斑马鱼在人类疾病模型以及药物筛选中的应用

小鼠作为研究人类疾病的动物模型已被广泛使用,然而其在大规模遗传筛选和药物筛选方面受到诸多限制.斑马鱼作为典型的脊椎动物,在器官水平和细胞水平上与哺乳动物相似,而且胚胎和幼体的透明特性为实时观察提供了方便;其基因与人类有很高的同源性且易于进行基因操作,因而成为了研究人类疾病的理想动物模型.本文介绍了斑马鱼在人类疾病模型和药物 筛选中的研究概况.     

小鼠孤雌生殖胚胎干细胞的分离及分化潜能研究

用免疫外科法从小鼠孤雌生殖胚胎分离胚胎干细胞,并研究了其在体内、体外的分化潜能．结果发现:从小鼠孤雌生殖的胚胎中可分离出胚胎干细胞(pES),可以传代培养25代,能表达很强的碱性磷酸酶,核型稳定呈40XX．培养至第18代的pES在体内可诱导肿瘤形成,并可分化为三个胚层的组织细胞．免疫组化结果显示:神经细胞特异性烯醇化酶（NSE）、肌肉特异性肌动蛋白?-actin均呈阳性,表明分离培养的pES在体内可至少分化为来自外胚层和中胚层的组织细胞．传至第20～24代的pES细胞,经体外定向诱导分化,可定向分化为节律性收缩的心肌细胞及神经细胞．免疫组化检测显示节律性收缩的心肌细胞表达?-actin,而神经细胞表达NSE．结果表明:利用免疫外科法可从孤雌生殖的小鼠胚胎建立pES,这些pES在体内、体外都具有分化为多种类型细胞的潜能．     

哈密翼龙及其3D胚胎化石研究

 翼龙是地球上第一类飞向天空也是唯一绝灭的飞行脊椎动物，人类对其产卵繁殖、生长发育和生活习性等方面的了解还十分有限。本文介绍了一件超过200枚哈密翼龙蛋、胚胎和骨骼化石三位一体保存的重要标本，包括16枚翼龙蛋含有三维立体的胚胎化石。针对这件全世界首次发现的3D翼龙胚胎，研究提出哈密翼龙具有相对早熟的胚胎发育模式，其后肢发育速度较前肢快，孵化之后只能走不能飞；胚胎发育期间牙齿尚未萌出，出生后还需要父母照料；从胚胎到亚成年都具有快速生长的骨骼结构；显示哈密翼龙具有群居的生活习性，白垩纪的湖泊风暴导致其集群死亡并快速埋藏。     

温度对斑马鱼静止代谢率和氨氮排泄率的影响

本研究测定了 18、23、28、33 ℃等温度下斑马鱼(Danio rerio)的静止代谢率(RMR)和氨氮排泄率(AN)。结果表明，RMR 值与温度(T)显著正相关，二者关系可用指数函数描述：RMR=21.28e0.090 3T(r2=0.562，n=55，p<0.01)；雄鱼对温度的敏感性高于雌鱼；随着温度上升，AN显著增加(p<0.05)；各温度下，氨熵(AQ)值分别为 0.34、0.14、0.10 和0.16。研究认为，13、38 ℃可能是斑马鱼可长期耐受的温度下限和上限，该种鱼 RMR 水平较高且对温度变化较敏感；蛋白供能比过高可能是斑马鱼不适宜低温生存的原因，低温是否促进斑马鱼的无氧代谢有待进一步研究。
     

愈伤灵胶囊药效的斑马鱼评价技术探讨

以斑马鱼(Danio rerio)为实验动物进行缺氧窒息及游泳能力实验，检测愈伤灵胶囊以及人参皂苷Rbl对斑马鱼的存活、耐受缺氧能力及游泳能力的影响。结果发现，愈伤灵溶液处理1 d 后，实验鱼窒息时间随药物剂量呈现先增高后降低的趋势，在剂量为 0.01 mg·L-1时达最大值；实验鱼最大绝对游泳速度呈现类似的变化趋势，不同药物剂量下的实验鱼最大相对游泳速度无显著差异。愈伤灵溶液处理 8 d 后，实验鱼窒息时间随药物剂量呈现降低的趋势，在剂量为 0.01 mg·L-1时达最大值。人参皂苷 Rbl处理 8 d 后，实验鱼窒息时间随药物剂量降低呈现跳跃式陡降。研究结果提示斑马鱼可作为药效评价的模式实验动物，用于中药评价新技术的开发。
     

