红酵母RY-2004产胞外色素条件的研究

研究不同氮源对红酵母RY-2004胞内外色素含量的影响，并通过正交实验优化了红酵母产胞外色素的培养基组成。实验结果表明以NH4H2PO4为氮源，培养基组成为CH3CH2OH3％、NH4H2PO43％、Mg—SO40．1％，ZnSO40．05％，有利于红酵母产胞外色素。     

红酵母苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质研究

采用玻珠破壁 ,硫酸铵分级沉淀 ,凝胶过滤和离子交换等方法 ,从L 苯丙氨酸工业生产菌株红酵母中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 (PAL) ,纯化倍数为 1 39,收率为 1 2 6%,纯化到的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳均为单一蛋白带 ,其亚基分子量约为79.4kD该酶最适反应温度为 40℃ ,最适反应pH为 8.5 ,以L Phe为底物 ,40℃ ,pH 8.5的Km值为 3 87× 1 0 - 4 mol/L 除了Mg2 +和Na+,其它金属离子如Fe3+,Cu2 +,Co2 +,Hg2 +等对其都有明显的抑制作用 .     

转录因子COUP-TFII对端粒酶活性的抑制及其相互作用蛋白的分离和鉴定

端粒酶催化亚基hTERT的转录调控是端粒酶活性调节的关键步骤．实验分离和克隆了参与hTERT转录调控的转录因子COUP-TFII，分析了其对HeLa细胞端粒酶活性的生物学效应，并分离和鉴定了与其相互作用的蛋白质．结果表明在以hTERT启动子为诱饵的酵母单杂交体系中，COUP-TFII可以与hTERT启动子结合；得到了纯度高达98％的COUP-TFII融合蛋白，并且其结合于hTERT启动子-201～ 35区段，抑制HeLa细胞端粒酶的活性：从HeLa细胞核蛋白中分离到了2种与COUP-TFII相互作用的蛋白质．研究初步揭示了COUP-TFII在细胞分化和肿瘤转化过程中的参与途径和调控机制，为开启以端粒酶为靶目标的肿瘤治疗奠定了基础．     

酵母胞内核黄素含量测定方法的研究

对测定核黄素常用的3种方法,即高效液相色谱法、荧光光度法和分光光度法进行比较.结果表明,对于标准溶液3种方法均具有良好的线性关系和重现性,但在酵母提取液中,高效液相色谱法和分光光度法的回收率较差,测定准确率低.荧光光度法测定准确性高,稳定性强,为测定酵母胞内核黄素的最佳方法.     

酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建

以从原核表达载体中酶切得到的tps1基因为模板，设计适当的引物，利用PCR技术，克隆出核苷酸数大约1.5k的片段，PCR产物经回收后，与PCAMBIAI303载体连接并转化大肠杆菌DH5a，阳性重组子经PCR鉴定，结果表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体。     

铬酵母制备及在酸奶中的添加

利用生物合成法制备了有机铬含量较高的新型添加剂——铬酵母，并将其添加到酸奶中．用分光光度法对铬酵母及添加了铬酵母的酸奶进行了总铬和有机铬含量的测定，考察了样品处理方法，并从酸奶的感官鉴评、酸度及有机铬含量方面考察铬酵母的添加对酸奶品质的影响．结果表明，铬酵母的添加对酸奶品质无任何不良影响，而有机化程度在发酵前后也无明显的变化．     

筛选hALR的相互作用蛋白基因

为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因，探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制，将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断，重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7—hALR，然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因。筛出的阳性克隆基因序列被测出后，经GenBank查询，结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na^ ／K^ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列。这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因，为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础。     

毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白高密度培养条件的研究

研究了毕赤酵母基因工程菌高密度培养条件。在全合成培养基的基础上考察了诱导过程中添加(NH₄)₂SO₄、微量元素PTM₁、油酸、甲醇加量及pH等因素对重组人血清白蛋白表达的影响，发现PTM₁能显著提高白蛋白的表达，6mL/L时蛋白表达量最大。诱导期硫酸铵浓度维持在 3g/L左右蛋白表达量最大，高于3g/L抑制蛋白表达。酸性环境不利于蛋白表达，诱导过程维持pH6.0～6.5最佳。甲醇最佳诱导浓度为10mL/L。添加0.05%的油酸可有效提高蛋白表达。可以此作为发酵罐上发酵培养流加成分的参考。     

糖蜜发酵培养高铁营养酵母

采用生长周期短，易于工业化生产的酵母为菌株，以糖蜜为主要培养基，通过现代发酵工程技术，在3m^3发酵罐上进行中间试验，在12m^3发酵罐上试生产高铁营养酵母．其发酵产品高铁营养酵母铁的含量为1061mg／kg，高铁营养酵母的产率为2．54％，蛋白质的含量(质量分数)为51.90％.     

6个植物MARs序列的ARS功能鉴定与分析

利用酵母表达系统, 对来自烟草和拟南芥的6个植物MARs序列分别进行了ARS功能鉴定. 结果表明, 在酵母细胞内, TM1和AM4有强的自主复制功能, 其活性与来自酵母染色体的ARS相当, 其他4个植物MARs序列无ARS活性. 为了进一步分析植物MAR序列中ARS的活性区, 利用PCR方法对TM1和AM4进行亚克隆, 相应的亚克隆分别命名为TM1-1, TM1-2, TM1-3, AM4-1, AM4-2和AM4-3. 实验发现, TM1-3和AM4-3不仅具有比完整MARs更高的ARS活性, 而且在酵母转化效率、转化稳定性及生长速度方面也优于完整片段. 本研究结果为阐明MAR的作用机制与自主复制功能的关系提供了重要线索.