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171.
从四倍体鱼脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增并克隆了四倍体鱼GTH-α亚基4种不同的cD-NA,分别命名为GTH-α1、GTH-α2、GTH-α3和GTH-α4.其中,GTH-α1和GTH-α2的cDNA都由363个核苷酸组成,编码117个氨基酸;而GTH-α3和GTH-α4都由366个核苷酸组成,编码118个氨基酸.分析表明,四倍体鱼4种不同的GTH-α亚基之间的核苷酸和氨基酸的同源性非常高,均在96%以上;四倍体鱼和原始亲本红鲫和鲤鱼GTH-α亚基氨基酸序列之间的同源性也非常高,如四倍体鱼GTH-α1和原始母本红鲫GTH-α1氨基酸的同源性为99.2%,四倍体鱼GTH-α3和原始父本鲤鱼GTH-α1氨基酸的同源性达到了100%. 相似文献
172.
南海波 《沈阳师范大学学报(自然科学版)》2006,24(2):228-230
大肠杆菌碱性磷酸酶是同二聚体金属酶,被phoA基因编码.采用PCR方法从大肠杆菌K12中扩增到碱性磷酸酶基因(phoA).用限制性内切酶BamHI和HindⅢ将片段插入克隆载体pETBlue-2.该基因被重组、转化后在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,而后进行SDS-PAGE检测及紫外吸收分析测OD410.克隆得到了phoA基因并实现了蛋白表达,碱性磷酸酶的活性提高了18,3倍,为进行组织化学、免疫印迹、突变分析等工作打下了坚实的基础. 相似文献
173.
p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的押癌基因,通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用分子生物学软件GCK2.0对整个克隆过程进行分析,制定克隆策略,通过测序鉴定结果,得到了舍目的基因p53cDNA全序列的pTRE—p53重组质粒。通过GCK2.0分析,减少了基因克隆的盲目性,提高了工作效率。 相似文献
174.
细胞神经网络(CNN)设计的关键是找出其模板参数(Cloning template),所提出的一种基于遗传算法的细胞神经网络模板设计算法,经实验证明是可行的. 相似文献
175.
盐生盐杆菌含耐盐相关基因DNA片段的克隆 总被引:3,自引:0,他引:3
将盐生盐杆菌总DNA的BamHI不完全酶切片段与质粒pUC19连接成重组质粒,并以重组质粒转化E.coli JM101.经X-Gal-IPTG法筛选白色重组子,结合高盐平板检测,已经获得了3株比原受体菌的耐盐性提高30%-67%的转化子。重组质粒酶切电泳分析表明,被克隆的盐生盐杆菌含耐盐相关基因的DNA片段长度在1.0-3.5kb之间。 相似文献
176.
扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达 总被引:2,自引:0,他引:2
采用TRIzol试剂一步法所抽提的总RNA的D(260)/D(280)值为1.82,甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带。根据扩展青霉所产碱性脂肪酶(Lip PE)N末端20个氨基酸残基序列和真核生物mRNA3‘端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT-PCR技术和3‘-RACE法扩增了Lip PE成熟肽编码区和3‘非编码区的cDNA,直接将该PCR产物克隆至pUCm-T载体中。序列分析表明,该碱性脂肪酶含有258个氨基酸,其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly。进一步采用Clot Tech公司的SMART^TM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip EP完整cDNA的分析测定。最后将编码完整脂肪酶蛋白的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果表明,所表达的GST-Lip EP融合蛋白分子质量约为53ku;免疫印迹(Western Blotting)技术证明了所克隆的cDNA确为编码扩展青霉WMC20718脂肪酶的基因。 相似文献
177.
采用PCR技术,扩增大鼠CuZn-SOD cDNA,双酶切后与表达载体pBV220连接,构建出表达质粒pBV-RCS,并转化大肠杆菌DH5α,经金属离子和42℃诱导,pBV-RCS得到高表达,经SDS-PAGE及薄层扫描测定表达蛋白占菌体总蛋白的49%,是目前国内外SOD高表达菌株之一^[1,2],表达蛋白以包涵体形式存在于菌体内,经超声波破壁后,再经透析复性和稀释复性,表达蛋白具有特异性SOD酶活性(1298U/mL)。α 相似文献
178.
植物甜蛋白thaumatin基因重组表达质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
利用NDA重组技术,将植物甜蛋白thaumatin基因克隆至植物表达载体pBI121中,成功地构建了重组植物表达质粒pBI121-th。 相似文献
179.
带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物重组表达质粒pBI-GFP的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
利用 DNA重组技术 ,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因 ( gfp)克隆到植物表达载体p BI-1 2 1中 ,成功地构建了植物重组表达质粒 p BI-GFP. 相似文献
180.