杂交瘤细胞培养保护剂的研究

利用鼠鼠杂交瘤2F7细胞（分泌IgG2，单抗），研究了普生卢内克（Ⅰ）、聚乙二醇（Ⅱ）、甲基纤维素（Ⅲ）、葡聚糖（Ⅳ）、聚醚多元醉（Ⅴ）与杂交留细胞的生物相容性、添加限制浓度以及高速搅拌下添加剂对杂交瘤细胞的保护作用，实验结果表明，0.05%～0.1%的Ⅰ、0.04%～0.02%Ⅱ、0.01%～0.02%的Ⅲ能较好地保护杂效瘤细胞；Ⅳ会抑制细胞生长；Ⅴ会分解细胞。在1.5L生物反应器中培养，添加0.10%Ⅰ于培养基，搅拌转速为70r/min时，细胞能正常生长。     

丝素蛋白作为生物材料的基础研究

研究丝素蛋白作为动物细胞生长基质和生物材料对于细胞生长的促进作用,探索丝素薄膜性能的进一步优化。通过细胞计数和噻唑蓝(MTT)法实验表明,丝素薄膜上猪髋动脉内皮细胞生长的密度是普通细胞培养基质上的242.01%,细胞在薄膜上的贴壁率为在普通基质上的238%。经由酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)处理后,薄膜上的细胞生长密度是未经处理薄膜上的115.98%,细胞的贴壁率为在普通细胞培养基质上的269%。因此,丝素蛋白薄膜可作为动物细胞生长基质,经aFGF处理的薄膜显示更优越的细胞亲和性。     

基因工程血管抑素3A蛋白的分离纯化

在8mol／mL尿素溶液中,以二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,对基因工程血管抑素3A包涵体进行溶解实验。结果发现：1．5h后溶解的上清液蛋白浓度达26．2mg／mL。SDS-PAGE电泳扫描结果显示,3A蛋白经过Sephadex G75分离后PAGE电泳纯达到100％,该步收率达85．82％,相对分子质量为10ku。采用分步稀释法对其进行复性,所获复性3A蛋白经MTT法检测表明：3A蛋白浓度为0．1μg／mL时,对内皮细胞的生长抑制率为93．4％。     

结核病核酸疫苗纯化过程的初步研究

对结核病核酸疫苗的质粒DNA的制备性纯化过程进行了初步研究。此工艺主要包括以简化的碱裂解法处理大肠杆菌、超滤与离心法除大部分杂质并浓缩样品、Q-Sepharose阴离子交换层析、DNA B ioSepharTMFF亲和层析等步骤,以去除细胞RNA和蛋白等杂质,并对不同分子结构的质粒DNA作分离。结果表明:以碱裂液中质粒DNA为计算基准的得率为56.61%、超螺旋质粒DNA的电泳纯度100%。     

微载体培养Vero细胞工艺条件初探

本文研究了细胞生长过程中微载体的种类,浓度及细胞的接种量、溶解氧水平对培养Vero细胞的影响。在pH为7.0～7.4,液解氧水平为30%～50%空气饱和浓度,搅拌速度为25～35r/min,温度为37℃时,在1.5升Celligen~(TM)系统中,连续培养7天,可使细胞浓度达到2.5×10~6 Cells/ml,为接种量的12倍,细胞生长旺盛,形态正常。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化

采用肝素-sepharose亲和层析和SephadexG-100凝胶过滤层析法,从含haFGF基因重组体的大肠杆菌菌体中分离纯化得到人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF)。SDS-PAGE,IEF电泳检测均为单一谱带。HPLC层析显示单一蛋白峰,SDS-PAGE测定rhaFGF分子质量为16.67ku,IEF测定等电点pI为4.8,并用Edman降解法测定了N-末端氨基酸序列,Balb/c3T3细胞培养法测定纯化的rhaFGF生物活性ED50为6μg/L,表明其对细胞分裂有明显促进作用。     

用于培养动物细胞微载体的制备

合成了两种用于动物细胞培养的微载体:葡聚糖和明胶微载体。报道了合成方法。将产物初步用于Vero细胞培养,得到了满意的结果。细胞在微载体上的附着生长良好,和目前广泛使用的Cytodex 1微载体效果相仿。当DEAE-Sephadex 1.5微载体浓度为2mg/ml时,在1.5L Celligen细胞培养器中培养120小时,细胞浓度可达1.2×10~6细胞/毫升,为接种浓度的5倍,达到了文献中报道的水平。     

藻粉中叶黄素提取工艺的优化

采用酶提取法对藻粉中叶黄素提取工艺进行研究,实验分别考察了不同提取剂、不同种类酶、酶的使用量、酶解时间及搅拌时间对叶黄素提取的影响。在单因素实验的基础上,选取影响较大的3个因素采用L9(33)正交实验考察对叶黄素提取的影响,以叶黄素提取量为指标,确定了最佳工艺条件:酶液添加量为5mL,酶解时间2.5h,磁力搅拌时间2.5h,此条件下叶黄素最佳提取量为2.18mg/g。