从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质配基

为了研究噬菌体展示技术的应用，以溶菌酶为靶分子从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质的高亲和力噬菌体配体，所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达0．634．通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列，认为基元HWWW是肽段与酶分子发生亲和的必需序列．此外，由于靶分子和高亲和性展示肽的等电点分别为11．2和6．74，因此在亲和环境中携带异种电荷，利于亲和吸附的发生，而此时低亲和性展示肽与靶分子携带同种电荷，阻碍了亲和吸附．同时，高亲和性肽段HWWPAS和与其有较高同源性的肽段HWTWWNL都有适中的疏水性，这有利于肽与靶分子表面的疏水位点相互作用从而产生亲和吸附．     

vMIP-II肽在大肠杆菌中的双辅助子高效表达

目的 :构建病毒趋化因子 (vMIP -II)基因表达载体并在大肠杆菌中以辅助折叠和辅助阻遏方式高效表达vMIP -II重组肽 .方法 :用PCR法获得vMIP -II基因片断 ,将其插入表达载体pQE ,构建重组表达载体pEh -vMIP .表达载体、辅助折叠子和辅助阻遏子载体共转染大肠杆菌DH5α ,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆 .结果 :阳性重组子在大肠杆菌细胞中经IPTG诱导可高效表达vMIP -II重组肽 ,蛋白电泳分析可观察到一相对分子质量与理论值相符 (约 8× 10 3)的诱导表达条带 ,其表达量约占菌体总蛋白的 2 0 % .分析表明 ,vMIP -II重组肽主要以可溶性形式表达 .结论 :用双辅助技术在大肠杆菌中高效表达较小相对分子质量vMIP -II的成功 ,为进一步研究vMIP -II的功能及应用奠定基础 ,也为同类小分子、易降解的肽类物提供基因工程表达方法     

亲环素A抗原表位在三维结构中的初步定位

以抗人亲环素A单克隆抗体D4作捕获抗体，用噬菌体展示库鉴定出亲环素A模拟抗原表位的氨基酸序列为WSLQSFL，在亲环素A的一级结构中没有相同的序列，提示亲环素A抗原表位为构象型的，亲环素A的三维空间结构已测定，利用RasMol等蛋白质三维结构观察软件，可以初步确定亲环素A的抗原表位的时间位置，此抗原表位与环孢素的结合位点有重叠。     

箬竹叶抑菌成分的分离纯化及结构分析

箬竹叶干粉加1％碳酸钙，用甲醇抽提至色淡，抽提液浓缩后经石油醚萃取，水相过聚酰胺柱，用水和95％甲醇洗脱，醇洗部回收甲醇经60℃低温干燥，得红棕色结晶性粉末，该物质纸层析，硅胶薄板层析，得单一色斑，在聚酰胺柱色谱中呈单一吸吸收峰，经高压液相色普检验，单一主峰面积比例为92．31％，用盐酸镁粉检出其为黄酮化合物，经酸水解，用硅胶薄板层析检出有木糖，用Uv-vis光谱法及化学法对其结构进行分析，该化合物具有抑菌活性，水解后抑菌活性升高。     

Identification of a New Member of the Ep-CAM (17-1A) Tumor-Associated Antigen Family

IntroductionThe tumor- associated antigen,epithelial celladhesion molecule (Ep- CAM ) ,defined by themurine m Ab1 7- 1 A,is expressed on the surface ofvarious types of normal and malignant humanepithelial tissues,which makes it an attractivetarget for immunotherapy[15] . Adjuvantimmunotherapy treatment with the m Ab 1 7- 1 Asuccessfully reduced the 5 - year mortality andrecurrence rate among colorectal cancer patientswith minimal residual disease[6 ] .　Studies on Ep- CAM,alias 1 7- 1 A a…     

Optimization of the cellular import of functionally active SH2-domain-interacting phosphopeptides

