人源抗菌肽LL-37在烟草中的表达

为探讨用植物生物反应器生产LL-37的可行性,利用DNA重组技术将LL-37与植物病程相关蛋白信号肽基因融合,经测序证实序列和阅读框正确后,连接到质粒pBin438上,构建含LL-37 cDNA植物分泌型表达载体pBin/LL-37.通过根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacience)介叶盘法转化烟草(Nicotiana tobacum.NC-89).用PCR和Western blot对转化植株进行分子鉴定.80%转基因植株表达重组LL-37多肽.T0代转基因烟草的蛋白粗提物有抑制Staphylococcus aureus和Escherichia coli生长的活性.LL-37基因在转基因烟草中成功表达,提示用植物表达系统生产活性LL-37蛋白是可行的.     

hsBLyS分泌型表达载体构建及CHO表达

本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列；信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子(human soluble B Lymphocyte Stimulator，hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因；融合基因插入pcDNA3、pcDNA3．1、pEFneo质粒；信号肽引物设计时，突变同义密码，最终重组质粒成为分泌表达质粒；磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSV-dhfr，共转染CHO-dhfr^-细胞；选择培养液筛选，氨甲喋呤扩增表达，获稳定表达rhsBLyS细胞株；ELISA检测浓缩表达上清，结果表明：rhsBLyS表达量由0．13μg/mL上升至0．55μg/mL。     

姬松茸菌丝体中活性肽提取工艺的初步研究

通过对姬松茸菌丝体中活性肽提取工艺的初步研究，并采用单因素考察及正交实验法对姬松茸茵丝体的活性肽提取条件进行了优化。结果：在姬松茸干菌丝粉中加入8倍体积的水，在温度28℃和pH9．0的条件下，用70％乙醇的沉淀提取6h，所得提取液中活性肽的含量及抗氧化性均最优，经毛细管电泳图谱分析其活性肽分布也较适宜。     

室温下N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成吡咯-2,5-二乙酰胺

在室温下用一锅反应法以二环己基碳二亚胺（DCC）（2 equiv．）为偶合试剂，使用过量（4equiv．）的胺，用N-羟基琥珀酰亚胺（Hosu）（2 equiv．）活化酯法合成了吡咯-2，5-二酰胺，且产率（70％）比在低温时（63％）有所提高．探讨了选用不同的合成方法及偶合试剂以及反应条件和试剂的用量对合成目标产物的影响．     

食品源单增李斯特菌喹诺酮类抗生素耐药机制研究

以945株食品源单核细胞增生李斯特菌(Listeria monoocytogens,LM)作为研究对象,分析其对喹诺酮类抗生素耐药的分子机制。采用KB法筛选出喹诺酮类耐药的LM,利用PCR检测喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance-determining region,QRDR)的基因突变以及质粒介导喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因的分布情况,结合最小抑菌浓度(MIC)值和外排泵抑制剂利血平分析其外排泵的作用,多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)结合血清组对耐药菌株进行遗传多样性分析。结果表明:32株耐药菌株中gyrA、gyrB、parC与parE的QRDR均未发生氨基酸突变,且未检测到PMQR相关基因;而7株fepR基因发现新的氨基酸突变位点,其作用机制有待阐明;外排泵基因lde在耐药LM中皆有检出,78.1%(25/32)LM加入利血平后MIC值降低至原MIC的1/2以下,lde可能是导致LM对喹诺酮耐药的重要因素。血清组分析发现32株耐药菌株分属血清组I.1、I.2、II.1、II.2和III,MLST共分为10种ST型,其中ST87、ST9和ST8为优势株,具有一定的致病能力。结果表明,lde是LM产生喹诺酮耐药的重要因素,但LM潜在喹诺酮耐药分子机制仍有待阐明,同时其潜在的致病性应引起重视。     

