| 毕赤酵母△~9-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达 |
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| 引用本文： | 张昕欣,魏东盛,张飙,邢来君,李明春.毕赤酵母△~9-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达[J].南开大学学报,2010,43(1). |
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| 作者姓名： | 张昕欣 魏东盛 张飙 邢来君 李明春 |
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| 作者单位： | 南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室;天津中医药大学公共教学部; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30771355);;国家科技部“863”项目(2007AA10Z189);;教育部博士点基金新教师项目(20070055061) |
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| 摘 要： | 根据真菌Δ9-脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行PCR,获得一个741 bp的毕赤酵母cDNA片段,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物,通过cDNA末端扩增技术(RACE)获得该cDNA的3′和5′序列,从而得到全长为1 689 bp的cDNA序列.序列分析结果表明,该序列具有一个长度为1 194 b p、编码397个氨基酸的开放阅读框(PPD9).与报道的Δ9-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区和疏水结构,在其氨基酸序列的C-末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区.该序列为一个新的编码Δ9-脂肪酸脱氢酶的基因,为了验证其功能,把开放阅读框序列PPD9亚克隆到表达载体pYES 2.0,构建重组表达载体pYPPD9,并转化到酿酒酵母的Δ9-脂肪酸脱氢酶缺陷型菌株DTY-11A中进行表达。通过平板互补实验结果表明,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的蛋白具有Δ9-脂肪酸脱氢酶活性,能弥补DTY-11A中由于Δ9-脂肪酸脱氢酶的缺失而引起的致死性突变。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 Δ9-脂肪酸脱氢酶 cDNA末端扩增 酿酒酵母 表达 |
Cloning and Heterologous Expression of a Novel △~9-fatty Acid Desaturase Gene from Pichia pastoris Gs115 |
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| Zhang Xinxin,Wei Dongsheng,Zhang Biao,Xing Laijun,Li Mingchun.Cloning and Heterologous Expression of a Novel △~9-fatty Acid Desaturase Gene from Pichia pastoris Gs115[J].Acta Scientiarum Naturalium University Nankaiensis,2010,43(1). |
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| Authors: | Zhang Xinxin Wei Dongsheng Zhang Biao Xing Laijun Li Mingchun |
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| Institution: | 1.Key Laboratory of Molecular Microbiology and Technology/a>;Ministry of Education/a>;Department of Microbiology/a>;Nankai University/a>;Tianjin 300071/a>;China/a>;2.General Education Department/a>;Tianjin Traditimal Chinese Medicine University/a>;Tianjin 300193/a>;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris RACE Saccharomyce scerevisiae expression |
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