Phosphopeptides interacting with src homology 2 (SH2) domains can activate essential signaling enzymes in vitro. When delivered to cells, they may disrupt protein-protein interactions, thereby influencing intracellular signaling. We showed earlier that phosphopeptides corresponding to the inhibitory motif of Fcγ receptor IIb and a motif of the Grb2-associated binder 1 adaptor protein activate SH2-containing tyrosine phosphatase 2 in vitro. To study the ex vivo effects of these peptides, we have now compared different methods for peptide delivery: (i) permeabilization of the target cells and (ii) the use of cell-permeable vectors, which are potentially able to transport biologically active compounds into B cells. We found octanoyl-Arg₈ to be an optimal carrier for the delivery of phosphopeptides to the cells. With this strategy, the function of cell-permeable SHP-2-binding phosphopeptides was analyzed. These peptides modulated the protein phosphorylation in B cells in a dose- and time-dependent manner. Received 27 July 2006; received after revision 4 September 2006; accepted 18 September 2006     

辣椒碱单体、二氢辣椒碱单体和降二氢辣椒碱单体抑菌效果研究

通过滤纸片法就辣椒碱单体、二氢辣椒碱单体、降二氢辣椒碱单体及辣椒素对细菌和真菌的抑制效果进行了考察,结果表明：辣椒碱单体具有明显的抑菌作用,抑菌效果明显好于二氢辣椒碱单体、降二氢辣椒碱单体和辣椒素。进一步比较发现,辣椒碱单体对5种菌株抑菌效果由大到小依次为金黄色葡萄球菌 > 大肠杆菌 > 铜绿假单胞菌 > 白色念珠菌 > 黑曲霉菌。因此,以辣椒碱单体为主要原料开发天然高效的抑菌防腐剂具有实际意义。     

黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的抑菌作用

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种生长快速且肉质鲜美的经济型海水养殖鱼类,但是近些年为满足人们的日常需求,在不断扩大养殖的同时病菌也逐渐泛滥。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是华南沿海地区海水养殖鱼类细菌性鱼病的主要致病菌之一,给水产养殖业带来巨大损失。本研究对黄连(Coptis chinensis Franch)的抗菌作用进行系统研究,目的是为由溶藻弧菌引起的爆发性细菌性鱼病的高效防治提供科学的用药依据。本研究采用二倍稀释法测定黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和半数致死量(LD50),并使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定细菌超声破碎上清液中可溶性蛋白含量。结果表明,黄连水提物对溶藻弧菌具有明显的抑制作用,其对溶藻弧菌的MIC、MBC和LD50的值分别为7.800mg/mL、31.250mg/mL和15.625mg/mL。胞内可溶性蛋白含量变化的结果提示:黄连发挥抑菌作用的机制可能是通过损伤细菌的细胞壁导致细菌内容物的释放并引起菌体裂解死亡。黄连具有发展成为一种高效抗水产病害中草药制剂的潜力。     

外源氨基酸对侧孢短芽孢杆菌S62-9产Brevilaterin的影响

为探究添加外源氨基酸对侧孢短芽孢杆菌S62-9(Brevibacillus laterosporus S62-9, BL)分泌抗菌肽Brevilaterin的影响,以BL发酵液的抗菌活性和Brevilaterin的组分变化为指标,分别采用琼脂扩散法和高效液相色谱法进行了分析。结果表明:添加L-缬氨酸、L-甲硫氨酸和2-氧代-3-甲基丁酸均能提高发酵液抗菌活性,抑菌直径最高可增加18.08%。添加外源氨基酸还能改变Brevilaterin的组分构成。添加L-甲硫氨酸后发酵液中只有抗菌肽组分Brevilaterin B和C,且二者间的相对比例发生反转;而添加L-缬氨酸或2-氧代-3-甲基丁酸还能促进BL分泌多种新组分。添加外源氨基酸能有效提高发酵液抗菌活性并改变抗菌肽的组分构成,研究结果旨在为人工调控微生物合成新型、高效的抗菌肽奠定一定的理论基础。     

海金沙多糖的分离纯化及抗菌活性

从海金沙中提取水溶性粗多糖,用Sevag法脱蛋白后,经DEAE-纤维素52柱层析和葡聚糖凝胶G-200柱层析可得到纯品,利用纸片法进行了抑菌实验.结果表明:海金沙多糖显示了不同程度的抗菌活性,对普通变形杆菌和稻瘟病病原菌有相对较强的抑制活性.