三种PCR引物法制备生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针检测效果的比较

采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明，三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10ps／μL，对目标基因DNA的检测灵敏度可达90ps／μL，但反义引物PCR法标记探针的检测效果要好于正义和反义引物双链PCR法制备的探针；在目标基因DNA浓度一定的情况下，探针的浓度对检测效果的影响并不大；正义、反义引物PCR法制备的探针可不经煮沸变性处理直接使用；用50ng／mL浓度的反义引物PCR法制备的生物素标记cDNA探针可检测到带毒啤酒花叶片和花瓣中的啤酒花潜隐病毒RNA。     

酶联免疫吸附法检测哈密瓜(WMV—2)种子及幼苗的带毒研究

本文采用微量板间接酶联免疫吸附法检测西瓜花叶病毒获得成功。此方法灵敏度高,特异性强,能够检测病毒提纯液的最低浓度为40毫微克/毫升,也能检测出稀释40000倍病叶澄清液中的病毒,灵敏度比琼腊双扩散高1000倍以上。间接酶联免疫吸附法也能检测出单粒哈密瓜种子及单株幼苗的西瓜花叶病毒,测得种子带毒率为22％,幼苗带毒率为20％。此法快速简便,适合大量种子及幼苗标样的检测,尤其对于田间幼苗的隐症带毒及流行研究更有实际意义。     

哈密瓜病毒病流行的研究

侵染新疆哈密瓜的病毒种类有西瓜花叶病毒、黄瓜花叶病毒、南瓜花叶病毒及烟草坏死病毒。1980—1985年,在田间试验及室内研究中,规察了影响病害流行的各种因子。初步认为,5—6月旬平均气温达25℃左右,月平均气温达20℃以上,相对湿度在30—50％时,田间开始出现中心病株,随麦二叉蚜、桃蚜迁飞高峰后,发病率出现明显的流行陡度。持续25—30℃的日平均温度,半月之内造成大流行。对70个哈密瓜品种的试验观察没有免疫品种。这期早播或播时铺上塑料地膜或银色反光薄膜可以大大阻止病害流行,而黄瓜、西葫芦等蔬菜作物与哈密瓜邻作,可促使病害早期发生。本文讨论了影响发病及流行的各种因素,流行前期进行予测,为病害的有效防治提供了依据。     

新疆天山北部地区加工番茄上ToMV和CMV的动态分析

为研究加工番茄上ToMV和CMV消长动态,采用RT-PCR方法对新疆天山北部6个地区采集的加工番茄样品进行了分子检测。结果表明:不同地区的138份加工番茄样品中,石河子、奎屯、乌苏的样品在存在CMV和ToMV,并以CMV为主,ToMV次之;从石河子蔬菜研究所,按不同品种不同时间采集的加工番茄660份样品中,CMV的检出率为21.5%,ToMV的检出率为12.1%,2种病毒的复合检出率为8.9%,病毒的检出率明显低于往年;CMV和ToMV分别在6月25和7月11日左右开始发生,CMV比ToMV早发生10-15 d。2种病毒的发生高峰期都在8月中下旬,复合侵染发病期在7月下旬;品种间2种病毒的消长动态没有明显的差异。     

新疆白蒜洋葱黄矮病毒的分子鉴定

从新疆吉木萨尔县采集具有条纹花叶、畸形等症状的大蒜叶片提取总RNA,利用洋葱黄矮病毒的特异性引物进行RT-PCR扩增,可得到大小为1402bp片段。将获得的片段克隆到PMD18-T载体进行序列测定和同源性比较,结果表明,OYDV新疆吉木萨尔分离物为1402个核苷酸,可编码467个氨基酸,与GeneBank中的12个OYDV核苷酸序列相比,序列同源性为80%～99%,由此推导的氨基酸序列同源性为88%～99%。     

白枸杞瘤瘿螨的发生与为害

描述了新疆枸杞园白枸杞瘤瘿螨的形成特征,调查研究了该螨的发生规律、危害及其扩散蔓延方式,提出了防治建议。     

甜菜上一种球状病毒分离物的特性研究

由田间自然感病和甜菜黑色焦枯病株，坏死黄脉型病株及无明显症 甜菜上分离到一种球状病毒，病毒呈二十面体，直径约25nm，有空心和实心2种粒子，具有分子量为24．7kd的外壳蛋白和长度分别为3．8kb,1.4kb,1.1kb的3个双链RNA组分，该病毒具有较强的稳定性和侵染性，蚜虫不能传毒，土壤诱发可传播，易通过汁液摩擦接种侵染多种植物；但回接甜菜只偶尔出现个别褪绿斑或不规则褪绿斑，并不表现田间症状，表明该病毒与甜菜黑色焦枯病等病害无直接关系。     

北疆地区辣椒病毒病毒源种类分离鉴定的初报

1990～1992年,从石河子、昌吉、阜康、乌鲁木齐及哈密等地采集了不同症状的辣椒病毒病标样75份。通过指示植物3次单斑分离,纯化后获8个病毒分离物,编号分别为P—91—5、P—91—7、P—91—8、P—91—10、P—89—2、P—89—27、P—90—3及P—90—4。上述分离物经病毒的寄生范围、鉴别寄主反应、传毒介体及传播方式、体外稳定性、电镜粒体观察、血清学反应及理化性质的测定,鉴定出6种病毒:黄瓜花叶病毒(CMV)占28％、烟草花叶病毒(TMV)占24.7％、蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占5.0％、马铃薯X病毒(PVX)占4.3％、马铃薯Y病毒(PVY)占2.7％、烟草花叶病毒组一新成员病毒(暂定为C_aMV)占21.3％。还有两种未知病毒分别占13.2％及3％。研究表明,在北疆地区辣椒病毒病的主要毒源是CMV、TMV及C_aMV,但对辣椒危害性最大的是TMV及BBWV,导致辣椒萎蔫、坏死及顶枯。     

银灰塑料薄膜避蚜防治哈密瓜病毒病

近年来在石河子、奎屯、昌吉、吐鲁番等地,普遍发生了哈密瓜病毒病,一般发病率在50％左右,重者可达90～100％,严重影响哈密瓜的产量和质量。据我们试验证明,这种病毒病的发生发展与蚜虫密切相关,蚜虫向瓜地迁飞越早,发病越早。迁飞量越大,发病越重。近几年通过瓜田黄器诱蚜及在无虫网室下进行蚜虫试验,看出向瓜田迁飞的蚜虫主要是麦二叉蚜的桃蚜。它们以非持久性方式在田间迅速传播,导致哈密瓜病毒病的迅速蔓延。石河子一带1983年蚜量较多,据石河子地区气象资料,1985年5～6月的气温比往年同期相比偏低,5月平均气温17.4℃,空气相对湿度57.6％,正是蚜虫生活繁殖的最适温度(15～18℃)。     

侵染新疆辣椒CMV的外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从表现黄化的辣椒病株上获得分离物XJ-P,用1对CMV基因引物进行RT-PCR,扩增得到了774bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物克隆到pMD18-T载体中再转化到大肠杆菌TOP10。经限制性内切酶酶切鉴定,重组克隆中含有与PCR产物大小相同的774bp的插入片段。cDNA全序列分析表明,所扩增出的774bpCMV基因,含1个657bp开放阅读框架（ORF）,编码218个氨基酸组成的蛋白,所克隆的基因包含完整的CMVCP基因。所测得的XJ-P分离物其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源性分别为90.84%-94.22%和74.37%-76.52%,氨基酸同源性分别为94.04%-98.17%和80.37%-82.19%,因此将该分离物鉴定为黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ。