禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.     

自体肝癌细胞裂解物致敏的树突状细胞诱导抗肝癌免疫的体外研究

从术后肝癌病人的外周血中诱导树突状细胞（DC），并经自体肝癌细胞裂解物致敏DC，用流式细胞仪、^3H-TdR掺入法及MTT法检测了DC表面分子的表达、DC刺激T细胞的增殖效应及DC诱导的T细胞对肝癌细胞的杀伤作用，进而比较经自体肝癌细胞裂解物致敏的DC与其它条件下的DC功能的差异．结果显示：肝癌细胞裂解物致敏DC的功能较未致敏DC显著提高，其可诱导自体混合淋巴细胞强的增殖效应，同时诱导的T细胞对自体肝癌细胞有较强的杀伤率．     

血吸虫膜相关抗原基因的克隆

目的:筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.japonicum)新的疫苗候选抗原基因.方法:以S.japonicum成虫DNA为模板,PCR扩增相关基因,然后将其克隆XpBS-T载体,通过菌落PCR对产物进行检测,对阳性克隆子测序,与GeneBank中的已知相关序列进行比对分析.结果:菌落PCR获得一条与PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明PCR产物与S.japonicum 22.6 kDa抗原分子核苷酸序列具有高度同源性.其目的基因大小636 bp,具有一个189 bp的ORF,能编码63个氨基酸.ORF不是全长的阅读框,只获得部分编码区.表达产物可含有一个包含9个氨基酸残基的潜在螺旋跨膜片段(25～33位)和一个酪氨酸激酶磷酸化位点(38～39位).讨论:成功克隆出一个与S.japonicum 22.6kDa抗原编码基因有高度同源性的基因.预测该基因为膜相关蛋白基因,可编码血吸虫体表膜相关蛋白.在生理机能上,该膜相关蛋白可能是信号传递分子.     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中hNTKL-BP1基因的表达

分别提取手术切除人原发性HCC肝癌和癌旁肝组织总RNA并逆转录为cDNA,在hNTKL-BP1基因的高保守区设计相应引物和Taqman荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,采用2-△△Ct方法分析比较该基因在人类肝癌组织和癌旁肝组织中的表达差异.结果是44例原发性HCC肝癌组织中hNTKL-BP1基因表达水平显著高于癌旁肝组织(t=2.69,P<0.01),肝癌组织与癌旁肝组织hNTKL-BP1基因表达差异和肿瘤大小有一定的相关性(P=0.028),hNTKL-BP1基因可能与肝癌的发生、发展有一定相关性.     

宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中HPV16感染与hTERT,P21wafl和Ki67表达关系的分析

为了探讨宫颈鳞状细胞癌(SCC)及宫颈上皮内肿瘤(CIN)组织中人乳头瘤病毒(HPV)16感染及端粒酶反转录蛋白(hTERT)、抑癌基因P21wafl和增生抗原Ki67表达的关系及其意义,在130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞状细胞癌组织中,利用组织芯片技术,结合原位杂交技术,检测HPV16感染及结合免疫组织化学技术检测hTERT,Ki67,P21wafl的表达.结果表明:1)CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织HPV16杂交信号阳性率显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸润性鳞癌HPV16阳性率也显著高于CIN(χ2=5.670,P=0.017).2)hTERT在CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织中的表达都显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸涧性鳞癌hTERT表达率也显著高于原位癌及CIN(χ2=18.870,P=0.000;χ2=66.390,P=0.000).CIN三级之间相比差异也具显著统计学意义(χ2=30.468,P=0.000).3)P21wafl在浸润性鳞癌组织中的阳性率显著低于正常宫颈组织(P＜0.05),但与CIN相比差异无显著统计学意义(P＞0.05).CIN三级之间P21wafl表达差异也无显著统计学意义(P＞0.05).4)随着宫颈病变组织学严重程度的增加,Ki67表达逐渐增加(P＜0.05).5)HPV16感染率与hTERT表达之间呈正相关(P＜0.05,r=0.339),与P21wafl表达之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.337),与Ki67表达无相关性(P＞0.05):hTERT与P21wafl之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.248),与Ki67表达呈正相关(P＜0.05,r=0.398);P21wafl与Ki67表达呈负相关(P＜0.05,r=-0.446).可见:在宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中,hTERT,P21wafl,Ki67表达改变可能与HPV16感染有关,且几者之间互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈鳞癌的发生.这些指标综合分析可能为阐明HPV16的恶性转化机制以及为提高宫颈鳞癌及其癌前病变诊断率提供参考依据.组织芯片技术是高效的研究基因及其表达产物的技术平台.     

