检测子宫组织中VEGF表达及含量变化情况。结果显示:鸦胆子油乳能使子宫内膜异位囊肿明显减小甚至消失,能抑制子宫内膜组织中VEGF表达。由此得出结论:鸦胆子油乳对子宫内膜异位症大鼠异位囊肿有治疗作用,可能是通过抑制血管生成起作用。     

针刺治疗女性生殖障碍研究现状

 针刺作为一种传统疗法,在中国治疗妇科疾病有着悠久历史。20世纪80年代,针刺治疗女性生殖系统疾病在西方医学也确立了合法地位,其学术成果现在已经为国际学术界公认。本文概述了针刺在女性生殖障碍领域应用的国内外研究现状,包括国际最新研究进展和发展趋势、国内研究现状和水平,尤其是针刺在体外受精-胚胎移植和多囊卵巢综合征中的应用,包括针刺对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中胚胎着床及妊娠率的影响,针刺治疗PCOS机制研究,针刺对PCOS促排卵的临床疗效;分析国际竞争态势,分析国内研究落后的现状及存在问题;展望国内今后研究的发展方向。     

卵巢自身胰岛素抵抗放大其颗粒细胞增殖功能

探讨在卵巢自身胰岛素抵抗情况下,颗粒细胞增殖能力、雌激素合成能力的改变。方法是以猪卵巢颗粒细胞作为体外研究对象,利用磷酯酰肌醇-3激酶(PI-3K)特异性抑制剂——渥曼青霉素(Wortamanni,WT)人工诱导胰岛素抵抗的细胞模型。结果显示:①处理组细胞的葡萄糖摄取能力明显低于正常组细胞的葡萄糖摄取能力(756.25±158.81cpm/2×104cellsvs1144.75±81.09cpm/2×104cells,p<0.05);②处理组细胞中有丝分裂激活蛋白激酶1(MAPK1)和MAPK2蛋白的表达水平高于对照组,而该蛋白磷酸化p-MAPK蛋白的表达低于对照组;③处理组卵巢细胞MAPK、增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达(相对灰度)升高;④在胰岛素抵抗的状态下,雌激素以及芳香化酶的表达显著上调。结论为卵巢颗粒细胞的自身胰岛素抵抗,明显提高其分裂增殖能力和雌激素合成效能,该机制可能是PCOS卵巢在超排过程中易发卵巢过度刺激综合的重要机制。     

c-fos和CYP17对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞雄激素分泌过多的影响及机制

 为研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞中c-fos 及CYP17 基因表达的变化,探讨c-fos 及CYP17 基因对PCOS 卵巢颗粒细胞雄激素分泌的影响及可能的作用机制,对拟行IVF/ICSI-ET 的PCOS 患者及非PCOS 患者分为对照组(非PCOS 患者)和PCOS 组(PCOS 患者),两组患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h,利用放射免疫法检测细胞上清液中的雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)的水平;利用2-NBDG 标记葡萄糖检测颗粒细胞的葡萄糖摄取能力;采用免疫蛋白印迹(WesternBlot)法分别评估颗粒细胞中c-fos 及CYP17 基因的表达变化。结果发现,PCOS 组患者与对照组患者相比,颗粒细胞培养上清液中睾酮水平升高(P<0.05)、孕酮水平降低(P<0.05)、雌二醇水平无明显变化(P>0.05),且颗粒细胞对2-NBDG 标记葡萄糖摄取明显降低(P<0.05),提示PCOS 患者卵巢颗粒细胞雄激素分泌异常增高,并存在糖代谢异常。与对照组患者相比,PCOS组患者颗粒细胞CYP17 基因表达升高(P<0.05),c-fos 基因表达降低(P<0.05),提示颗粒细胞c-fos 基因异常低表达,可能降低了对CYP17 基因的抑制作用,使CYP17 高表达,可能是卵巢颗粒细胞雄激素分泌增加的原因之一。