啤酒花中异葎草酮体外抗肿瘤作用及机制研究

研究啤酒花(Humulus Lupulus L.)中成分异葎草酮(tetrahydro-iso-α-acid)对人胃腺癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞HepG-2的体外抑制作用,并初步揭示其抗肿瘤的作用机制.以MTT法进行细胞毒测定;采用流式细胞仪观察异葎草酮对肿瘤细胞凋亡的影响;细胞线粒体跨膜电位(MMP)测定用罗丹明123(Rhodamine l23,Rh123)标记,以流式细胞仪检测.异葎草酮对SGC-7901和HepG-2的IC50分别为13.4μg/mL和11.58μg/mL.异葎草酮作用于SGC-7901和HepG-2细胞48 h后,肿瘤细胞均有明显凋亡峰出现.异葎草酮可以导致SGC-7901和HepG-2细胞内线粒体膜电位明显下降,并呈剂量依赖关系.结果表明,异葎草酮对肿瘤细胞SGC-7901及HepG-2均有较强抑制作用,这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的.异葎草酮是通过线粒体路径启动细胞凋亡的,而且诱导线粒体功能异常可能是其引起细胞凋亡发生的主要作用机理.     

野西瓜挥发油诱导SGC-7901凋亡的初步研究

研究野西瓜挥发油诱导SGC-7901细胞凋亡的机制.采用流式细胞术分析野西瓜挥发油对SGC-7901细胞早期凋亡的影响;采用激光扫描共聚焦技术观测野西瓜挥发油对肿瘤细胞内Ca2+浓度变化的影响;采用流式细胞术分析野西瓜挥发油对SGC-7901细胞线粒体跨膜电位的影响.野西瓜挥发油可以诱导SGC-7901细胞发生早期凋亡,使肿瘤细胞内的Ca2+浓度升高,并降低细胞线粒体跨膜电位.野西瓜挥发油具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡.通过升高肿瘤细胞内的[Ca2+]i而激活了Ca2+依赖性的核酸内切酶,同时通过PT孔的开放,引起线粒体跨膜电位下降而导致细胞凋亡.     

啤酒花中异葎萑草酮体外抗肿瘤作用及机制研究

研究啤酒花（Humulus Lupulus L．）中成分异葎草酮（tetrahydro-iso-α-acid）对人胃腺癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞HepG-2的体外抑制作用，并初步揭示其抗肿瘤的作用机制．以MTT法进行细胞毒测定；采用流式细胞仪观察异葎草酮对肿瘤细胞凋亡的影响；细胞线粒体跨膜电位（MMP）测定用罗丹明123（Rhodamine 123，Rh123）标记，以流式细胞仪检测．异葎草酮对SGC-7901和HepG-2的IC50分别为13．4μg／mL和11．58μg/mL．异葎草酮作用于SGC-7901和HepG-2细胞48h后，肿瘤细胞均有明显凋亡峰出现．异葎草酮可以导致SGC-7901和HepG-2细胞内线粒体膜电位明显下降．并呈剂量依赖关系．结果表明，异葎草酮对肿瘤细胞SGC-7901及HepG-2均有较强抑制作用，这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的．异葎草酮是通过线粒体路径启动细胞凋亡的，而且诱导线粒体功能异常可能是其引起细胞凋亡发生的主要作用机理．     

野西瓜总皂苷诱导SGC-7901凋亡的初步研究

探讨野西瓜总皂苷诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡作用.采用MTT法检测野西瓜总皂苷对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;采用荧光倒置显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用流式细胞术分析野西瓜总皂苷对SGC-7901细胞凋亡率的影响;采用激光共聚焦显微镜观测细胞内[Ca2+]i的变化.5、25、50、100、200和400 μg/mL的野西瓜总皂苷作用于SGC-7901细胞72 h后,野西瓜总皂苷可抑制SGC-7901细胞的增殖,其IC50为31.542 μg/mL;野西瓜总皂苷作用SGC-7901细胞40 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;15、30、60 μg/mL的野西瓜总皂苷作用于SGC-7901细胞72 h后,细胞凋亡率分别为58.6%、92.298%、95.898%;15、30、60 μg/mL野西瓜总皂苷作用SGC-7901细胞24 h后,细胞内[Ca2+]i升高,并随野西瓜总皂苷给药剂量的增加而升高.野西瓜总皂苷能够促进SGC-7901细胞的凋亡,其作用机制可能与野西瓜总皂苷升高细胞内[Ca2+]i有关.     

