Apoptosis in suspension culture of tobacco cells induced by heat shock

The induction of apoptosis in suspension culture of tobacco cells by heat shock is reported for the first time. Heat treatment (48℃ for 4 h) of tobacco cells led to the appearance of typical hallmarks of apoptosis. It was demonstrated by DNA laddering analysis that the cells treated with heat shock at 48℃ for 4 h had a serious degradation of nuclear DNA into multi-nu-cleosomal sizes, suggesting that heat shock activated endogenous nuclease which led to DNA cleavage at the linkage sites between the nucleosomes, but ladders were very faint for DNA from 2 and 9 h heat-treated cells. The terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labelling (TUNEL) detection also showed that most of these treated cells (48℃ for 4 h) displayed positive reactions, indicating a serious DNA 3'-OH cleavage in their nuclei. Moreover, some other cytological changes in apoptotic cells, such as cell shrinkage, chromatin aggregation, nucleus collapse, have also been observed by 4', 6'-diamidino-2-phenyl-indole (DAPI) staining.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合低剂量顺铂诱导多药耐药人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

为研究卵巢癌多药耐药机制和逆转耐药,探讨在低剂量顺铂存在下,人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对多药耐药人卵巢癌细胞的杀伤增效作用及其可能存在的分子病理机制。用顺铂为诱导剂,逐步建立多药耐药人卵巢癌细胞株SKOV3/cDDP。(此细胞株经免疫组化检测P-gp高表达)。TRAIL、顺铂或两药联用12h,24h,48h,采用MTT法测试细胞毒作用,Hochest33258染色荧光显微镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察亚细胞结构形态,通过流式细胞术检测细胞凋亡比例,Western blot分别检测在联用TRAIL作用前后cFLIP蛋白的表达情况。结果显示:1)单用100ng/mL TRAIL只能杀伤4.67%±0.26%的SKOV3/cDDP细胞,IC50>1000ng/mL。顺铂对SKOV3/cDDP细胞的作用存在剂量依赖性细胞毒效应,这种效应主要通过诱导细胞凋亡实现;2)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用可杀死52.12%±2.84%的SKOV3/cDDP细胞。呈现出高效协同作用;3)流式细胞术分析、透射电镜观察及荧光显微镜证实其协同性杀伤作用主要通过促进诱导细胞凋亡实现;4)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用,可使细胞cFLIP蛋白的表达下调,促进了细胞凋亡的发生。结论:TRAIL与亚毒性浓度顺铂联用表现出对多药耐药人卵巢癌细胞的高效杀伤作用,这种作用可能主要由促进细胞凋亡介导实现,cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。     

强力霉素对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制及促凋亡作用

为研究强力霉素体外对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖及凋亡的影响。应用MTT比色法研究不同浓度强力霉素(2.5,5,10,20,50mg/L)对A549细胞增殖的影响。荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳、AnnexinV-PI双标法等多项方法,研究强力霉素对A549细胞的促凋亡作用;采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2和bax的表达。强力霉素作用后,A549细胞的吸光度值降低,并出现凋亡特有的细胞核改变DNA梯状条带,早期凋亡的细胞数增加,伴有bcl-2的下调,bax上调。这表明强力霉素可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,其诱导凋亡的作用可能与其调节bcl-2/bax的表达有关。     

患包涵体肝炎鸡血淋巴细胞凋亡、坏死的研究

运用流式细胞仪技术研究了鸡包涵体肝炎(inclusion body hepatitis,IBH)发病过程中血液淋巴细胞的凋亡、坏死变化情况.结果表明,攻毒组在攻毒后3~5d,淋巴细胞早期凋亡显著下降(P<0.05),7d明显升高(P<0.05),12d时淋巴细胞早期凋亡下降显著(P<0.05).攻毒组在攻毒后3~5d时,淋巴细胞坏死与对照组差异不显著(P>0.05),7~12d时显著低于对照(P<0.05),在25d时显著高于对照组(P<0.05).     

