瑞氏木霉QM9414利用蔗渣发酵产纤维素酶的研究

以蔗渣为培养基料,通过单因子及正交试验,对瑞氏木霉QM9414固体发酵产纤维素酶的产酶条件进行了探讨.其优化的产酶条件为:甘蔗渣2.5 g,麸皮1 g,加含7.5 g/L(NH4)2SO4的Mandels营养液14 mL(干物质(g)与水(mL)的比例为1:4),调初始pH4.0,30℃发酵120 h.在此优化条件下,每克干曲产纤维素酶酶活力可达8.26 U.     

鸭瘟病毒强、弱毒株TK基因的克隆与序列测定

根据GenBank上已发表的鸭瘟病毒TK基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,分别扩增鸭瘟病毒标准强毒株(DPV-F34)和鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗株(C-KCE)的TK基因,将它们分别克隆入pBS-T载体,转化TOP10大肠杆菌,对阳性的重组质粒进行序列测定.结果表明:DPV-F34与DPVC-KCE的TK基因长度均为1077bp,编码358个氨基酸,二者的核苷酸与氨基酸组成具有很高的同源性,分别为99.4%和98.9%.     

高效液相色谱法检测牦牛乳和牦牛酸奶中的核苷酸

利用高效液相色谱法测定牦牛和水牛乳、家庭自制牦牛酸奶中核苷酸的含量．采用Agilent1100型高效液相色谱仪,紫外检测器波长为260nm,色谱柱为迪马铂金C18,柱温30℃,进样量5pl,流速为0．5ml·min^-1,流动相：pH5．6、0．1mol／L磷酸二氢钾缓冲液．结果显示,该方法能对乳中核苷酸进行有效的分离,方法稳定,重复性好．本实验在牦牛酸奶中检测到微量的胞嘧啶核苷酸（CMP）和次黄嘌呤核苷酸（IMP）,但在牦牛乳中未检测到．这两种核苷酸在德昌水牛乳中的含量也很低．     

中药复方灰兜巴对糖尿病治疗作用研究

分别使用四氧嘧啶和链脲佐菌素诱导出糖尿病小鼠和大鼠模型,灌胃给予中药复方灰兜巴进行治疗．结果表明,中药复方灰兜巴可以降低糖尿病小鼠模型血糖,抑制体重减轻,加速糖代谢分解;可以控制糖尿病大鼠模型尿量增加．证明了中药复方灰兜巴对糖尿病具有治疗作用．     

腺病毒载体介导GFP基因在鸭胚和雏鸭体内的表达

本试验旨在探讨腺病毒在鸭胚和雏鸭体内的感染情况,为腺病毒作为外源基因载体在活体上进行RNA干涉奠定基础．将GFP基因重组腺病毒（Adv-GFP）静脉注射15日龄鸭胚和10日龄雏鸭,在感染后不N时间采集组织器官,制作冰冻切片,荧光显微镜观察GFP基因在鸭胚和雏鸭组织器官中的表达,结果发现,GFP基因在Adv-GFP感染后24-72h能在鸭胚肝脏及心肌细胞中表达,在感染后1-5d,GFP基因可在雏鸭肝脏、脾脏、腔上囊中稳定表达,本试验首次证明腺病毒作为安全的外源载体,可介导外源基因在鸭胚和雏鸭体内的靶器官中持续稳定表达,为在鸭上进行病毒病的基因治疗提供了基础数据．     

腺病毒载体介导的GFP在鸡胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉

鸡胚成纤维细胞（CEF）是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料．本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台．采用GFP重组非复制型腺病毒载体（Ade-GFP）转染CEF细胞：结果证明0．1．2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞：胞核与胞浆可见明亮的荧光：荧光细胞数量及荧光强度在24～36h达到高峰：以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3％;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示：Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响：说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达：干涉效率为85％：证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制：为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础．     

新型肠毒素蛋白SElK编码基因的克隆测序、生物信息学分析和表达载体构建

采用微波加热法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,根据NCBI上登录的肠毒素基因sek设计引物,PCR克隆selk基因,对selk基因测序并进行生物信息学分析,在此基础上构建重组表达质粒p ET-32a(+)-selk.测序结果表明本研究克隆得到具有正确编码序列的新型肠毒素selk基因;Protparam分析表明在一级结构水平上该蛋白具有较高的热稳定性;亲疏水性分析表明SEl K蛋白是一个亲水性较高的蛋白质;同源建模表明SEl K蛋白的domain B结构域缺乏传统肠毒素所具有的胱氨酸环,但SEl K蛋白domain B中β-折叠片数量比传统肠毒素更高.这些结果为进一步研究SEl K蛋白的结构与功能奠定基础.     

乐至黑山羊的同期发情研究

乐至型川中黑山羊具有常年发情、产羔率高等优良繁殖特性,但是在极端气候条件下(炎热夏天和寒冷冬天)产的羔羊成活率低,因此,本研究拟建立同期发情率高、受胎率高和产羔率高的山羊同期发情方法以调整产羔季节.研究选取健康黑山羊63只,随机分为A、B、C三个组.在同一时间给每只羊放置CIDR阴道栓,处理13天后撤栓,同时注射PGF_(2α),然后注射不同剂量的PMSG:A组(n=20)不注射,B组(n=20)300IU,C组(n=23)500IU.母羊发情后用公羊自然交配;观测到母羊发情后,颈静脉采血制备血浆,用ELISA法测定血浆生殖激素(FSH、LH、E_2和P_4)浓度.结果发现,撤栓后72h内A、B、C三个组的发情率分别为80.0%、100.0%和82.6%,受胎率分别为68.8%、90.0%和78.9%,产羔率分别为190.9%、238.9%和206.7%.各组间生殖激素(FSH、LH、E_2和P_4)浓度差异不显著.综上所述,本试验优化出乐至黑山羊同期发情方法,即CIDR处理13天,撤栓后肌肉注射PGF_(2α)及300IU的PMSG.     

绿萝花水溶性多糖体外抗肿瘤的实验研究

目的:探讨藏药绿萝花水溶性多糖体外抗肿瘤作用,为绿萝花进一步开发利用提供科学依据.方法:以绿萝花水溶性多糖为研究材料,以S180腹水瘤细胞株、HepA 1-6小鼠肝癌细胞株和L1210小鼠白血病细胞株为研究对象,以CCK-8法、AO/EB染色法和Annexin V/PI双染法流式细胞术为主要检测手段,以肿瘤细胞生长、肿瘤细胞形态、肿瘤细胞凋亡等为考核指标,研究藏药绿萝花水溶性多糖的体外抗肿瘤作用.结果:S180腹水瘤细胞为绿萝花水溶性多糖敏感细胞,1000.0μg/mL抑制率为71.38%;不同剂量绿萝花水溶性多糖均具有诱导S180细胞发生凋亡,均可以上调瘤细胞的早期和晚期凋亡率,1000.0μg/mL效果最好,凋亡率达到26.60%.结论:藏药绿萝花水溶性多糖具有体外诱导肿瘤细胞凋亡作用,作用相当于5-FU.     

野棉花研究综述

野棉花主要含有皂苷、有机酸类、甾类和挥发性成分等化学成分,主治泄泻、痢疾、黄疸、疟疾、蛔虫病、清湿热和解毒杀虫等.本文从名称考证、化学成分及药理活性等方面进行综述,旨在为进一步开发利用野棉花提供科学依据.