人参SQS基因的干扰载体构建及转化人参愈伤组织

以5年生人参为材料, 根据人参SQS基因设计正义及反义片段引物, 构建了SQS基因干扰表达载体; 利用农杆菌转化法转化人参愈伤组织, 对获得的抗性愈伤组织进行PCR检测及实时定量PCR检测, 并对抗性愈伤组织的皂苷进行HPLC分析. 实验结果表明, 与非转化人参愈伤组织相比, 转化后的愈伤组织SQS基因表达量降低, 皂苷含量有所变化. SQS是人参皂苷生物合成途径的关键酶, 抑制SQS基因的表达, 可调控人参皂苷含量变化.     

氨氮胁迫对斑马鱼繁殖行为的影响

【目的】探究氨氮胁迫对斑马鱼(Danio rerio)繁殖行为的影响。【方法】选取健康且规格一致的成年斑马鱼，分别在氨氮质量浓度为0(对照组)，5，10和20 mg·L-1的水体中暴露96 h，而后配对并拍摄它们的繁殖行为，统计繁殖行为参数及产卵量。【结果】1) 氨氮质量浓度为20 mg·L-1的处理组中雄鱼对雌鱼的触碰次数减少，与对照组实验鱼的该项指标相比差异具有统计学意义((p<0.05)，但所有处理组中斑马鱼的追逐次数没有统计学意义上的差异；2) 所有处理组的雌鱼和雄鱼单独进入产卵区的次数和停留时间均没有统计学意义上的差异；3) 氨氮质量浓度为10和20 mg·L-1的处理组中雌鱼和雄鱼同时进入产卵区的次数减少，与对照组实验鱼的该项指标相比具有统计学意义(p<0.05)，但所有处理组中雌鱼和雄鱼同时停留在产卵区的时间没有统计学意义上的差异；4) 与对照组相比其他3个处理组实验鱼的产卵量有轻微下降，但不具有统计学意义上的差异。【结论】氨氮胁迫会抑制斑马鱼的繁殖行为，进而可能导致斑马鱼产卵量降低。     

不同水平内源警戒素对斑马鱼恐惧行为影响的性别差异

【目的】探究不同水平内源警戒素(Alarm substance，AS)对斑马鱼(Danio rerio)恐惧行为影响的性别差异及诱导雌、雄斑马鱼产生恐惧反应的最低AS水平。【方法】采用以斑马鱼表皮质量浓度计分别为0(对照)，0.2，0.4，0.8，2.0，3.0和4.0 mg·L-1的不同水平AS对雌、雄斑马鱼进行恐惧行为测试并分析有关行为学指标。【结果】1) 当AS水平在0～0.8 mg·L-1范围内逐渐上升时，雌、雄斑马鱼的首次上浮时间和底层停留总时间有逐渐延长的趋势。2) 与对照组相比，当AS水平为0.2 mg·L-1时雌性斑马鱼首次上浮时间、底层停留总时间有统计学意义上的延长(p<0.05)，而当AS水平为0.8 mg·L-1时雄性斑马鱼首次上浮时间、底层停留总时间有统计学意义上的延长(p<0.05)；3) 当AS水平为0.8，2.0，3.0和4.0 mg·L-1时雌性斑马鱼首次上浮时间有长于雄性斑马鱼首次上浮时间的趋势，当AS水平为0.2，0.4，3.0和4.0 mg·L-1时雌性斑马鱼底层停留总时间有长于雄性斑马鱼底层停留总时间的趋势，但有关差异无统计学意义。【结论】在一定AS水平范围内，斑马鱼的恐惧反应程度与AS水平有呈正相关关系的趋势。雌性斑马鱼与雄性斑马鱼相比有更易产生恐惧行为的趋势；在受同一水平AS刺激后，雌性斑马鱼的恐惧行为较雄性斑马鱼而言有加剧的趋势。上述恐惧行为的性别差异可能与雌、雄斑马鱼体内激素水平和神经系统的警觉水平有密切关系。     

