PH值对应用肌球蛋白 ATP酶法进行梭内肌纤维分型的影响

探讨酸性和碱性预孵育处理，对应用肌球蛋白ATP酶法进行梭内肌纤维分型的影响。采用肌球蛋白ATP酶法。PH4．3和PH4．6预孵育液孵育后，梭内肌纤维中的核袋纤维染色呈阳性，核链纤维染色相对较浅；PH9．4预孵育后，核袋与核链纤维均呈阳性或强阳性；PH10．4预孵育后，核袋1纤维呈阴性，核袋2纤维呈阳性，核链纤维呈强阳性。结论是：用mATP酶法研究梭内肌纤维的分型时，预孵育液的PH值对分型结果有显著影响，应当说明并严格把握预孵育液的PH值。     

大肠杆菌K12碱性磷酸酶基因的克隆表达

大肠杆菌碱性磷酸酶是同二聚体金属酶，被phoA基因编码．采用PCR方法从大肠杆菌K12中扩增到碱性磷酸酶基因（phoA）．用限制性内切酶BamHI和HindⅢ将片段插入克隆载体pETBlue-2．该基因被重组、转化后在大肠杆菌中经IPTG诱导表达，而后进行SDS-PAGE检测及紫外吸收分析测OD410．克隆得到了phoA基因并实现了蛋白表达，碱性磷酸酶的活性提高了18，3倍，为进行组织化学、免疫印迹、突变分析等工作打下了坚实的基础．     

Effect of Urea on Activity and Conformation of a Glycoprotein

Introduction In some enzymes, inactivation occurs before noticeable conformational change can be detected during denaturation by guanidinium chloride or urea[1-6]. Tsou[7] suggested that enzyme active sites are formed by relatively weak molecular interact…     

钒酸盐和脲对锯缘青蟹碱性磷酸酶的抑制作用

钒酸盐（偏钒酸钠、钒酸钠、偏钒酸铵、联吡啶过氧钒酸钠）和脲作为养殖环境的污染物对锯缘青蟹碱性磷酸酶的酶活力有明显的抑制作用,抑制程度随着抑制剂浓度的增大而增强。钒酸盐对酶的抑制类型均为竞争性抑制,而脲为非竞争性抑制;在脲浓度低于７．０ｍｏｌ／Ｌ时,２５℃与脲处理２．５ｈ的酶的抑制失活作用是可逆的。钒酸盐和脲对酶有协同抑制作用。     

海水中Co2+对中国对虾仔虾生长及体内AKP和ATPase活性的影响

在去除重金属离子的海水中添不同浓度的Co2+进行养殖实验．结果表明中国对虾(Penaeuschinensis)仔虾对Co2+最佳需要量为μg／L．低浓度的Co2+对AKP和ATPase都有激活作用,高浓度的Co2+对AKP和ATPase有抑制作用．由于AKP和ATPase活性的高低与中国对虾仔虾生长状况相一致,因此AKP和ATPase活性可作为检测水中Co2+浓度是否适合中国对虾仔虾存活和生长的指标．     

文昌鱼早期发育中两种碱性磷酸酶的表达

以BCIP为底物研究了碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中的表达图式.在囊胚、原肠胚和神经胚早期(12～13小时)未检测到碱性磷酸酶的特异性表达;到神经胚中期(15小时,约6个体节),碱性磷酸酶在每一体节的中部开始表达,在胚胎中形成3～6个条纹;在18小时神经胚中,碱性磷酸酶在肌节中表达;到24小时在后部内胚层中也开始表达;在36～48小时幼体中,碱性磷酸酶在消化道中强烈表达,但在咽鳃区不表达,同时在肌节中仍有弱的表达.研究表明碱性磷酸酶可能在肌节的发育过程中具有一定作用.碱性磷酸酶在消化道中的表达可能与这一时期消化道开始行使功能有关.为了鉴定文昌鱼碱性磷酸酶的性质,还研究了L-苯丙氨酸对碱性磷酸酶表达图式的影响,结果表明文昌鱼至少存在两种碱性磷酸酶在消化道中表达的一种是肠型的,与脊椎动物碱性磷酸酶可能为同一类型;另一种主要在肌节中表达,可能是组织非特异性的碱性磷酸酶.     

意蜂工蜂酸性磷酸酶的分离纯化及动力学研究

酸性磷酸酶在自然界中分布很广 .从低等生物大肠杆菌、酵母到高等动植物组织、体液以及人类肝脏、前列腺内都发现有ＡＣＰａｓｅ的存在[1～ 3] .目前人们对生物组织ＡＣＰａｓｅ已有相当广泛的研究 .但对昆虫类特别是蜜蜂的ＡＣＰａｓｅ研究报道较少 .为此 ,我们比较了工蜂、蜂蜜、蜂王浆和蜂蛹的ＡＣＰａｓｅ活力大小 ,并对工蜂ＡＣＰａｓｅ在分离纯化的基础上 ,对其动力学特性进行了初步研究 .该结果对于深入探讨蜜蜂在各发育周期内的代谢活动以及该酶的诱导、调节机制具有重要意义 .1　材料和方法1.1　材料鲜雄蜂虫蛹 (8日龄 )、鲜蜂蜜、…     

鳜鱼Siniperca chuatsi红肌sMyHC1基因cDNA的克隆及其表达分析

本研究采用同源克隆技术克隆鳜鱼红肌肌球蛋白重链1(sMyHC1)基因cDNA序列,其总长为5 940 bp。经生物信息学分析表明,鳜鱼sMyHC1基因cDNA编码区全长5 823 bp,总共编码1940个氨基酸。序列分析表明,鳜鱼MyHC1基因cDNA存在3个ATP结合位点、3个actin结合位点、1个ELC结合位点、1个RLC结合位点和2个Loop环。对鳜鱼sMyHC1基因进行成鱼红、白肌表达分析表明,其在红肌和心肌中的表达量显著高于白肌。研究结果为深入研究鳜鱼肌纤维分型及鳜鱼肉质研究提供可靠的实验数据和理论基础。     

克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.