比格犬黑皮质素受体3基因291位点突变与体重性状相关性的分析

分析比格犬MC3R基因突变与体重性状的关系。抽取112只比格犬血液，记录体重数据，然后提取DNA；采用PCR-RFLP技术对MC3R基因G291A位点进行分析，并克隆测序。测序结果表明，291位点表现为G、A二个等位基因和GG、GA及AA三种基因型；统计分析结果显示AA型犬与GG型犬体重比较差异显著（P〈0．05）。犬MC3R基因突变可致体重增加，可作为犬体重标记的候选基因。     

重庆地区汉族群体19个STR基因座遗传多态性的研究

采用GoldeneyeTM20A试剂盒复合扩增180例重庆地区无血缘关系汉族个体的19个STR基因座。扩增产物经ABl3130序列分析仪进行检测，GeneMapperIDV3．2．1基因分析软件进行基因分析，得到基因分型图。总共检测出182个等位基因，其频率分布介于0．0028～0．4972。19个STR基因座的杂合度介于0．6611～0．9111，个体识别率介于O．8114～0．9882，匹配概率介于0．0118～0．1886，多态信息含量介于0．6309～0．9190，累积个人识别率和累积多态信息含量均大于0．9999999999，累积匹配概率为3．7189×10-^24“，累积非父排除率为0．9999999964。说明该19个STR基因座具有比较高的多态性，是较理想的遗传标记，所得到的等位基因频率等数据可为重庆地区汉族人群的法医学个人识别、亲子鉴定及群体遗传学等研究提供基础数据。     

胃癌侧群细胞耐药性研究及干细胞相关基因检测

目的研究胃癌侧群（Side Population，sP）细胞对化疗药物5-Fu（氟尿嘧啶）的耐药性及可能机制，并检测干细胞相关基因Nanog、Musashi-1及cD44的表达情况。方法选择人胃癌细胞株sGc-7901，以荧光染料H0echst 33342染色，维拉帕米桔抗对照，应用流式细胞仪分选sP细胞和nonsP细胞。细胞耐药实验比较sP细胞与nonsP细胞对化疗药物5．Fu的耐药性差异；westem_h10t检测ABcG2和bcl-2蛋白表达情况；流式细胞仪分析细胞周期；荧光定量PcR检测两组细胞中干细胞相关基因Nanog、Musashi-1及cD44mRNA的表达差异。结果胃癌细胞株sGc．790l中sP细胞的比例为2．8％，sP细胞对5-Fu的耐药存活率明显高于non-sP细胞（P〈0．05），与nonsP细胞相比，sP细胞高表达耐药蛋白ABcG2和抗凋亡蛋白bcl-2，有更多的细胞处于c0／G1期（P〈0．05），并高表达干细胞相关基因Musashi-1和cD44。结论胃癌sGC_7901细胞株中sP细胞对化疗药物5．Fu的耐药性明显高于nonsP细胞，其耐药机制可能与sP细胞高表达耐药蛋白ABcG2和抗凋亡蛋白bcl-2，有更多细胞处于G0／Gl期有关；Musashi-1和cD44可能是相对特异性的胃癌干细胞标志物。     

庆大霉素产生菌GntB基因的克隆与转化

根据小单孢菌产生庆大霉素的生物合成机理，利用基因克隆方法从棘孢小单孢菌（Micromonospora echinospora）基因组中扩增出庆大霉素生物合成的关键酶基因—2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因（GntB），并将其通过大肠杆菌／链霉菌穿梭质粒pIJ699转化原菌株，采用硫链丝菌素抗性基因启动子带动2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因在棘孢小单孢菌细胞中实现了转化。     

表观遗传基因沉默研究新进展

美国弗吉尼亚联邦大学Massey癌症中心的研究人员确定出了一种蛋白质在血红蛋白基因沉默中的作用。这种蛋白将可能成为在分子水平上治疗遗传性血液疾病如镰刀细胞贫血症和β-地中海贫血症的一个非常有潜力的靶标。这项研究的结果公布在4月的PNAS（美国科学院院刊）中。研究人员首次发现蛋白质MBD2蛋白通过甲基化作用（DNA的一种化学修饰过程）介导胎儿gamma球蛋白基因沉默。     