四氢异葎草酮诱导SGC-7901细胞凋亡作用的研究

观察四氢异棒草酮（Tetrahydro-isohumulone,TH）通过线粒体途径诱导SGC-7901细胞凋亡的机制．MTT法检测TH对SGC-7901细胞增殖的影响;荧光显微镜观察TH对SGC-7901细胞凋亡形态的影响;流式细胞仪分析SGC-7901细胞凋亡率;采用试剂盒检测Caspase-9的活性;Western blot法检测Caspase-3蛋白表达情况．2、8、32μg／mL的TH处理SGC-7901细胞72h后,SGC-7901细胞生长受到抑制,抑制率在一定范围内呈剂量、时间相关性;随着TH质量浓度的提高SGC．7901细胞的凋亡率也增加;TH各剂量均能够显著升高SGC．7901细胞内Caspase-9活性,并呈剂量依赖性;同时,TH能够上调SGC-7901细胞内Caspase-3的表达量．并且呈剂量依赖性．TH可通过诱导SGC-7901细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,启动线粒体凋亡通路可能是TH诱导SGC-7901细胞凋亡的重要机制之一．     

西兰花异硫氰酸盐诱导SGC-7901细胞凋亡研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates, ITCS)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用及其可能机制.不同质量浓度ITCS处理人胃腺癌SGC-7901细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对SGC-7901细胞的抑制率,对细胞凋亡的影响.ITCS可抑制SGC-7901细胞增殖;细胞出现早期凋亡细胞的形态;0、60、120、240 μg/mL的ITCS作用于SGC-7901细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(4.3±1.6)%、(9.1±3.8)%、(20.1±4.2)%和(55.4±4.9)%;细胞内的Ca2 浓度升高.ITCS能够促进人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡,其作用机制可能是细胞内Ca2 浓度的升高.     

野西瓜总生物碱诱导SGC-7901凋亡机制的研究

通过体外抗肿瘤实验探讨了野西瓜(C.S)总生物碱对诱导人胃癌SGC-7901细胞的抑制特点,并初步探讨了游离钙、活性氧水平的变化与野西瓜总生物碱诱导肿瘤细胞凋亡的关系.野西瓜总生物碱作用的实验组与阴性对照组相比实验组各时间段G1期细胞都多于阴性对照组,而实验组的S期细胞少于阴性对照组,即野西瓜总生物碱能够阻滞肿瘤细胞由G1期进入S期.野西瓜总生物碱给药24 h后,细胞出现凋亡,且作用较明显,与质量浓度有关.因此以上实验证明野西瓜总生物碱可引起SGC-7901细胞凋亡.75、150、300 μg/mL 的野西瓜中总生物碱作用于SGC-7901细胞24 h后,活性氧(ROS)水平明显上升.而不同质量浓度的野西瓜总生物碱作用于SGC-7901细胞24 h后,用荧光染料Flow-3/AM对细胞进行染色,经过激光共聚焦显微镜观察发现野西瓜总生物碱能提高肿瘤细胞内钙离子质量浓度,且呈一定的剂量依赖关系.通过流式细胞仪分析,野西瓜总生物碱能明显提高肿瘤细胞内活性氧的水平.所以体外实验证明了野西瓜总生物碱对SGC-7901细胞具有抗肿瘤活性.在作用机制方面,可能与其可通过提高肿瘤细胞内钙离子质量浓度和增加肿瘤细胞内活性氧的产生,进而启动细胞凋亡机制诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

西兰花中ITCS诱导SGC-7901细胞凋亡作用机制

研究西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其机制.应用MTT法检测ITCS对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞凋亡率.实验证明ITCS可明显抑制SGC-7901细胞增殖;不同质量浓度的ITCS作用于SGC-7901细胞24 h后,细胞内活性氧含量随给药剂量的增加而升高、线粒体膜电位依次降低.60、120、240μg/mL的ITCS作用于SGC-7901细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为9.1%、20.1%和55.4%.ITCS可通过刺激SGC-7901细胞内活性氧的产生,损伤肿瘤细胞线粒体,使其膜电位下降最终引起SGC-7901细胞凋亡.     

野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞的抑制

探讨野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞生长的作用.采用MTT、SRB和肿瘤细胞集落形成能力实验观察野西瓜挥发油对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V和PI双染法检测野西瓜挥发油作用于SGC-7901细胞后细胞凋亡的形态特征.结果显示,野西瓜挥发油可抑制SGC-7901细胞的生长,MTT与SRB法测得其IC50为145.5μg/mL,GI50为121.32μg/mL,LC50为900.96μg/mL,TGI为240.55μg/mL;野西瓜挥发油对SGC-7901细胞集落形成的IC50为160.04μg/mL.Annexin V/PI双染激光共聚焦显微镜观察到75、150、300μg/mL的野西瓜挥发油可诱导SGC-7901细胞出现凋亡早、中、晚期的细胞形态.提示野西瓜挥发油具有明显的抗肿瘤作用,其抑瘤机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡.     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、cyclinB1表达影响

研究白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达,探讨白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G2/M期阻滞的机制.采用Western blotting法测定白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达的影响.不同质量浓度的白屈菜碱可显著下调人胃癌SGC-7901细胞内Cdk1与cyclinB1蛋白表达水平,同时显著上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达水平,并呈一定的剂量依赖性.白屈菜碱可下调SGC-7901细胞内Cdk1和cyclinB1蛋白的表达,上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达,这可能是白屈菜碱诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞的主要机制之一.     