西归药理作用的初步实验研究

目的:观察西归(seselopsis)乙醇提取物对小鼠的抗疲劳作用、常压耐缺氧和耐热作用。方法:①小鼠的抗疲劳作用实验:小鼠经西归乙醇提液灌胃7d,剂量3.3、6.6、13.4g.kg-1.d-1,qd,阳性对照组经人参浸膏液灌胃7d,剂量2.0g.kg-1.d-1,qd。然后进行游泳实验,记录小鼠游泳持续时间;②常压耐缺氧和耐热实验:小鼠经西归乙醇提液灌胃5d,剂量6.6g.kg-1.d-1,qd,阳性对照组经人参浸膏液灌胃5d,剂量2.0g.kg-1.d-1,qd。然后进行常压耐缺氧和耐热实验,记录各组小鼠存活时间。结果:与生理盐水组比较,西归组小鼠游泳持续时间明显提高(P<0.01);在缺氧和高温环境中西归组小鼠存活时间明显提高(P<0.01)。这些指标均与人参组相当。结论:西归对小鼠具有与人参类似的抗疲劳作用,且可以明显提高小鼠的耐缺氧和耐热能力。     

利用斑马鱼模型研究芦笋有效成分对免疫功能的调节作用

采用正常发育48 hpf的转基因斑马鱼为实验动物,以氯霉素处理引起免疫抑制,分别加入25.0~200.0 mg/L的芦笋多糖、6.25~100.00 mg/L的芦笋皂苷,处理24 h,观察各组斑马鱼的发育情况,拍照并统计斑马鱼体内中性粒细胞的数量。结果表明,氯霉素处理斑马鱼后,斑马鱼体内中性粒细胞数量减少,芦笋多糖在浓度为50.0~200.0 mg/L范围内对斑马鱼体内中性粒细胞数量减少具有明显改善作用,且具有明显的剂量依赖效应;芦笋皂苷在实验剂量范围内均显示出显著的改善作用。实验结果显示,芦笋的有效成分芦笋多糖、芦笋皂苷对斑马鱼免疫功能具有明显的调节作用。     

降低何首乌愈伤组织褐化研究

以何首乌为材料, 叶片愈伤组织为外植体, 采用L9 (34)正交设计, 研究不同因素对降低愈伤组织褐化的作用. 3因素为基本培养基(A)、培养基中活性炭(B)和硝酸银(C)浓度, 每因素设3个水平, A分别为MS, 1/2 MS和1/4 MS无机盐浓度, B分别为0 g·L-1, 5 g·L-1和10 g·L-1, C分别为5 mg·L-1, 0 mg·L-1和10 mg·L-1.外植体接种在不同的MS基本培养基中(含2,4 D 1 mg·L-1、琼脂8 g·L-1、蔗糖25 g·L-1, pH=5 8), 于(25±1) ℃、2 000 lx光照培养, 30 d后统计愈伤组织的褐化率. 试验结果表明: 降低愈伤组织褐化的最优水平组合为A2B3C1, B对试验结果的影响达显著水平(p<0 05). 以1/2 MS为基本培养基, 并于1/2 MS+活性炭10 g·L-1+AgNO3 5 mg·L-1培养基(附含2,4 D 1 mg·L-1)中培养, 褐化率可降至13 9%.     

稀有人参皂苷对实验性白癜风模型的影响

探究稀有人参皂苷对实验性白癜风动物模型的治疗作用。MTT法检测人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3组合物对鼠黑素瘤细胞增殖活性的影响。采用两种化学脱色法(分别使用氢醌和过氧化氢)制备实验性白癜风动物模型,经不同剂量(1. 0 g/kg·d,2. 0 g/kg·d)的人参皂苷干预后,肉眼观察药物治疗实验性白癜风动物模型的疗效,并拍照记录。考察人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3组合物对白癜风动物模型血浆中单胺氧化酶(MAO)、胆碱酯酶(CHE)和血清酪氨酸酶(TYR)含量的影响。MTT实验结果表明该组合物对黑素瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用。经稀有人参皂苷干预后的白癜风动物模型血浆中MAO值降低,CHE活力降低,TYR含量增加。通过肉眼观察能明显地看到动物模型白癜风症状减轻甚至消失。稀有人参皂苷对实验性白癜风动物模型具有良好的治疗作用,为临床应用提供了实验依据。     

