大肠杆菌L-组氨酸生物合成途径的改造及其对工程菌L-组氨酸产量的影响

改造大肠杆菌L–组氨酸生物合成途径,以提高L–组氨酸的产量.用NTG诱变大肠杆菌M-17(SGr),依次赋予其2–噻唑丙氨酸(2-TA)和组氨酸氧肟酸盐(HisHx)遗传标记,再以突变株M-18(SGr+2-TAr+HisHxr)基因组为模板,扩增组氨酸操纵子基因,构建出重组质粒pUC118-his-operon,将重组质粒导入突变株M-18(SGr+2-TAr+HisHxr)得到工程菌E.coli M-19(SGr+2-TAr+HisHxr/pUC118-his-operon).根据zwf和prs基因序列分别合成引物进行PCR扩增,PCR产物与载体pSTV28连接,构建重组质粒pSTV28-zwf、pSTV28-prs和pSTV28-zwf-prs,将重组质粒分别转化至工程菌E.coli M-19,摇瓶发酵测定重组工程菌L–组氨酸的产量.摇瓶发酵结果显示,L–组氨酸产量与对照株相比,工程菌E.coli M-19提高了4.5倍,双质粒系统重组工程菌E.coli MZH-19、E.coli MPH-19和E.coli MZPH-19分别提高了5.14、5.78、8.43倍.     

黄瓜线粒体线形类质粒pC4的核酸序列和性质

津研四号黄瓜线粒体中除了主环DNA外，还有4种类质粒（pC1,pC2,pC3,pC4)。电子显微镜观察结果表明pC4为线形类质粒。将pC4克隆至E.coli JM109中，对pC4进行序列测定和分析。pC4全长370bp，是已知的植物线粒体类质粒中最短的，pC4富含AT，有多个正向和反向重复序列，其两端为35bp的正向重复序列。pC4中的ORF都较短，不足以编码有功能的蛋白。对pC4进行同源性检测，发现pC4与线粒体主DNA和叶绿体DNA缺乏同源性，而与核DNA有同源性。在其他没有线粒体类质粒的黄瓜品种核基因组中也存在pC4的同源序列，pC4与黄瓜不同品种核基因组的杂交带型有一定差别。     

聚乙烯基吡咯烷酮对质粒DNA降解效应的研究

为评估聚乙烯基吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone,PVP）的生物可利用性,研究了不同相对分子质量PVP对闭合环状双链质粒DNA pBR322的降解效应.实验结果表明：在常温、非光催化条件下,相对分子质量小的PVP（PVP8000）可引起质粒DNA构象的改变,并且这种效应与反应温度、反应时间及PVP的相对...     

以链霉菌高拷贝质粒pIJ101上一个传一性DN…

在链霉菌高拷贝质粒ｐＩＪ１０１上发现并定位了一般０．６ｋｂ的ＤＮＡ片段，这段ＤＮＡ可专一性地刺激不同配对的质业之间共整合体的形成以及在细胞中的累积。形成共整合体的２个质粒之间的亲缘关系可以相近，也可以很远。然而，这段刺激２个质粒分子之间共整合的ＤＮＡ片段在２个质粒上必须处于互反取向，共聚合体才能形成；     

The DNA concentration effect on DNA radiation damage induced by <Superscript>7</Superscript>Li ions and γ rays

To evaluate the influence of the DNA concentration in the aqueous solution on DNA radiation damage, the plasmid DNA in the presence or absence of Mannitol （scavenger of free radical OH.） was irradiated by ^7Li ions and γ rays at various DNA concentrations. Gel electrophoresis analysis revealed that the DNA damage of single and double strand breaks induced by irradiation became more severe at lower DNA concentration. In the condition of γ-ray irradiation, most of double strand breaks （DSB） damage was neutralized and less associated with DNA concentration in the presence of mannitol. However, under ^7Li irradiation, DSB damage could not be cleared by mannitol but was gradually aggravated with decreasing DNA concentrations. These findings imply that under low-LET irradiation, most of the DSB damage is generated by free radical OH·diffusion, and thus may be counteracted by scavengers, while at higher-LET irradiation, quite a fraction of DSB induction is caused by direct ionizing energy deposition of heavy ions, which cannot be eliminated. This work also indicates that the proportion between free radical damage and direct ionizing damage is s constant which is independent of DNA concentration when the DNA concentration is under a certain value （50ng/μL）. Our study sheds light on the un- derlying mechanisms in the DNA radiation damage process.     

核酸疫苗的研究现状

核酸疫苗是九十年代诞生的新型疫苗,它具有许多传统疫苗没有的优点,是免疫学及预防医学的大突破,有广泛的应用前景。本文对核酸疫苗的组成、研究现状、作用机理、安全性问题等几个方面作了概述。     

天冬氨酸酶基因工程菌质粒pXZ70的稳定性

将ｐＳＣ１０１质粒上的Ｐａｒ区域（控制质粒分配的基因座）克隆到含有天冬氨酸酶基因的质粒ｐＸＺ７０上，构建成重组质粒ｐＺＺ１，将ｐＺＺ１质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９细胞中，得到一株质粒可稳定遗传的重组子细胞，培养１００代后，含质粒菌数仍在９０％以上。     

γ干扰素工程菌发酵工艺研究

在摇瓶培养及恒化培养研究的基础上,对含温度敏感型质粒γ干扰素工程菌高密度、高表达的发酵工艺作了探讨。摇瓶培养结果表明,菌体的良好生长状态对外源基因表达起着重要作用,工程菌于对数后期升温,干扰素滴度最高。以葡萄糖为限制性基质的恒化培养,得出了工程菌细胞生长得率与比生长速率之间的关系,同时表明工程菌升温表达前的比生长速率对表达后干扰素的比活有影响,比生长速率在0.10～0.15h~(-1)时比活最大。通过碳、氮、镁的间歇流加培养与连续流加培养,均使工程菌达到高密度与高表达,但以控制比生长速率为目的的连续流加培养较间歇流加比活提高近4倍,棕1.1×10~(10)IU/L。     

溴乙啶对禾粟链霉菌(105N_1)质粒的消除作用

禾粟链霉菌(105N_1)是于1977年,从广东省,海南岛灰土壤中分离的。 Strpetomyces graminearus 105N_1具有产生抗生素和形成孢子的能力;用2×10~(-5)M浓度的溴乙啶(Ethidium bromide)处理后,则丧失了产孢和形成抗生素的能力;其消除率为2.3—5％。筛选到的突变株E—16,不产抗生素,孢子光秃型。E—16菌株传代58次,性状稳定,在分得的3.1×10~5个菌落中形态纯一,未见回复突变。在琼脂糖电泳上,105N_1可见质粒带,而E—16则消失了。所有这些,初步证明了Streptomyces graminearus 105N_1具有质粒,它的质粒可能控制着孢子和抗生素的产生。     

Ri质粒在绿豆离体器官培养中转导发根的全息现象

生物体每个相对独立部分的结构和功能,都是其整体结构和功能的成比例的缩小,这种现象称为生物全息律.以绿豆(Phaseolus radiatus L.)的上下胚轴和叶片为外植体,进行了Ri质粒转化根的试验.结果表明,离体的绿豆上下胚轴和叶片,在进行发根培养时,同样存在着生物全息现象.这种现象为研究离体器官的形态发生,以及发根农杆菌Ri质粒的发根效应,提供了一种新的观点.