文殊兰弱碱性生物碱的抗肿瘤活性研究

研究文殊兰中弱碱性生物碱对不同肿瘤细胞的抑制作用,并筛选出敏感细胞株,观察凋亡形态;MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2细胞株,MTT溶液,DMSO,Hoechst33258等;利用MTT法检测文殊兰弱碱性生物碱对上述肿瘤细胞的抑制作用以及Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;文殊兰弱碱性生物碱对上述细胞株均有明显的抑制作用,对HepG-2细胞的抑制作用更为明显,给药72 h后测定IC50=9.374 323μg/mL;Hoechst 33258染色法观察细胞出现凋亡小体,有凋亡现象发生.文殊兰弱碱性生物碱MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2细胞株具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的剂量依赖性,对HepG-2细胞的抑制作用最强,表现出良好的抗肿瘤活性.     

奥沙利铂黄芩素联合应用对胃癌细胞抑制作用的影响研究

目的观察奥沙利铂与黄芩素联用对人胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用.方法实验分为对照组、给药组(奥沙利铂组、黄芩素组、联合作用组).应用MTT法测定给药组不同给药浓度对胃癌SGC-7901细胞株增殖的影响;倒置显微镜下观察对照组、给药组培养48 h后的细胞形态学变化;应用流式细胞术检测对照组、给药组胃癌SGC-7901细胞株凋亡率;HOE33258染色观察细胞凋亡形态学改变.结果奥沙利铂组、黄芩素组、联合作用组均可有效抑制SGC-7901细胞增殖,呈明显的量效关系;其中联合作用组抑制率明显高于奥沙利铂组和黄芩素组,差异具有显著统计学意义(P0.01).奥沙利铂组、黄芩素组SGC-7901细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有显著统计学意义(P0.05).联合作用组细胞凋亡率明显高于对照组、奥沙利铂组、黄芩素组,差异具有显著统计学意义(P0.05).结论奥沙利铂与黄芩素联用可显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

干扰长链非编码 RNA NEAT1 上调 miR-126 抑制胃癌细胞的生长、间质转换及裸鼠肿瘤形成

摘要:目的 研究干扰长链非编码 RNA 核富集的转录物 1( NEAT1) 上调 miR-126 抑制胃癌细胞的生长,间质转换及裸鼠肿瘤形成的影响。 方法 通过 RT-PCR 分析 NEAT1 在胃癌 MGC-803、SGC-7901 细胞和正常胃上皮 GES-1细胞中的表达,并检测 sh-NEAT1 的沉默效率。 NEAT1 沉默后,EDU 染色分析肿瘤细胞的增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell 小室和划痕实验分析肿瘤细胞的侵袭、迁移能力;Western blot 分析肿瘤细胞 Ki67、Caspase-3、N-cadherin 和 E-cadherin 的表达。 荧光素酶报告实验验证 NEAT1 与 miR-126 的靶向关系,分析 NEAT1 / miR-126 对胃癌 SGC-7901 细胞生长和运动的调节影响;通过构建转染 sh-NEAT1 的 SGC-7901 细胞的移植瘤模型裸鼠,检测30 d 内肿瘤体积及质量变化;免疫组化检测 Ki67 和 Caspase-3 的表达,RT-PCR 检测 NEAT1 和 miR-126 的表达;Western blot 检测 N-钙黏蛋白( N-cadherin) 及 E-钙黏蛋白( E-cadherin) 的表达。 结果 NEAT1 在肿瘤细胞中的表达水平显著高于正常细胞( P< 0. 05) ,sh-NEAT1 沉默后,肿瘤细胞 NEAT1 的表达量显著降低,增殖能力明显受到抑制,凋亡细胞比例显著增高,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力明显减弱,肿瘤细胞中 Ki67 和 N-cadherin 表达量明显降低,Caspase-3 和 E-cadherin 的表达水平显著升高,差异均具有统计学意义( P< 0. 05) 。 荧光素酶报告实验表明NEAT1 与 miR-126 存在靶向关系,sh-NEAT1 能显著促进 miR-126 的表达( P< 0. 05) ,miR-126 inhibitor 能显著促进 sh-NEAT1 对 SGC-7901 细胞增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡。 移植瘤模型裸鼠表明 sh-NEAT1 能够抑制肿瘤体积增大,下调肿瘤组织中 NEAT1、Ki67 及 N-cadherin 的表达水平,上调 miR-126、Caspase-3 和 E-cadherin 的表达量,肿瘤的 质 量 与 对 照 组 相 比 显 著 增 加,差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05) 。 结 论 干 扰 长 链 非 编 码 RNANEAT1 能够上调 miR-126 表达,从而抑制胃癌细胞的增殖,并通过阻断 EMT 机制降低肿瘤细胞的侵袭、转移能力,抑制裸鼠肿瘤的形成。     

