Identification of Caspasecleavage site in the apoptosis suppressor protein P49 from the<Emphasis Type="Italic">Spodoptera littoralis</Emphasis> nucleopolyhedrovirus

The p49 gene from baculovirus Spodoptera littoralis nucleopolyhedrovirus (SINPV) was able to suppress apoptosis of 5~9 cells induced by virus infection. Ectopically expressed P49 protein had the capacity to inhibit the activity of Caspases, being the executioner of apoptosis. Digestion of P49 with human Caspase or Bm-Caspase both yielded 10 and 40 kD fragments. Checking the sequence of P49, we found that the motif 91-TVTDG-95 of P49 was the sequence recognized by Caspases. The mutant of P49, Asp94Ala, could not be cut by both caspases and lost its caspases inhibition.Meanwhile, Thr91Ala mutant permitted the cleavage and partially retained its activity of caspases inhibition. We also found that P49 was a substrate of upstream initiator caspase and downstream effector Caspases, indicating that P49 was a broad specificity Caspase inhibitor.     

啤酒花中蛇麻酮诱导细胞凋亡及机制研究

通过体外抗肿瘤实验观察啤酒花(Humulus LupulusL.)中成分蛇麻酮(lupulone)对肿瘤细胞SGC-7901和HepG-2诱导细胞凋亡的作用,并揭示其作用机制.采用MTT法观察蛇麻酮体外抗肿瘤作用;采用流式细胞仪观察蛇麻酮对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响;采用Fluo-3AM探针标记,激光共聚焦技术观测细胞内[Ca2 ]i变化.蛇麻酮对肿瘤细胞SGC-7901及HepG-2均有较好的疗效.蛇麻酮作用于SGC-7901和HepG-2细胞48 h后,肿瘤细胞均有明显凋亡峰出现.蛇麻酮可以将肿瘤细胞SGC-7901和HepG-2的细胞周期阻滞在G0/G1和S细胞期,升高细胞凋亡指数(APO).蛇麻酮可使SGC-7901细胞内[Ca2 ]i升高,使HepG-2细胞内[Ca2 ]i先升高后降低.蛇麻酮通过诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用.蛇麻酮通过升高肿瘤细胞内[Ca2 ]i启动肿瘤细胞凋亡机制,[Ca2 ]i升高时Ca2 来源于细胞内钙库释放.     

3,7-二硝基-二苯基溴盐诱导K562细胞株的凋亡

采用苔盼蓝染色法、MTT比色法研究了环状溴代鎓盐cBr对人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的影响;并用同位素示踪技术(3H-TdR)研究了cBr对K562细胞DNA的损伤作用;从形态学(荧光显微镜、电镜观察)和生化特性(流式细胞术、3H-TdR掺入法分析)研究了cBr抑制K562细胞增殖作用的机制.结果表明:在体外cBr显著抑制K562细胞增殖,并对DNA造成损伤,提示cBr的作用是通过诱导细胞凋亡而进行的,是一种新型的免疫增强剂.     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

雷公藤红素抑制大鼠胰岛细胞功能损伤研究

研究雷公藤红素(Celastrol)对大鼠胰岛细胞(INS-1)在炎症通路中功能损伤的恢复作用,并探索其分子药理学机制.通过MTT检测不同浓度Celastrol对炎症侵润下INS-1细胞的活性影响,利用免疫荧光技术观察INS-1细胞凋亡变化.采用钾离子刺激的胰岛素分泌(KSIS)来检验INS-1细胞分泌胰岛素的功能.ELISA检测INS-1细胞处理前后NO的分泌情况.结果发现,低浓度状态下Celastrol(100~300nmol/L)对有IL-1β引起的INS-1细胞凋亡有一定的保护作用,并且能显著改善INS-1的功能,INS-1细胞内NO分泌降低.研究结果表明Celastrol对INS-1细胞中NO分泌的抑制可能是其抑制INS-1细胞炎症状态下功能损伤的机制之一.     

泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡

为了研究泛素连接酶Nedd4对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,利用小RNA干扰技术,通过慢病毒包装,侵染前列腺癌细胞DU145,达到下调Nedd4表达的目的.MTT检测表明,下调Nedd4表达可以抑制DU145细胞的增殖;DAPI染色发现,下调Nedd4表达的DU145细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感.这些结果都说明,下调Nedd4的表达不仅可以抑制DU145肿瘤细胞增殖,而且可以促进细胞凋亡.     

山奈酚对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

研究山奈酚诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡的作用及可能的作用机制.采用MTT法检测山奈酚对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制作用;采用DAPI染色检测经山奈酚处理后细胞凋亡的形态变化;采用RT-PCR和Western-blot技术检测山奈酚处理前后H446细胞p53,bax,bcl-2 mRNA和蛋白的表达.结果显示,不同浓度的山奈酚能抑制人小细胞肺癌H446细胞生长,且随浓度增加抑制作用增强;H446细胞在山奈酚诱导下出现典型的凋亡形态;20μmol/L以上浓度的山奈酚处理后,p53,bax mRNA和相应蛋白表达均升高,而bcl-2 mRNA和蛋白表达降低.研究表明,山奈酚对H446细胞增殖有抑制作用,并能促进其凋亡.p53,bax和bcl-2在山奈酚诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡中起重要作用.