Kisspeptin-GPR54在哺乳动物妊娠中的研究进展

kisspeptin是KISS1基因的产物，它不仅能显著影响动物的繁殖，也参与调控动物机体代谢、初情期启动及整个妊娠过程.研究表明，子宫来源kisspeptin介导胚胎着床，合体滋养层来源kisspeptin调控早期胎盘形成.血中kisspeptin水平与异位妊娠、子痫前期、妊娠滋养细胞肿瘤等妊娠期相关疾病的发生关系密切，可作为妊娠疾病诊断的潜在生物学标志.妊娠早期，血浆或血清中kisspeptins(kisspeptin-10或kisspeptin-54)水平在区分确认流产方面显示出较高的准确性，是早期妊娠诊断流产的新方法.kisspeptin-GPR54参与哺乳动物妊娠的整个过程，在妊娠相关的生理事件或疾病发生中扮演重要角色.就kisspeptin-GPR54系统在调控胚胎着床、胎盘形成、妊娠相关疾病及流产进行较系统的归纳、总结，旨在全面了解kisspeptin-GPR54在哺乳动物妊娠中的作用，为进一步研究kisspeptin-GPR54调控妊娠的具体分子机制奠定理论基础.     

基于数字基因表达谱筛选雌雄鸡胚胎性别分化相关的差异表达基因

目的为探究家禽早期胚胎发育中与性别分化相关基因的表达情况。方法本试验通过数字基因表达谱技术(DGE技术)以发育到72 h的雌性和雄性鸡胚胎为研究对象。结果成功构建了雌性和雄性鸡胚胎文库,通过对比及分析后得出有66个表达差异基因,包括雌性对雄性表现上调的基因为25个、下调的基因为41个。通过对这些差异基因进行GO功能和KEGG Pathway显著性富集分析显示差异基因主要参与生长发育、生殖、细胞的增殖分化相关,筛选出了5个与鸡性别分化相关的基因,分别是HINT1Z、SOX9、RSPO1、DMRT1和LHX9基因。结论经实时荧光定量PCR验证,结果显示HINT1Z基因在雄鸡中比在雌鸡中的表达量较高,在雌雄鸡中表达差异不显著; RSPO1基因表达雌鸡比雄鸡中高; SOX9基因表达量雄鸡高于雌鸡且差异极显著(P0. 01); DMRT1基因在雄鸡中的表达量高于雌鸡且差异极显著(P0. 01); LHX9雄鸡中的表达量较雌鸡中高但差异不显著。     

牛蛙与斑马鱼中维生素D受体的免疫印迹体系的建立

选用牛蛙与斑马鱼作为两栖类和鱼类的代表,以牛蛙十二指肠、牛蛙肾、斑马鱼肠作为VDR检测的潜在组织器官,通过对选择的组织进行蛋白质提取,应用免疫印迹技术检测了VDR的组织分布,并在实验过程中对实验条件进行了优化。实验结果为两栖类、鱼类中的VDR研究提供技术支撑并推动相关领域的研究。     

寒武纪大爆发中的磷酸盐化胚胎化石

在扬子地台寒武纪最早期（梅树村期）发现的磷酸盐化保存的后生动物Ｏｌｉｖｏｉｄｅｓ具发育的不同阶段,从胚胎细胞分裂的囊胚期经可能的原肠胚期至胚胎的组织分化期最后直至幼体孵化。后生动物胚胎化石的研究为古生物学研究开辟了一个新领域－化石胚胎学,早期后生动物胚胎学研究对了解寒武纪大爆发中的生命的个体及系统发育有重要意义。     

用整体原位杂交法研究微管蛋白基因在斑马鱼胚胎中的表达

斑马鱼是一个很好的脊椎动物发育研究模型,斑马鱼胚胎发育过程中基因表达调控的研究对揭示脊椎动物形态发生的分子机理非常重要。微管蛋白固定受精卵细胞质中的形态发生决定子,组织形成基本的细胞骨架,控制细胞的各种运动。在脊椎动物中已发现有几种微管蛋白,每种微管蛋白都有其特定的表达位点和功能。用一种β２微管蛋白基因的全长ｃＤＮＡ为模板,合成地高标记的ＲＮＡ为探针,对斑马鱼各时期的胚胎进行整体原位杂交。β２微管