白肉灵芝水提物对新生大鼠胆红素脑病的影响

为了研究白肉灵芝水提物（ganoderma leucocontextum aqueous extracts, GLAE）对新生大鼠胆红素脑病的改善作用。腹腔注射胆红素建立高胆红素血症大鼠模型，将新生大鼠分成对照组、模型组、GLAE低剂量组、GLAE中剂量组和GLAE高剂量组，分别给予不同剂量的（0、50、100、200 mg/kg）GLAE处理。利用试剂盒检测血液样本和大脑组织中总胆红素水平，比色法检测大脑组织ATP酶、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、过氧化氢酶（catalase, CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）活性和丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量，酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、神经特异性烯醇化酶（neuron specific enolase, NSE）和中枢神经特异性蛋白（central nerve specific protein, S100β）的含量，实时荧光定量PCR和western blot检测大脑组织B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （cysteine aspartate protease 3, Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2 相关X（Bcl-2 assaciated X, Bax）、脑源性神经生长因子（brain derived neurotrophic factor, BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor, NGF）mRNA水平和蛋白含量。结果显示，与模型组相比，经GLAE干预后，大鼠血清及大脑组织胆红素浓度明显降低（P < 0.05，P < 0.01）；大脑组织SOD、CAT、GSH-Px、Na⁺-K⁺-ATP和Ca²⁺-ATP酶活性显著升高（P < 0.05，P < 0.01），MDA含量明显降低（P < 0.05，P < 0.01）；血清TNF-α、IL-1β、NSE、S100β含量显著降低（P < 0.05，P < 0.01）；大脑组织Caspase-3、Bax mRNA水平和蛋白含量明显降低（P< 0.05，P < 0.01），Bcl-2、BDNF、NGF mRNA水平和蛋白含量明显升高（P < 0.05，P < 0.01）。以上结果表明GLAE能减轻过量胆红素对新生大鼠的大脑损伤，其作用机制可能通过改善新生大鼠大脑能量代谢，提高大脑抗氧化能力，增加神经营养因子含量，抑制炎症反应及凋亡基因的表达来发挥作用。     

美洲大蠊多肽和顺铂联用对HepG2细胞凋亡及自噬的影响

采用MTT法检测美洲大蠊多肽（PAP-3）与不同浓度的顺铂（DDP）单用或联合使用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响；采用流式细胞术检测PAP-3、DDP单独或联合给药干预对HepG2细胞凋亡的影响；Western Blot检测PAP-3、DDP单独或联合给药后HepG2细胞内自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1、Atg5及PI3K的表达。实验结果显示，与DDP单独给药相比，PAP-3与DDP联合给药对HepG2的细胞的抑制作用更强；PAP-3与DDP联合给药组中细胞的凋亡率与DDP和PAP-3单独给药组相比均有升高（P ＜ 0.05)。与对照组相比，DDP组中，p62蛋白水平降低，LC3II蛋白水平升高，LC3II/I的比例也升高，表现出细胞自噬流的活化；与DDP组相比，联合给药组中p62蛋白水平回升，LC3II蛋白水平和LC3II/I的比例均有回落。且联合给药组中PI3K、Atg5、Beclin-1等自噬相关蛋白的量均较DDP组减少，而凋亡相关的Caspase-3蛋白的表达量则较DDP组增加。据此推测，PAP-3和DDP的联用可以通过抑制HepG2细胞自噬相关蛋白的表达水平，抑制DDP带来的细胞自噬水平的升高，增加细胞对DDP的敏感性，从而诱导HepG2细胞凋亡。     

异硫氰酸异丁酯抑制肝癌细胞HepG2生长的效应与机理

为了探究异硫氰酸异丁酯(isobutyl isothiocyanate)对肝癌细胞HepG2的生长抑制效应及其分子机制，该研究通过MTT实验检测化合物对细胞的生长抑制率，计算出IC50值为3.5 μg·mL－1；通过流式细胞技术检测发现0.437 μg·mL－1以上浓度的化合物能诱导HepG2细胞凋亡；通过划痕实验检测发现0.875 μg·mL－1以上浓度的化合物能抑制细胞迁移；进一步通过生物信息学分析表明异硫氰酸异丁酯的靶蛋白可能为巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)，且HepG2细胞中MIF表达量高于低敏感株.免疫印迹实验也进一步发现化合物不仅能够抑制蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的激活，还能下调p53蛋白表达.研究结果表明，异硫氰酸异丁酯可能通过靶向HepG2细胞中的MIF蛋白，影响MIF与其受体CD74相互作用，从而下调p53蛋白表达，阻滞细胞周期的正常进行，诱导细胞凋亡，对肝癌具有特异性的抑癌潜力.