猪毛菜液泡膜SsNHX1基因的克隆及功能验证

为研究猪毛菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白的功能,从猪毛菜中将该基因克隆出来并在酵母中获得了表达.结果表明,整合外源SsNHX1基因的酵母在含有0.5mol/L NaCl的培养基中的生长速率要比对照高,菌落的直径比对照明显大.证明猪毛菜SsNHX1基因能够有效地提高酵母转化子的耐盐能力.     

混合菌种发酵生产酱油的工艺研究

利用米曲霉(Aspergillus oryzae)和黑曲霉(Aspergillus niger)混合接种,并在制曲后期混合添加嗜盐片球菌(Pediococus halophilus)和高渗酵母进行多菌种发酵生产酱油实验研究。结果表明,混合发酵的菌种最佳培养时间为36～40h,最佳发酵温度为45～48℃。米曲霉和黑曲霉的接种比为90%∶10%时,全氮利用率提高13.2%,氨基酸生成率提高6.8%。将成熟曲拌以10%的食盐水,在pH值为6.5的环境下,混合添加嗜盐片球菌和高渗酵母参与发酵可以提高酱油产品中的醇类含量和酸类含量,改进酱油的风味。     

毕赤酵母表达系统的实际应用研究

在DNA体外重组和异源表达技术中,酵母表达系统是重要的一个组成部分。对于它的优势,大量中外文献用实例证明,用综述总结。酵母菌是最简单的真核模式生物,兼有原核、真核两种表达系     

毕赤酵母△~9-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达

根据真菌Δ9-脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行PCR,获得一个741 bp的毕赤酵母cDNA片段,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物,通过cDNA末端扩增技术(RACE)获得该cDNA的3′和5′序列,从而得到全长为1 689 bp的cDNA序列.序列分析结果表明,该序列具有一个长度为1 194 b p、编码397个氨基酸的开放阅读框(PPD9).与报道的Δ9-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区和疏水结构,在其氨基酸序列的C-末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区.该序列为一个新的编码Δ9-脂肪酸脱氢酶的基因,为了验证其功能,把开放阅读框序列PPD9亚克隆到表达载体pYES 2.0,构建重组表达载体pYPPD9,并转化到酿酒酵母的Δ9-脂肪酸脱氢酶缺陷型菌株DTY-11A中进行表达。通过平板互补实验结果表明,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的蛋白具有Δ9-脂肪酸脱氢酶活性,能弥补DTY-11A中由于Δ9-脂肪酸脱氢酶的缺失而引起的致死性突变。     

筛选甘蔗SPSⅢ启动子诱饵片段结合蛋白的酵母单杂交诱饵质粒的构建

主要构建了可以与酵母染色体发生重组的质粒pAbAI-Bait,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞获得转化子,将阳性克隆进行PCR与DNA测序的方法鉴定,结果表明: 酵母单杂交中报告质粒pAbAI-Bait构建成功,可用于酵母单杂交体系.     

酵母RNA聚合酶Ⅱ体外转录亚病毒RNA的研究

真核细胞的依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱ在无蛋白质因子存在的条件下,在体外不能忠实转录DNA。然而,令人惊异的是植物来源的RNA聚合酶Ⅱ能在体外忠实转录类病毒RNA,产生全链长的产物。这一发现意味着类病毒RNA能提供类似启动子的位点,以便与RNA聚合酶发生特异性的相互作用,从而正确地起始转录。毫无疑问,这一系统将是了解真核细胞RNA聚合酶Ⅱ所催化的体外转录机制的理想模型之一。     

胞外植酸酶产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离，原生质体制备，紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍｌ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定。     

毕氏酵母细胞循环模型及实验验证

基于芽殖酵母细胞形态的特征,提出了毕氏酵母甘油流加发酵过程的细胞循环模型.模型的输入为比生长速率,由宏观动力学模型得到.通过细胞循环模型,求得与细胞循环过程相关的变量,如细胞带芽分率和细胞数目浓度.实验验证了模型的有效性.