NaCl胁迫对胀果甘草子叶愈伤组织总黄酮合成的影响

用不同浓度的NaC1处理胀果甘草子叶愈伤组织,分别在处理7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d取样,测定甘草子叶愈伤组织鲜重和总黄酮含量.结果表明当培养基中添加NaCl的浓度低于85.5 mmol/L时,随着NaCl胁迫程度的增加,胀果甘草子叶愈伤组织的生长量总体呈现升高的趋势,黄酮含量随NaCl浓度的增加而升高.其中在第28 d时,85.5 mmol/L NaCl处理的子叶愈伤组织中甘草黄酮含量达到最高值,为1.41 mg/g,比未作NaCl处理的对照愈伤组织的黄酮含量(1.31 mg/g)提高了7.83％(为0.10 mg/g),约为对照的1.078倍.试验结果表明一定浓度的NaCl胁迫可以提高胀果甘草子叶愈伤组织的甘草黄酮含量.     

植物激素对小立碗藓愈伤组织诱导及分化影响

小立碗藓(Physcomitrella patens(Hewd.)B.S.G.)作为独特的模式植物在分子生物学研究中被广泛应用.本实验以改良的Knop培养基为基本培养基,研究添加不同种类和浓度配比的植物激素对小立碗藓愈伤组织诱导及分化的影响.实验结果表明当糖浓度为2%,添加KT 0.05 mg·L-1或添加6-BA 0.05 mg·L-1,在温度(25±1)℃,光照强度3000～4000lx,光照周期12/12 h/d条件下培养,诱导小立碗藓愈伤组织的效果最为理想.诱导愈伤组织分化的实验结果表明未添加任何植物激素的Knop培养基上分化出正常的配子体且数量最多.添加2,4-D或IAA的培养基上能长出较多的原丝体.     

氨氮胁迫对黄河鲤幼鱼肝胰脏、肾脏抗氧化性的影响

为了探讨养殖水体中氨的毒性,在前期毒性实验的基础上设置氨氮质量浓度分别为0.071 mg·L-1、0.143mg·L-1、0.284 mg·L-1和0.427 mg·L-1的四个实验组和一个对照组对黄河鲤鱼(Cyprinus carpio)幼鱼进行毒性实验,实验期间pH值在7.80～7.85。分别在实验的0 d、7 d、14 d、28 d、35 d取样,检测肝胰脏、肾脏组织中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。结果表明,随氨氮暴露浓度的增加,黄河鲤鱼肝胰脏中的SOD和GSH-Px酶活性呈现先升后降的趋势,而MDA含量则呈现上升的趋势。方差分析表明,氨氮暴露浓度对于肝胰脏SOD活性、MDA含量影响效果极显著(P<0.01),且存在剂量-效应关系;随氨氮暴露浓度的增加,肾脏中SOD活性、GSH-Px酶活性均呈现先升后降趋势且效果显著(P<0.05),而肾脏中MDA含量呈现上升趋势且效果极显著(P<0.01),另外肾脏MDA活性与氨氮浓度之间存在显著的剂量-效应关系;氨氮暴露时间对于肝胰脏SOD活性、肾脏SOD、GSH-Px活性的影响表现为低浓度时先促进后抑制,高浓度时抑制,方差分析差异不显著(P>0.05)。可见,在实验浓度范围内氨氮降低鲤幼鱼的抗氧化能力,SOD、MDA可作为有效的生物标志物对氨氮引起的毒性做出评价。