三点苜蓿盲蝽线粒体Cyt b基因扩增条件研究

以三点苜蓿盲蝽为材料,采用SDS-蛋白酶K消化法提取其基因组DNA,利用CB-1、CB-2昆虫通用特异性引物对线粒体Cyt b基因433 bp片段进行PCR扩增,获得三点苜蓿盲蝽线粒体Cyt b基因的最佳扩增条件.     

慢性肾功能衰竭大鼠肾皮质基因组DNA表观遗传学变化的MSAP分析

以灌胃腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭Wistar大鼠为实验材料,用高效液相色谱法(HPLC)检测了大鼠血清Hcy浓度的变化；应用甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术,检测了慢性肾衰大鼠肾皮质基因组DNA甲基化程度的变化,并对M...     

硫酸二甲酯对毛泡桐丛枝病幼苗植原体及SSR扩增位点的影响

通过形态观察、巢式PCR和SSR分析,研究了不同浓度硫酸二甲酯(DMS)处理对毛泡桐丛枝病幼苗植原体及泡桐DNA的SSR扩增位点变化的影响。结果表明:质量浓度为15 mg/L的硫酸二甲酯处理5 h或质量浓度大于25 mg/L的硫酸二甲酯处理3 h以上仍成活的幼苗其形态上可转变为健康幼苗,但15 mg/L硫酸二甲酯处理5 h时形态健康的幼苗仍有丛枝病植原体的存在,而其余浓度处理后存活的幼苗内则检测不到植原体;质量浓度大于150 mg/L的硫酸二甲酯处理3 h以上的幼苗全部死亡。此外,毛泡桐丛枝病幼苗、健康幼苗和DMS处理后形态健康幼苗DNA的SSR扩增位点相同。     

花椰菜自交不亲和性的分子标记研究

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter-简单重复序列(ISSR)等分子标记技术。分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析．采用10个10mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增。结果表明．扩增片段分子量在0．3～5kb之间，指纹图谱的稳定性和重复性较好．经过3次以上重复发现，ISSR4引物扩增图谱中。自交亲和系比不亲和系多扩增出3800bp片段；ISSR6引物扩增图谱中。除第3组外，不亲和系比亲和系多扩增出1100bp片段．结果表明．花椰菜自交不亲和系与自交系基因组DNA之间存在差异．扩增出的差异片段与花椰菜自交不亲和性相关。并可作为自交不亲和系和自交亲和系育种筛选的分子标记．初步探讨了花椰菜自交不亲和性的遗传机制及RAPD和ISSR技术在自交不亲和系选育过程中的应用前景．     

深海沉积物中产淀粉酶细菌的rep—PCR基因指纹分析

利用淀粉酶筛选培养基平板从27个深海沉积物样品中筛选得到30个具有胞外淀粉酶活性的菌株．其中革兰氏阴性细菌有22株．阳性细菌有8株．对这些细菌的基因组DNA进行ERIC—PCR和BOX—PCR扩增．指纹图谱显示大部分菌株均存在数目不等的各自独特的带型．各特异性扩增的主带型能重复稳定出现．比较两种引物的指纹图谱．显示ERIC—PCR比BOX—PCR具有较丰富的图谱多态性．对产生的指纹图谱进行聚类学分析．30株细菌可分为10组．其中5株细菌分别独立成组．最多的第Ⅱ组包含有8株细菌．而在同一聚类组内的细菌可能是处于进化上亲缘关系较近的位置．研究显示，30株菌具有丰富的种属多样性．揭示了深海微生物资源的丰富和潜力．ERIC—PCR和BOX—PCR技术可用于对深海微生物群落组成和多样性的研究．     

松枯梢病菌RAPD分子水平遗传距离分析

对来自中国、美国、英国、南非和智利的松枯梢病菌23个菌株进行RAPD分析。用12个引物共扩增出135个RAPD标记,其中多态性标记占96.3%。各菌株间的Nei相似系数UPGMA法聚类结果表明,国内外23个菌株可大致分为3个类群:来自智利的CWS41与所有菌株的遗传关系最远;来自中国的F2和J2次之;其他的国外菌株与国内菌株的遗传关系则较近。此次实验未将来自美国的B型菌株与其他菌株区分开。     

中国水仙种质资源的遗传多样性分析

用随机扩增多态DNA（RAPD）标记方法对中国水仙主要栽培品种及不同的生态类型进行了遗传多样性检测。从98个随机引物中筛选出16个有效引物，共扩增出120条DNA带，其中多态位点39个，占32．5％。相对其他作物，中国水仙遗传多样性水平偏低。中国水仙遗传多样性贫乏可能是现有中国水仙品种稀少的重要原因。用UPGMA法对各样品间的Nei氏相似性系数进行聚类分析。结果显示，崇明水仙与漳州水仙亲缘关系十分密切，平潭水仙与漳州水仙亲缘关系相对较远。平潭水仙和崇明水仙各居群内的遗传分化很小，而漳州水仙居群内遗传多样性较为丰富。以栽培品种看，单瓣水仙与重瓣水仙亲缘关系密切，“金三角”与单瓣水仙、重瓣水仙两者的亲缘关系较远。基于研究结果，提出采用新技术引进新种质选育水仙新品种的思路和保护中国水仙资源的重要性。     

编码普通野生稻磷酸盐转运蛋白基因片段的分离与克隆

以云南普通野生稻基因组DNA为模板，根据GeneBank中登记的编码小麦高亲和力磷酸转运蛋白基因保守序列设计一对特异引物，利用多聚酶链反应技术（PCR），扩增出目标基因（cwrpt)1002bp长度的基因片段并克隆到载体pGEM-T。经DIG标记探针杂交检测初筛，限制性内切酶酶切，PCR扩增，DNA序列分析与可能氨基酸序列同源性比较，此推定的氨基酸序列与小麦，水稻，拟南芥，番茄磷酸转运蛋白同源性很高，初步认为此基因片段为普通野生稻耐低磷胁迫相关磷酸盐转运蛋白的编码基因，获得全长序列与基因表达的进一步研究正在进行中。     

6种瓢虫的RAPD分析及在分类上应用的研究

利用随机引物分别对6种瓢虫的DNA进行了聚合酶链式反应（RAPD－PCR）的实验。结果显示，用相同引物扩增不同种瓢虫的基因组DNA，扩增产物多态性DNA片段的数目是不同的；两种不同引物的扩增产物中，各自呈现出种、属的特异性片段，其可用于种、属的鉴别；聚类图显示了种、属之间亲缘关系的远近程度，并与形态学分类结果相一致。实验分析还发现：七星瓢虫不同个体间多态性DNA特有带较多，遗传较稳定；龟纹瓢虫与之相比，不同个体间多态性DNA的特有带较少，变异程度较大。     

石蒜单染色体的显微分离及体外扩增

建立了石蒜单染色体的分离及体外扩增的方法。石蒜根尖经卡诺固定液固定后，再用果胶酶和纤维素酶酶解处理，制得标本，在倒置显微镜下，用自制的毛细管针挑取目的的染色体。将分离的石蒜染色体放入0．2mLEppedorf管中，经蛋白酶K处理后，进行DOP－PCR扩增，获得DNA片段。琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度大约为100－5000bp。此法为构建石蒜单染色体基因组库和筛选其特异性探针奠定了基础。