双载体固定化细胞发酵红曲色素的研究

采用玉米芯为吸附载体,海藻酸钠为包埋剂对红曲霉细胞进行吸附包埋固定化培养。对以不同浓度的硝酸钾、大米粉、不同初始pH值等条件变化对细胞红曲霉菌进行发酵培养。通过正交优化实验表明:硝酸钾浓度为0 2%,米粉浓度为5%,培养基初始pH5 5时,通气量为75mL/500mL时产色素色价最高。包埋载体海藻酸钠的浓度为5%,固化剂氯化钙浓度为4%时,红曲霉的固定化粒子的机械强度较好。     

烟束曲霉HLS-6的筛选及其对Cr(VI)的吸附特性

采用富集培养方法从某下水道污泥中筛选到一株对重金属Cr(VI)吸附效率高的菌株———烟束曲霉HLS-6,考察了pH值、温度和Cr(VI)初始质量浓度对HLS-6吸附Cr(VI)的影响.结果表明,在pH为1~2、温度为25~30℃时,吸附率高达96.7%;Cr(VI)初始质量浓度增加,吸附容量增大,但吸附率减小:当Cr(VI)初始质量浓度分别为9.42和91.7mg/L时,HLS-6在48 h内对Cr(VI)的吸附率分别为100%和50.8%,吸附容量分别为4.9和23.3mg/g;吸附菌在菌龄为3~5 d时对Cr(VI)的吸附率最大.     

米曲霉（Aspergillusoryzae）A－9005酸性蛋白酶的初步研究

米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）Ａ－９００５菌株的麸曲培养物，经水浸泡抽提其酸性蛋白酶活力为６０００ｕ／ｇ左右。硫酸铵分段沉淀中，饱和度为７０％，８０％和９０％时沉淀的比活最高，得率在７０％以上，该酸性蛋白酶的最适作用温度为５０℃，最适ｐＨ为３．５～４．７．在ｐＨ３．５～５．５时酶活力稳定，ｐＨ超过６时酶活力迅速丧失。在４０～６０℃下该酶的活力相对稳定，在７０℃下酶活力半衰期仍达７４ｍｉｎ，这一结果表明该酶为一耐热性酶种。Ｍｎ~（２＋）对酶有激活作用，其它多数金属离子如Ｚｎ~（２＋），Ｆｅ~（２＋），Ｋ~＋，Ｍｇ~（２＋），Ｌｉ~＋及Ｃａ~（２＋）等对酶有轻度抑制作用或无影响。     

红曲霉固态发酵产生降脂物质的研究

以激光诱变红曲霉(Monascus)菌株,获突变株T-0013.研究其产洛伐他汀类物质的最佳固体发酵工艺条件,研究结果表明:T-0013菌株用大米作为基本培养基,添加氮源D和微量元素C组合,培养基初始为pH5.0,含水量控制50%,采用28℃培养,洛伐他汀类物质的产量最高.此外根据红曲霉色素产量与洛伐他汀生成量的关系,推测红曲霉产洛伐他汀的生物合成途径,可能是红曲色素生成途径中的一个分支.     

红曲霉产HMG-CoA还原酶抑制剂的研究

采用薄层层析-紫外吸收光谱法对一株红曲霉产生的HMG-CoA还原酶抑制剂进行分析测定,并对其发酵条件进行研究.结果表明:该菌能产生洛伐他汀或其类似物.产物合成的适宜条件为:采用固体发酵培养基b,接种量5%~10%,变温培养.在这些条件下,固体发酵10 d,该菌株产生的酶抑制剂可达0.19%以上.     

Secretive expression of Aspergillus fumigatus phytase in tobacco improves phosphorus nutrition in plant

To generate transgenic plants capable of utilizing exogenous phytate,an Aspersgillus fumigatus phytase gene(fphyA) was constitutively expressed in tobacco and recombinant enzyme was secreted from plant roots into the rhizosphere using the signal sequence from tobacco calretieulin.After 40 days of plant growth in hydroponic media,phytase activities in leaves,stems,roots and growth media of transgenic plants were 8.6-fold,7.4-fold,12.6-fold and 14.3-fold higher than those of wild-type plants.Signifi-cant improvements in plant growth and phosphoms(P)utilization were observed in the transgenic plants.When phytate was supplied as the sole P source.45-day-old transgenic tobaccos accumulated 1.0-fold and 0.5-fold more shoot and root biomass than wild-type tobaccos.with a concomitant of 1.7-fold increase in total P concentration.These results indicate that secretive expression of the A.fumigatus phytase improves acquisition and use of P from phytate in plants.     

曲霉属糖化酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

从黑曲霉、无花果曲霉、米曲霉中提取总RNA,RT-PCR分别获得其糖化酶基因,所得序列在Gen-Bank数据库中注册,注册号分别为AY652617、AY642120和DQ211971.BLAST分析显示,克隆的曲霉属糖化酶基因与GenBank数据库相应序列同源性很高.将这些糖化酶基因与表达载体pPIC9重组后,电转化进毕赤酵母株GS115,均获得了分泌表达糖化酶的酵母工程菌株.甲醇诱导72 h后,糖化酶的分泌量达到最高,分别为(11.6±0.2)、(12.4±0.2)和(10.0±0.2)U/mL.SDS-PAGE显示,分泌表达的糖化酶分子量均约为80 kDa.     

泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡萄糖淀粉酶基因克隆及在酒精酵母中的表达与分泌

泡盛曲霉(Aspergillus awamori)产生的葡萄糖淀粉酶是一种诱导的糖蛋白,它具α-1,4和α-1,6-D-glucan glucohydrolase活性,广泛用于需糖化淀粉的工艺.若将该酶基因导入啤酒酵母,构建能直接利用淀粉的酵母工程菌株,可省去淀粉液化和糖化的过程.国际上已有将泡盛曲霉的葡萄糖淀粉酶导入啤酒酵母的报道.该酶作用最适温度为60℃,对食用乙醇生产工艺较为有利.因此,我们用RT-PCR技术克隆了泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶Ⅰ基因,将其置于酵母烯酸酶(Enolase)启动子(Promotor)和终止子(Terminator)之间,构建了表达载体,转化非营养缺陷型酒精酵母AS.2.1364,获得能将淀粉转化为葡萄糖并可发酵产生酒精的转基因酵母菌株.1 材料与方法(1)菌种及培养基 泡盛曲霉(Aspeergillus awamori)NMRL3112,葡萄糖淀粉酶Ⅰ基因供体,采用文献的培养基;酒精酵母(Sacchromyces cerevisiae)AS.2.1364为葡萄糖淀粉酶基因受体,采用YPD培养基;转化酵母采用YPDS培养基,含1%葡萄糖和1%可溶性淀粉.大肠杆菌TG1作为pAC1(由刘宏迪保存)及测序质粒pGEM-3zf( )的宿主菌,采用LB培养基,氨卞青霉素抗性.