噬夏孢欧文氏菌类crtB基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

噬夏孢欧文氏菌类胡萝卜素合成相关基因crtB,编码八氢番茄红素合成酶。利用PCR技术扩增出crtB基因,克隆进表达载体,构建表达质粒pET-15bcrtB。重组质粒转化大肠杆菌,构建工程菌株。经IPTG诱导,工程菌高效表达了重组八氢番茄红素合成酶,表达量占菌体总蛋白的40%。重组蛋白以包含体形式存在,包含体经洗涤、尿素溶解、复性并经镍离子树脂亲和层析、Superdex 75凝胶层析柱纯化,得到了电泳纯的重组八氢番茄红素合成酶,带有His-tag的该蛋白分子量为35 kDa,pI值为7.3。     

走出英语学习的误区

东西方文化的差异，加之中国人缺乏适宜的英语学习环境，英语学习者常常会按汉语的思维模式、表达习惯、字面理解等陷入学习误区。在多年教学实践中，归类分析学习汉英语的典型范例，引导英语学习者尽快走出英语学习的误区，即：习惯用语错误理解，社会用语不当，汉语负迁移的干扰，词汇搭配混乱等，从而达到正确理解和运用英语的目的。     

大黄鱼生长激素基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法从大黄鱼脑垂体总RNA中克隆编码生长激素基因序列,并与数据库中鱼类生长激素基因进行比较.扩增获得的生长激素基因定向克隆到表达质粒pET-22b(+),并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达.表达的蛋白为可溶性蛋白,表达量占细胞总蛋白的5%.     

苜蓿花叶病毒RNA23''''端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中，用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404，采用叶圆片法转化普通烟草，诱导再生小植株．经卡那霉素抗性筛选和PCR检测，证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中．     

用VB实现英文自动朗读功能的几种方法

介绍在VisualBasic 6.0环境下 ,通过TTS和MicrosoftAgent控件来实现英文自动朗读功能的几种方法 .     

编码中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）一种组成型热休克蛋白70（HSC70）的cDNA克隆、测序及其表达分析

根据中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis ) EST序列信息设计引物，用RT-PCR方法，从经热休克处理的中国明对虾的肝胰腺RNA中克隆到长2090 bp的hsc70 cDNA序列，包括长1956 bp的完整编码序列（complete CDS）及部分5’端和3’端非翻译区（5’UTR 和3’UTR）。PCR及测序结果分析显示hsc70 cDNA的1～547 bp碱基所对应的基因组序列可能含有内含子，548～2090 bp碱基所对应的基因组序列不含内含子。根据编码序列推导出相应的652个氨基酸，与其他真核生物HSP70家族成员进行同源性比较，发现中国明对虾HSC70与虹鳟（Oncorhynchus mykiss） HSC71、人（Homo sapiens） HSC70、家鼠（Mus musculus ）HSP70、烟草天蛾（Manduca Sexta ）HSC70的相似性分别是85.9%、85.9%、85.8％、85.4%，表现出较高的保守性。表达分析显示，hsc70 mRNA在中国明对虾正常肝胰腺、肌肉、眼柄、血细胞、心脏、卵巢、肠和鳃等组织存在，并呈组成性表达；受到整体热休克后的对虾肌肉组织hsc70 mRNA水平(以β-actin mRNA水平为内标)与对照组没有显著的差异。     

胡萝卜根特异表达水通道蛋白基因DcRB7的分离及其启动子功能分析

从胡萝卜胚cDNA文库中分离得到一条完整的cDNA片段, 序列分析表明属于水通道家族新成员, 并与烟草根特异性表达TobRB7基因高度同源, 因此命名为DcRB7. Northern杂交分析表明DcRB7在根中特异性表达. 利用反向PCR技术, 分离获得了DcRB7基因上游约650 bp的片段. 将此片段与含有GUS报告基因表达载体进行重组构建后, 以农杆菌介导转化烟草获得相应的转基因植株. 在对转基因烟草的GUS表达特性进行了组织化学鉴定和荧光定量分析后发现, 该调控区段能指导GUS基因在烟草根中优势表达, 并表现出干旱诱导的特性.     

植物NAD-IDH基因克隆及体外表达酶活力分析

植物NAD⁺-依赖型异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)是一多功能酶. 以拟南芥生态型“Columbia gl1”及甘蓝型油菜三系“陕2A”, “陕2B”和“垦C1”的叶片为材料, 采用RT-PCR方法成功地从每种植物材料中分别克隆了3种NAD-IDH不同亚基基因. 同源性搜索发现, 来源于油菜的克隆基因是新基因. 将克隆基因的功能蛋白编码区整合到pMID1多克隆位点, 构建表达重组体, 均能在体外翻译系统中高效地表达出特异目的蛋白. 亚基0, 亚基1和亚基2基因转录本加入到含终浓度为36 μg/mL的二硫键异构酶的体外翻译系统, 体外表达产物中检测到NAD-IDH酶活力. 不同基因种类及转录本分子比的体外表达产物的酶比活力比较表明, NAD-IDH由3种亚基组成, 缺一不可, 缺少亚基0是致命的, 缺少亚基1或2中的任何一个对酶活力的损伤是严重的. 同时发现, 来源于陕2A和陕2B的亚基1基因转录本中存在碱基缺失现象, 从而发生移框突变或无义突变, 使突变亚基不表现正常亚基1功能, 导致油菜品系间叶片NAD-IDH酶比活力存在差异.     

hsBLyS分泌型表达载体构建及CHO表达

本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列；信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子(human soluble B Lymphocyte Stimulator，hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因；融合基因插入pcDNA3、pcDNA3．1、pEFneo质粒；信号肽引物设计时，突变同义密码，最终重组质粒成为分泌表达质粒；磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSV-dhfr，共转染CHO-dhfr^-细胞；选择培养液筛选，氨甲喋呤扩增表达，获稳定表达rhsBLyS细胞株；ELISA检测浓缩表达上清，结果表明：rhsBLyS表达量由0．13μg/mL上升至0．55μg/mL。