全文获取类型
收费全文 | 1735篇 |
免费 | 23篇 |
国内免费 | 91篇 |
专业分类
系统科学 | 43篇 |
丛书文集 | 45篇 |
教育与普及 | 163篇 |
理论与方法论 | 43篇 |
现状及发展 | 5篇 |
综合类 | 1550篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 10篇 |
2022年 | 10篇 |
2021年 | 10篇 |
2020年 | 9篇 |
2019年 | 21篇 |
2018年 | 5篇 |
2017年 | 25篇 |
2016年 | 18篇 |
2015年 | 37篇 |
2014年 | 54篇 |
2013年 | 65篇 |
2012年 | 89篇 |
2011年 | 86篇 |
2010年 | 78篇 |
2009年 | 110篇 |
2008年 | 112篇 |
2007年 | 135篇 |
2006年 | 103篇 |
2005年 | 119篇 |
2004年 | 135篇 |
2003年 | 128篇 |
2002年 | 106篇 |
2001年 | 103篇 |
2000年 | 71篇 |
1999年 | 38篇 |
1998年 | 24篇 |
1997年 | 29篇 |
1996年 | 27篇 |
1995年 | 16篇 |
1994年 | 13篇 |
1993年 | 20篇 |
1992年 | 8篇 |
1991年 | 10篇 |
1990年 | 12篇 |
1989年 | 8篇 |
1988年 | 2篇 |
1987年 | 1篇 |
排序方式: 共有1849条查询结果,搜索用时 46 毫秒
991.
重组大肠杆菌分批-补料培养生产类人胶原蛋白的过程控制 总被引:2,自引:0,他引:2
目的优化重组大肠杆菌高密度发酵的调控工艺。方法通过考察比生长速率、3种控氧方式以及诱导强度对细胞和类人胶原蛋白产量的影响,确定最佳的发酵工艺。结果比生长速率显著影响类人胶原蛋白的产量,且最适比生长速率为0.15~0.20h-1;在提高罐压的条件下,细胞和类人胶原蛋白的浓度均显著高于其他两种控氧方式,充入富氧空气的细胞和类人胶原蛋白的浓度均最低;诱导强度对细胞生长和蛋白质表达的影响非常大,当细胞浓度达47±2g/L(DCW)时,开始升温至42℃进行诱导,最佳条件为42℃保温2~3h,然后降温至39℃继续培养5~6h。结论通过优化重组大肠杆菌分批补料培养生产类人胶原蛋白的工艺,使得细胞和类人胶原蛋白浓度分别达68.94g/L(DCW)和13.02g/L。 相似文献
992.
重组逆病毒介导的Immunocaspase-3分泌性T细胞对ErbB2阳性乳腺癌的杀伤作用 总被引:2,自引:0,他引:2
将Immunocaspase-3基因转染Jurkat T淋巴细胞, 使其稳定地分泌性表达靶向促凋亡蛋白Immunocaspase-3, 间接免疫荧光检测表明该蛋白可内化进入ErbB2阳性的SKBr3乳腺癌细胞, 细胞计数结果表明乳腺癌细胞的生长和增殖受到明显抑制. 进一步将Immunocaspase-3基因克隆入逆转录病毒载体pLNCX, 转染PA317细胞进行包装, 挑选高滴度的包装细胞株收获病毒. 用收获的病毒感染刺激分裂的人外周血T淋巴细胞, 经筛选后通过尾静脉注射给荷有SKBr3乳腺癌的裸鼠, 观察到肿瘤生长明显受到抑制(抑制率 73.25%), 裸鼠存活时间较对照组延长80.95%. 免疫组织化学染色结果表明裸鼠肿瘤组织中有Immunocaspase-3蛋白分布, TUNEL检测证实肿瘤细胞发生凋亡. 上述结果表明, T淋巴细胞分泌的Immunocaspase-3在裸鼠体内可以识别和进入ErbB2阳性的乳腺癌细胞, 抑制肿瘤生长. 相似文献
993.
以大肠杆菌XL1blue为模板,通过PCR技术扩增大肠杆菌硫氧还蛋白基因,并将目的基因分别连接到克隆载体pUC18和表达载体pTrcHisC上,构建重组质粒.重组质粒pTrcHisC-TRX在大肠杆菌中高效表达,最后利用固定化金属螫合亲和层析技术(IMAC)获得较纯的目的蛋白,为进一步研究硫氧还蛋白的功能及其应用提供了条件. 相似文献
994.
995.
一种少量λ噬菌体重组DNA的快速抽提方法 总被引:1,自引:0,他引:1
用DEAE-纤维素(二乙氨乙基纤维素)和聚乙二醇(PEG 6000)纯化的体外重组λ噬菌体,经SDS(十二烷基磺酸钠)裂解和酚/氯仿抽提等处理,得到了重组DNA。该DNA纯度高,适用于限制性内切酶分析。 相似文献
996.
酵母克隆基因的转化和稳定性检测 总被引:1,自引:0,他引:1
采用放射性探针分子杂交技术鉴定及选出重组DNA的可靠转化子。实验结果表明:双倍体受体的转化效率约为单倍体的2倍;含有酵母染色体端粒区GT重复顺序的重组质粒的转化效率约为含染色体内部区GT重复顺序重组质粒的3倍;在克隆基因的稳定性方面,整合型转化子要比自主复制型转化子高得多。因此,用酿酒酵母作基因工程生产菌时以双倍体为好。经分析并证实,含酵母染色体端粒区GT重复顺序的重组子有些具有多靶整合作用,这种整合转化在基因工程中有实用价值。 相似文献
997.
基于重组现象的自交换模型及双原子分子的两类精确势函数(即修正振子势及Morse势),本文提出了几种在气相电子转移过程中双原子氢化物HA(A=Al,Si,P,S,Cl)结构重组能的新的实验标度方法,给出了重组指标——反应物分子的活化半径,并对其所含参数利用实验光谱数据进行了确定。结果表明几种方法都有效地改进了George-Griffith经典模型。 相似文献
998.
牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGR)cDNA在E.coli中表达,高压均质破碎菌体后,上清液以Heparin-SepharoseCL-6B亲和层析、C18反相HPLC分高纯化得到一分子量为2.25×10 ̄4的蛋白质,其等电点为9.34,并能与抗牛bFGFMcAb反应;其氨基酸组成与bFGF文献值一致;活性分析结果表明此蛋白质不仅能促进BALB/c3T3细胞增值,ED_(50)=0.85ng/ml,而且能促进鸡胚尿囊膜微血管增生,所得蛋白为具有生物活性的重组碱性成纤维细胞生长因子。 相似文献
999.
将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和分解淀粉的酿酒酵母基因工菌。Southern印迹分析证明,葡萄糖淀粉酶基因已整合进工程菌染色体。这些工程菌在含有20%淀粉的培养基中培养,产酒率都在11%以上。 相似文献
1000.
目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-Ⅰ类分子的影响.方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-Ⅰ类分子的表达.结果:Western blot证实转染重组质粒的细胞表达IDO.转染空载体的细胞与转染重组质粒的细胞HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为299.46±62.65及42.51±8.19,两者相比有显著性差异(P<0.01);转染重组质粒的细胞,未加色氨酸组与色氨酸组HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为309.17±34.89及692.12±33.42,两者相比亦有显著性差异(P<0.01).结论:IDO下调细胞表面HLA-Ⅰ类分子的表达,色氨酸能够逆转IDO所致的HLA-Ⅰ类分子的下调. 相似文献