树干毕赤氏酵母木糖还原酶Lysine270突变的理性设计

木糖代谢过程中木糖还原酶（XR）和木糖醇脱氢酶（XDH）的氧化还原不平衡是利用纤维素生成酒精的关键问题之一.前期研究发现Lysine270是形成树干毕赤氏酵母木糖还原酶（P. stipitis XR）与NAD(P)结合口袋的关键氨基酸之一.为研究Lysine270对P. stipitis XR辅酶偏好性的影响,本研究将Lysine270用其它19种氨基酸替代,构建19种不同的XR突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD(P)之间的相互作用,并从中选择两个突变子K270R和K270N进行试验验证.树干毕赤氏酵母木糖还原酶K270R、K270N突变基因及野生基因WT-XYL1分别在大肠杆菌中进行了表达,表达后的蛋白经His-Tag纯化柱纯化后再进行辅酶偏好性及酶学性质研究.结果发现,Lysine270突变直接影响XR与NAD(P)的Km值,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.     

物理化学诱变选育冠菌素高产菌株

冠菌素是一种能够引起大豆叶片黄萎病的致病因子.它作为茉莉酸类物质的结构类似物在植物抵抗各种环境胁迫中起着重要作用.但是目前冠菌素产量比较低,这就限制了冠菌素生理作用的广泛研究.本试验通过紫外、亚硝基胍结合诱变选育冠菌素高产突变体,得到的突变体冠菌素产量是出发菌株的1.8倍,命名为M-18.该菌株在18℃下发酵生产冠菌素,产量大幅度提高,发酵周期明显缩短.     

空间环境对恶性黑色素瘤B16细胞间通讯功能的影响

观察空间诱变后恶性黑色素瘤B16细胞株的细胞间通讯功能及细胞间黏附能力的变化,并探讨可能的机理。应用细胞低温长期生存系统,将B16细胞株搭载于“第20颗返回式卫星”,返地后单克隆化,从得到的110株单克隆空间诱变B16细胞株中随机选取6株,编号为39#～44#,常规培养6代后和对照细胞株同时做MTT和FCM,检测细胞增殖和周期分布;用划痕标记染料示踪技术检测细胞间通讯功能;将有变异的细胞接种C57BL/6J小鼠,免疫组化观测CD31蛋白的表达量。初步筛选出两株(39#、44#)变化比较明显的细胞株,44#细胞增殖能力降低、G1期分布增加、细胞间通讯功能增强、CD31蛋白表达增强;39#细胞增殖能力升高、G1期分布减少、细胞间通讯功能减弱、CD31蛋白表达减少。空间环境的作用使体外培养肿瘤细胞产生多向变异,有可能筛选出有意义的细胞株做进一步的研究。     

红霉素产生菌的诱变及培养基优化研究

以红色糖多孢菌08L作为出发菌株进行诱变,选育高产菌株。结果表明,诱变得到的UL5菌株发酵水平比出发菌株提高12.6%。再通过培养基优化,其组成为淀粉3%,糊精3%,葡萄糖2%,黄豆饼粉3%,玉米浆1%,硫酸铵0.15%,碳酸钙0.6%,磷酸二氢钾0.02%的条件下,UL5菌株在诱变的基础上,发酵水平再提高15.2%。     

中国林蛙南移养殖雌性诱变技术研究

当前中国林蛙的全人工养殖已经在我国各地兴起,中国林蛙南移养殖技术已取得重大突破,但性别比例失调问题严重,雌蛙和雄蛙的比例只有3:7,严重影响养殖效益,制约养蛙业的发展.为调整林蛙性别比例,分别在实验室内和浙江省新昌县新益生物科技有限公司中国林蛙养殖中心采用控温及在蝌蚪饵料中添加性激素双重调控方法,诱导性腺分化,达到了调整林蛙性别的目的,并对激素诱导的合适浓度和最佳时期进行了研究,使中国林蛙雌雄比例达到7:3.为促进中国林蛙南移养殖的发展提供了切实可行的雌性诱变技术.     

A类维生素和环磷酰胺按不同程序处理V79细胞后对诱发抗白喉毒素突变型(DT~r)和SCE频率的影响

本实验用A类维生素和间接诱交剂环磷酰胺按不同程序处理V79细胞,结果证明对DT~(?)和SCE频率均无显著影响.因此A类维生素对环磷酰胺在化学诱变过程中抑制作用的本质,本文认为不是由于改变和保护了细胞膜的结构所致.     

Mutagenesis of Ser24 of Cytochrome b559 α Subunit Affects PSII Acitivies in Chlamydomonas reinhardtii

In order to study the functions of cytochrome b559 (Cyt b559) in photosystem two (PSII) activity, mutant S24F of Chlamydomonas reinhardtii was constructed using site directed mutagenesis, in which Serine24 (Ser24) locating downstream of Histidine23 (His23) in α subunit of Cyt b559 was replaced by Phenylalanine (Phe). Physiological and biochemical analysis showed that mutant S24F could be grown photoautotrophically or photoheterotrophically. However, their growth rate was slower either on HSM or TAP medium than that of the control; Analysis of PSII activity revealed that its oxygen evolution was about 71% of wild type (WT); The Photochemical efficiency of PSII (Fv/Fm) of S24F was reduced 0.23 compared with WT; S24F was more sensitive to strong light irradiance than the wild type; Furthermore, SDS-PAGE and Western-blotting analysis indicated that the expression levels of α subunit of Cyt b559, LHCII and PsbO of S24F were a little less than those of the wild type. Overall, these data suggests that Ser24 plays a significant role in making Cyt b559 structure maintain PSII complex activity of oxygen evolution although it is not directly bound to heme group.     

定点突变技术在转氨酶改造中的应用

对定点突变技术进行简要介绍，并对此技术在改造转氨酶的活性、稳定性及底物特异性等方面的最新进展进行了综述。同时，也对定点突变技术的发展趋势进行了展望。以期能为该领域的研究人员提供有价值的参考。