CD40L对B淋巴细胞表面分子及分泌IL-12的影响

在体外使用CD40L作用于B淋巴细胞使之活化,通过测定B淋巴细胞表面分子及分泌细胞因子的变化,探讨B淋巴细胞作为抗原递呈细胞在抗肿瘤免疫中的优势,为B淋巴细胞特异性活化细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)进而发挥其肿瘤细胞杀伤效应奠定基础.取7名健康成人外周静脉血,经淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为对照组和实验组,实验组培养液中加入加入CD40L和IL-4,共培养21 d.观察B淋巴细胞生长状况,并在第7 d、第14 d和第21 d,用流式细胞仪(FCAS)测定其表面分子CD80、CD86和CD19,在第21 d,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中的IL-12水平.结果显示,在CD40L的作用下,B淋巴细胞呈克隆样增殖,并高表达表面分子CD80/CD86和CD19,和对照组相比,B淋巴细胞分泌IL-12水平升高(P＜0.05).上述实验结果说明通过CD40L的刺激,B淋巴细胞得到了活化,提示通过该途径活化的B淋巴细胞具备了作为抗原递呈细胞而发挥其抗肿瘤免疫治疗的能力.     

加速癌转移,消灭癌细胞--"以动制静法"治疗癌症新途径

癌细胞的转移具有好、坏两面性．癌症之所以至今难以被攻克和征服，关键问题是主导现代医学“防止或抗癌细胞转移”(以静制动法)研究战略从一开始就犯了方向性错误．相反，加速癌细胞转移(以动制静法)，将彻底解决所谓癌转移这一世界重大医学难题．     

IFA诊断巴尔通体感染

目的：了解间接免疫荧光抗体测定法(IFA)的技术路线及其在巴尔通体(Bartonella)诊断中的应用。方法：查阅相关文献，认识IFA的敏感性及特异性、交叉反应。结果：IFA对巴尔通体感染的诊断尤其是在属的水平上的敏感性及特异性均较高。结论：IFA通过抗原抗体的特异性反应而对感染病原作出诊断，尽管有部分交叉反应存在，IFA仍以其高度的敏感性及特异性，以及操作简便而成为诊断巴尔通体感染最实用的方法。     

两种不同示踪剂用于蛋白质与抗原分子微阵列信号检测的对比研究

以氧化型琼脂糖凝胶膜为基片，制作蛋白质与抗原分子微阵列，建立了检测固相人IgG,游离IgG和自身抗体分子的免疫学测定模式，分别以辣根过氧化物酶－二氨基联苯胺一双氧水（HRPDAB－H2O2）和胶体金－硝酸银－对苯二酚2种示踪系统作为蛋白质与抗原分子微阵列信号显示剂，并对其作用的原理与特点进行讨论，检测结果发现基于胶体金的免疫金银染色法（IGSS）比固相酶免疫测定法（EIA）敏感，2种示踪系统对固相人IgG的最低检出量分别为0．05ng和0．5ng；而对血清游离IgG的最低检出量IGSS法比EIA法至少高出10倍，两法用于自身抗体的测定亦表现出较好的重复性，在14例HCV感染者中，自身抗体的总体检出率分别为38．6％和31．4％，结果具有显著的同步性，故同时辅以2种示踪剂并用于阵列芯片的联合测试，有助于提高自身抗体的总体检出水平。     

复方癌立消抗肿瘤活性的研究

癌立消为验方，取长白山新鲜中药配制而成，实验用NIH小鼠移植Ehrlieh癌造成实体瘤模型。随机分四组。对照组不给药，阳性对照组给环磷酰胺剂量100mg／kg、癌立消剂量为成人剂量5倍(2．6g／kg)和10倍(5．2g／kg)两组。结果表明：癌立消有明显的抑瘤作用。5倍成人剂量组抑瘤率为43．9％-50．4％，10倍成人剂量组为53．3％-56．3％，而且有统计学意义。