Inhibition Mechanism of Emodin on Rabbit Vascular Smooth Muscle Cells Proliferation

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＥｍｏｄｉｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ[1] ,ｗｈｉｃｈｅｘｉｓｔｓｉｎｍａｎｙｍｅｄｉｃａｌｐｌａｎｔｓｓｕｃｈａｓｒａｄｉｘ ｐｏｌｙｇｏｎｉｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ,ｒｈｉｚｏｍａｐｏｌｙｇｏｎｉ,ｅｔｃ .Ｅｍｏｄｉｎｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｍｅｄｉｃｉｎｅ .Ｉｔｈａｓｍａｎｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｓｕｃｈａｓａｎｔｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ,ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ ,ｅ…     

以鼠腹腔微环境研究三氧化二砷对食管癌EC109细胞骨架的影响

目的:细胞骨架微丝是与肿瘤细胞生长密切相关的因素之一,本文以生物机体腹腔为免疫的微环境,研究化疗药物三氧化二砷(As2O3)对人食管癌细胞株微丝骨架的影响.方法:利用鬼笔环肽(Phalloidin)及碘化丙碇(Propidium Iodide,PI)标记,以流式细胞仪技术分析小鼠腹腔液中食管癌EC109细胞周期的各期细胞内F-actin的变化.结果:诱导肥大细胞(mast cell,MC)迁移入腹腔的同时,迅速升高G0/G1期细胞及降低S期细胞内的F-actin含量,DNA检测结果显示G0/G1期的肿瘤细胞数量迅速增加(p<0.05),S期细胞含量降低;三氧化二砷作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均降低,尤其S期为甚.MC和As2O3共同作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均也减少,但G0/G1期细胞数量却显著增加.结论:在小鼠腹腔微环境中,免疫功能改变(免疫细胞MC的聚集)引起G0/G1期细胞数量迅速升高、S期细胞的数量降低,可能促使EC109细胞G0/G1期向S期跨越的延迟;在此环境中,As2O3也可能通过抑制S期EC109细胞内F-actin的重组来延迟细胞从G0/G1期进入S期;诱导肥大细胞迁入腹腔的同时加入药物As2O3,其作用主要表现为短期效应,促进了肿瘤细胞内F-actin含量的降低,G0/G1期细胞数量较高,出现短暂的延迟G0/G1期向S期跨越,增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用.因此,以生物机体为研究环境,可能更真实地呈现化疗药物对肿瘤细胞的治疗效果.     

白英抗肿瘤作用的实验研究

探讨白英(solanum lyratum thunb)的抗肿瘤作用,采用MTT法观察白英含药血清对人癌A2780、Hela、SGC-7901细胞的体外抑制作用.采用体内试验以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率为实验指标评价白英对S180移植性肉瘤的抑制作用;以荷瘤小鼠存活时间为实验指标评价白英对H22移植性腹水癌的抑制作用.白英含药血清均能明显抑制体外培养的A2780、Hela、SGC-7901细胞的生长;白英能明显抑制实体瘤重和延长荷瘤小鼠存活时间.说明白英对体外培养的A2780、Hela、SGC-7901细胞有明显的抑制作用;具有一定抑制S180、H22诱发的移植性肿瘤作用.     

龙葵多糖对荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数的影响

研究龙葵多糖对荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数的影响,从免疫学角度初步探讨龙葵多糖的抗肿瘤药效学作用.实验采用MTT法观察龙葵多糖对Hep G-2和SGC-7901两种人肿瘤细胞的生长抑制作用.测定S180小鼠瘤重,H22荷瘤小鼠生存时间以及胸腺指数、脾指数等.实验结果表明龙葵多糖对Hep G-2细胞和SGC-7901细胞的IC50分别为189.60μg/m L和186.56μg/m L.龙葵多糖能够显著降低S180荷瘤小鼠平均瘤重,与阴性对照组比较具有显著性差异(P0.01),龙葵多糖能明显延长H22荷瘤小鼠的生存时间(P0.05或P0.01),显著提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数(P0.05或P0.01).表明龙葵多糖的肿瘤作用是通过改善机体免疫力实现的,而不是通过细胞毒作用发挥的.