PCR快速检测常见具有毒性质粒的沙门氏菌

针对常见具毒性质粒的沙门氏菌的spvR基因，设计出PCR特异引物spvRP35-P36，以便快速检测出具有毒性质粒的沙门氏菌。验证采用13株沙门氏菌和4株非沙门氏菌，其中6株常见具有毒性质粒的沙门氏菌均获得特异性扩增，7株不舍毒性质粒的沙门氏菌均未获得特异性扩增，4株非沙门氏茵检测结果为阴性。结果表明，本文中设计的引物具有高度的特异性，适用于常见具有毒性质粒沙门氏菌的快速检测，此引物已获国家发明专利。     

Introduction of antisense waxy gene into main parent lines of indica hybrid rice

Amylose content in rice endosperm is one of thekey determinants of rice eating and cooking quality, and thepoor quality of indica hybrid rice is closely related to thehigh amylose level in rice grains. In order to improve thegrain quality of the indica hybrid rice by genetic engineering,an antisense fragment of rice waxy gene, driven by theintroduced into three major parent lines of indica hybrid rice,all contain a high amylose level in the grains, via Agrobacte-rium, and more than 100 hygromycin-resistant plants wereregenerated. The analysis of PCR amplification and South-ern blots indicated that the T-DNA containing the antisensewaxy gene had been integrated into the genome of transgenicrice plants. Most of the primary transgenic rice plants grewnormally, and the mature seeds from these transgenic plantswere performed for analysis of the amylose content. Theresults showed that the amylose content in the endosperm ofsome grains was reduced and the lowest reached 7.02% inone homozygous transgenic line, 72.4% lower than that ofthe wild type. The influence of the altered amylose contenton the gelatinization temperature and gel consistency wasalso observed in several homozygous transgenic rice plants.     

农杆菌介导的ACC氧化酶反义基因转化甜瓜品种河套蜜瓜的研究

将从甜瓜品种河套蜜瓜中克隆的ACC氧化酶基因cDNA片段反向构建到植物表达载体pROK II中,获得重组质粒pRACO 1,用三亲融合法将其导入根癌农杆菌LBA 4404中,转化河套蜜瓜子叶外植体,在芽诱导培养基M S IAA 0.8 m g/L BA 1.0 m g/L ABA 0.26 m g/L C ef 500 m g/L K an 75 m g/L中诱导生芽,待芽长到2cm左右转入M S IBA 0.5 m g/L C ef 300 m g/L K an 50 m g/L的培养基中诱导生根,1~2周后可诱导产生大量的根,形成完整的转化小植株.经PCR检测证明,目的基因已整合到河套蜜瓜的基因组中.     

血管内皮生长因子基因反义核酸设计及其对HL60细胞生长的影响

目的:用计算机设计筛选出血管内皮生长因子(VEGF)的高效反义核酸;用实验方法研究VEGF反义核酸对HL60细胞生长的影响。方法:用RNAstructure(version3 7)软件,选择总自由能(Overall△G37)的相对低的反义核酸,共计7条,长度18～20核苷酸,全硫代修饰;细胞培养72h,采用胎盼蓝拒染法观察存活细胞,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平,分析反义核酸对HL60细胞的作用。结果:筛选出6条反义药物对HL60细胞生长有明显抑制作用,其中4条优于阳性对照组(A2);A7组细胞生长抑制率达41 74%。培养液中VEGF蛋白表达抑制率达47 81%。Overall△G37与反义核酸活性密切相关(r=-0 842,P<0 01)。结论:计算机辅助设计有助于获得更好的反义药物,VEGF反义核酸可抑制HL60细胞生长及VEGF蛋白表达,VEGF可能成为白血病治疗的新靶点。     

血管内皮生长因子反义核酸增强HL60和K562细胞对As_2O_3的敏感性

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸能否提高HL60和K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性。方法:采用经筛选所得的最优反义核酸(A7),20个碱基经过全硫代修饰;以脂质体介导转染细胞,反义核酸和As2O3联合作用72h以后,用MTT法检测细胞生长情况,求IC50值;用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果:VEGF反义核酸可显著降低HL60、K562细胞对As2O3的IC50值,下调VEGF蛋白的表达,增加As2O3诱导的HL60、K562细胞凋亡作用。结论:VEGF反义核酸具有增强HL60和K562细胞对As2O3的敏感性,增强As2O3诱导的HL60和K562细胞凋亡作用;提示内源性VEGF蛋白具有使细胞产生耐药性的作用。     

醇酒酵母反义snoRNA一级结构的分析

对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae基因组中发现和鉴定的41个反义snoRNA进行一级结构的分析表明：酿酒酵母snoRNA基因富含AT：41个反义snoRNA全都有boxC'和boxD'结构元素；根据反义snoRNA保守结构元素及反义序列的数目和位置的特点，将反义snoRNA分为5种结构类型，认为snoRNA具有两个主要的功能区；在snR57、snR59、snR71和snR75不具有指导甲基化反义序列的功能区中，发现有一段长10－12个核苷酸的序列与rRNA互补，为进一步研究反义snoRNA的结构与功能提供了重要线索。     

2种PCR技术扩增微分离的蚕豆染色体

用接头介导的PCR (polymerase chain reaction, LA-PCR) 和简并寡核苷酸PCR(DOP-PCR)2种技术对微分离的蚕豆(vicia faba)大M染色体进行了扩增,并对扩增结果及2种PCR技术的优缺点进行了比较.结果表明,LA-PCR的扩增产物大小为0.3～3kb, 而DOP-PCR的扩增产物大小为0.3～1.3kb. LA-PCR的对照中未观察到扩增产物,而DOP-PCR的对照中却明显观察到扩增产物,此扩增产物是由于引物之间相互退火而形成的二聚体或更高级的聚合体. LA-PCR的Southern杂交信号明显强于DOP-PCR,可见LA-PCR的扩增效率明显高于DOP-PCR.     

蝴蝶兰ACC氧化酶cDNA片段的克隆及其反义植物表达载体的构建

根据已报道的蝴蝶兰ACC氧化酶的基因序列,设计了一对引物,通过RT—PCR从蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC氧化酶的cDNA片段,将其连接到pMD19-T载体上进行测序．结果显示,该片段与参考的已报道序列具有99．70％的同源性．测序后将该基因的cDNA序列反向插入pBI221的CaMV35S启动子和nos terminator之间,构建了蝴蝶兰ACC氧化酶的反义基因植物表达载体,为进一步转化蝴蝶兰研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础．     

甘蓝型油菜3个AP3重复基因植物反义表达载体的构建及遗传转化

利用pFGC5941构建了甘蓝型油菜3个AP3重复基因的植物反义表达载体pFGC5941-BnAP3-2、pFGC5941-BnAP3-3和 pFGC5941-BnAP3-4.采用快速冻融法,将载体导入农杆菌EHA105,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L PPT的MS培养基中筛选,获得反义BnAP3-2基因的抗性再生植株31株,反义BnAP3-3基因的抗性再生植株20株,反义BnAP3-4基因的抗性再生植株42株.PCR鉴定结果显示,获得BnAP3-2反义的基因植株12株,BnAP3-3反义的转基因植