海洋源乳酸菌在黄花鱼肉保鲜中的应用研究

研究了分离自海洋鱼类的乳酸菌对黄花鱼肉的保鲜作用,通过牛津杯法抑菌实验测定海洋鱼类来源乳酸菌对7株指示菌Listeria monocytogenes、Salmonella enterica、Staphylococcus aureus、Vibrio parahaemolyticus、Serratia marcescens、Acinetobacter spp.、Pseudomonas spp.的抑制作用,发现Lactobacillus plantarum Y12、L. plantarum Y3-1、L. plantarumY42抑制指示菌生长的效果最好;接种菌株Y12、Y3-1、Y42的鱼肉在4℃保藏8d,其挥发性盐基氮(TVBN)含量与未接菌鱼肉TVBN含量之间无显著差异(p>0.05),证明菌株Y12、Y3-1、Y42对鱼肉无致腐作用。将Pseudomonas spp.单独或L. plantarum Y12与Pseudomonas spp.混合接种于灭菌鱼汁,发现第5天混合培养鱼汁TVBN值((24.55±1.00)mg/100g)显著低于(p<0.05)单独接种鱼汁的TVBN值((29.09±0.60)mg/100g);混合培养鱼汁的pH值低于单独接种鱼汁的pH值,而感官得分高于单独接种鱼汁感官得分。新鲜黄花鱼肉中接种Pseudomonas spp.或混合接种L. plantarum Y12与Pseudomonas spp.,保藏第5天,混合接种的鱼肉TVBN值((27.30±1.97)mg/100g)显著低于(p<0.05)单独接种鱼肉的TVBN值((34.30±0.01) mg/100g),并且混合培养的感官评分高于单独培养的鱼肉。结果表明,海洋鱼类来源的L. plantarum Y12具有抑制鱼肉中腐败菌生长、防止鱼肉腐败的功能。     

猪皮胶原肽-锌螯合物的制备工艺研究

研究猪皮胶原肽-锌螯合物的制备工艺。以猪皮为原料，制备猪皮胶原肽-锌螯合物；以螯合率为指标，研究了猪皮胶原肽与锌质量比、pH、温度、时间对螯合率的影响；通过单因素试验、响应面法试验考察优化猪皮胶原肽的富锌工艺。结果显示，猪皮肽-锌螯合的最佳工艺为猪皮肽与锌质量比2:1，螯合pH 7.0，螯合温度50 ℃，螯合时间50 min，在此条件下，试验螯合率最佳，为69.27%，与模型预测值69.92%相近。该研究为新型生物肽 锌螯合物的研制、猪皮的高值化利用提供了依据。     

基于全基因组测序的粘绿木霉Gv29-8中分泌蛋白预测

粘绿木霉Gv29-8作为木霉属中重要的生防菌之一,对该菌分泌蛋白进行预测及其特征进行明确具有重要的理论意义。利用SignalP、ProtComp等预测程序对该菌中12427条蛋白质序列进行分泌蛋白找寻,并对上述分泌蛋白的氨基酸分布、信号肽长度大小及切割位点等性质进行分析。粘绿木霉含有分泌蛋白为377个,其氨基酸长度、信号肽长度与植物病原菌不同;信号肽切割位点属于A-X-A类型,与其他已经报道的植物病原真菌、卵菌中分泌蛋白信号肽切割位点一致。     

Electro-spinning Antimicrobial N-halamine Modified Poly （vinyl alcohol） Nanofibers

Antimicrobial poly( vinyl alcohol)( PVA) nanofibrous composites were prepared by adding 3-( 2,3-dihydroxypropyl)-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione( N-halamine diol) to the PVA solution using electro-spinning technique upon curing and exposure to diluted sodium hypochlorite. Scanning electron microscopy( SEM) demonstrates that PVA nanofibers formed with diameters of( 255 ±94) nm. Cross-linked PVA nanofibers with N-halamine diol precursor and 1,2,3,4-butanetetracarboxylic( BTCA) showed good water resistance. The chlorinated PVA nanofibrous mats completely inactivated Staphylococcus aureus( Gram-positive) and Escherichia coli O157: H7( Gram-negative) with 7 log reductions( the reduction of the bacterial concentration in logarithm) within 5min and 1 min of contact time,respectively.     

Apolipoprotein M affecting lipid metabolism or just catching a ride with lipoproteins in the circulation?

Apolipoprotein M (apoM) is a novel apolipoprotein found mainly in high-density lipoproteins (HDL). Its function is yet to be defined. ApoM (25 kDa) has a typical lipocalin ?-barrel fold and a hydrophobic pocket. Retinoids bind apoM but with low affinity and may not be the natural ligands. ApoM retains its signal peptide, which serves as a hydrophobic anchor to the lipoproteins. This prevents apoM from being lost in the urine. Approximately 5% of HDL carries an apoM molecule. ApoM in plasma (1 μM) correlates strongly with both low-density lipoprotein (LDL) and HDL cholesterol, suggesting a link to cholesterol metabolism. However, in casecontrol studies, apoM levels in patients with coronary heart disease (CHD) and controls were similar, suggesting apoM levels not to affect the risk for CHD in humans. Experiments in transgenic mice suggested apoM to have antiatherogenic properties; possible mechanisms include increased formation of pre-? HDL, enhanced cholesterol mobilization from foam cells, and increased antioxidant properties. Received 28 November 2008; received after revision 15 December 2008; accepted 16 December 2008