耐热DNA聚合酶介导的DNA酶促自发合成

构建了无模板引物的“类ＰＣＲ体系”。该体系在适当温度保温一段时间之后，能检测到产物出现，利用热变性分析等手段，初步研究了产物的性质，发现这些产物是随机合成的具有一些特殊构型的ＤＮＡ。本文报道三种构型，两类碱基组成比例，并通过改变反应条件观察对酶促自发合成的影响，探讨耐热ＤＮＡ聚合酶的非特异聚合活性以及介导的酶促自发合成的机理和意义。     

人CSNK1A1基因两种转录变异体CK1αLS与CK1αS在细胞株中的表达

目的:分析CSNK1A1基因两种转录变异体CK1αLS和CK1αS在人正常细胞株和人肿瘤细胞株中的表达及在肿瘤发生发展中的作用.方法:RT-PCR法半定量检测不同细胞株中CSNK1A1基因的CK1αLS与CK1αS的mRNA表达水平.结果:36个细胞株中有32个细胞株存在CK1αLS与CK1αS的表达差异.在胚肾细胞2...     

应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶

经过连续易错聚合酶链式反应(Error-Prone PCR)向克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)甘油脱氢酶基因中引入突变,并构建突变文库.依据突变体催化番红O显色的特性,采用琼脂平板法和96微孔板法相结合的高通量筛选方法,成功获得突变体gldA-74,其酶活力是亲本重组酶的2.73倍.通过软件对突变体gldA-74酶基因和亲本重组酶基因进行分析对比,发现突变体gldA-74酶基因发生了一处点突变(A964T),该突变使一处氨基酸被取代.将亲本重组酶和进化酶的高效表达产物经Ni柱纯化后,酶学性质的测定结果表明,甘油的Km值由0.58 mmol.L-1升高至0.63 mmol.L-1,而NAD的Km值由0.74 mmol.L-1升高至0.77mmol.L-1,并且酶的最适pH值由原来的11.5升高至12.5,而最适温度由65℃降至55℃.     

采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化

以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.     

实时定量PCR研究大鼠肌肉组织基因表达

运用实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)研究了正常以及患有糖尿病大鼠的肌肉组织中胰岛素信号转导通路中重要的信号传导分子基因表达,结果表明:四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肌肉组织的胰岛素受体、胰岛素受体底物1和葡萄糖转运体4的mRNA表达下调,胰岛素磷脂酰肌醇3激酶的mRNA表达上调;糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4的mRNA含量下降可能会引起糖摄取能力的下降.从而导致四氧嘧啶诱导大鼠肌肉组织胰岛素抵抗.     

DNA计算在二次分配问题中的应用研究

DNA计算（DNA computing）是一种新的计算方法,其高度并行性和巨大的信息存储能力为NP-完全问题的解决提供了一种全新的方法。本文采用了该算法去解决二次分配问题,构造了该问题的表达方法,建立了算法模型,对于我们将DNA计算的方法应用于组合优化问题具有启发性,并为我们进一步深入研究奠定了基础。     

探察流感病毒增殖机制

日本科学家最新报告说．他们发现了流感病毒增殖过程中发挥核心作用的核糖核酸聚合酶的结构,探明了病毒共通的增殖机制.     

巨尾桉铜分子伴侣EuCCS基因的克隆及表达分析

以巨尾桉为研究对象,克隆得到巨尾桉铜分子伴侣(CCS)基因(GenBank注册号为KJ755351.1),生物信息学分析表明:EuCCS蛋白定位于叶绿体,与龙眼同源基因的一致性达到99%.巨尾桉CCS的原核表达载体pET-EuCCS在大肠杆菌细胞内可以稳定表达,超氧化物歧化酶(SOD)活检测结果表明:转化菌株的SOD酶活性比对照菌株高,说明外源基因EuCCS具有生物学活性.利用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术分析CCS在巨尾桉中的表达特性,结果表明:在植株生长旺盛的部位,CCS表达量较大,如植株幼叶,随植株叶片慢慢衰老,CCS的表达量也随之下降;在组培苗中,叶片的CCS表达量最大,其次是茎.     

一种适用于批量筛选和鉴定拟南芥突变体的快速DNA提取方法

DNA提取是拟南芥突变体筛选与鉴定中的关键环节.结合拟南芥突变体鉴定特点和DNA提取特点,对传统SDS法进行改良,摸索出一种简易、快速且经济的DNA提取方法,并将其应用到突变体的批量筛选与鉴定中.使用该方法可在常温下利用10mg左右拟南芥叶片,以少量试剂,通过简单的研磨、离心、沉降和干燥等步骤便能快速制备用于PCR检测的DNA模板.采用本方法个人提取单个样品DNA仅需15min左右,每小时可提取48个DNA样品.研究采用该方法提取了一批待鉴定拟南芥突变体的DNA样品,利用三引物法对其进行PCR检测,结果表明DNA样品浓度高,DNA扩增成功率高达100%,且目的条带清晰,说明该方法在拟南芥突变体的筛选和鉴定上是适用且高效的,可广泛应用于实验室突变体库的建立.     

体外转录过程中遇到的问题及探讨

人们在做原位杂交、southem blots或northem blots时,RNA探针比DNA探针稳定且特异性强,产生的讯号比DNA探针强约10倍,因此通常RNA探针成为实验者的首选．本人在用SP6 RNA聚合酶体外转录合成史氏鲟B-actin基因的RNA探针时,转录产物电泳后出现四条带,分别位于模板的上端和下端．为了探究其中的原因,本人选择了可能影响转录产物长度的几个因素(RNA聚合酶、模板具有3’-凸头以及模板的长度)分别设计实验进行分析,结果发现不同的RNA聚合酶以及模板过短可能形成自连等都有可能影响转录产物的结果．