青少年特发性脊柱侧凸基因表达谱的研究

目的从疾病基因表达谱的水平研究青少年特发性脊柱侧凸（adolescent idiopathic scoliosis，AIS）的发病机理。方法利用4张Affymetrix公司的U133 Plus2．0基因表达谱芯片检测5个RNA样本的基因表达谱的差异，其中两个正常儿童RNA样本同时与一张芯片进行杂交，AIS轻度、中度与重度组各一个RNA样本分别与一张芯片杂交，用生物信息学方法筛查有表达差异的基因。结果总共筛选出表达异常及与病情程度变化趋势相关的基因42个，涉及17条染色体。结论外周血基因普表达谱的研究表明青少年特发性脊柱侧凸显示有多基因遗传性，是探讨病因和病变进展的一个方法。     

CT诊断甲状腺肿块18例临床分析

目的探讨甲状腺肿块的CT诊断价值。方法回顾分析18例甲状腺肿块的CT特征，并与手术病理对照。结果CT诊断18例甲状腺肿块与手术病理符合率的情况：（1）结节性甲状腺肿7例，诊断符合率71％（5／7）；（2）甲状腺腺瘤8例，诊断符合率63％（5／8）；（3）甲状腺癌3例，诊断符合率67％（2／3）。结论CT对甲状腺肿块的诊断虽然有很大价值，但是部分甲状腺肿块CT表现无特征性，定位诊断准确，定性诊断困难。     

基于BB—SIR方法的结肠癌特征基因提取

结合复杂数据分析（Complex Data Analysis）理论和充分降维的思想，在有效提取结肠癌特征基因研究的基础上，建立结肠癌特征基因提取的BB-SIR模型。该模型方法简洁易懂且有较高的识别率。依据BB-SIR模型和所给数据找到了两个结肠癌亚型，并确定了该亚型的特征基因。实验结果表明，BB—SIR方法选出的特征基因能够识别出结肠癌亚型，并且识别正确率达到96％以上。     

聚合质量比对Sr0．7La0．15Ce0．15Fe11.7Zn0．3O19／PAn复合体系微波吸收性能的影响

用原位聚合法制备了Sr0．7La0．15Ce0．15Fe11.7Zn0．3O19铁氧体／聚苯胺（PAn）复合材料。采用X射线衍射（XRD）、扫描电子显微镜（SEM）对样品的结构、微观表面形貌和粒子大小进行了表征，用微波矢量网络分析仪测量样品在2～12．4GHZ频率范围内复介电常数和复磁导率，根据测量数据计算微波反射率R与频率f的关系。研究结果表明：PAn包覆于掺杂锶铁氧体表面，PAn／Sr0．7La0．15Ce0．15Fe11.7Zn0．3O19复合材料具有良好的吸波性能，随着掺杂锶铁氧体含量的增加，微波吸收匹配厚度和吸收带宽发生变化：当Sr0．7La0．15Ce0．15Fe11.7Zn0．3O19聚合质量比为40％时，最佳匹配厚度为2．6mm，吸收峰值接近-40dB，峰值频率高于12．4GHz，大于10dB吸收带宽预计达到55GHz。     

La和Nd掺杂的硅基Bi4Ti3O12铁电薄膜的无疲劳特性及其机理的比较研究

采用优化的溶胶-凝胶（Sol—gel）技术，同一工艺条件下在Pt／TiO2／SiO2／Si衬底上成功地制备了Bi3.25La0.75Ti3O12（BLT）和Bi3.15Nd0.85Ti3O12（BNT）铁电薄膜．X射线衍射（XRD）测试表明BLT和BNT薄膜具有单相的取向随机的多晶微结构；扫描电镜（SEM）的观测显示了这些薄膜具有50～100nm晶粒构成的均匀致密的表面形貌．利用铁电测试仪测定了以Cu为上电极而形成的金属-铁电薄膜-金属结构的电容器的铁电性能，得到了很好的饱和电滞回线．在最大外加场强为400kV／cm时，BLT和BNT薄膜的剩余极化强度（2Pr）和矫顽电场（2Ee）分别为25．1gC／cm^2，203kV／cm和44．2gC／cm^2，296kV／cm．疲劳测试表明，在1MHz频率测试下经过1．75×10^10次读写循环后，由BLT和BNT薄膜组成的电容器几乎没有表现出疲劳，呈现很好的抗疲劳特性．分析比较了La和Nd掺杂对薄膜结构及铁电性能的影响及其机理．     

重症急性胰腺炎病人外周血单个核细胞线粒体DNA拷贝数的意义

目的探讨重症急性胰腺炎患者外周血单个核细胞线粒体DNA拷贝数与患者病情严重程度、预后的相关性。方法分离研究对象（重症急性胰腺炎患者34名，健康对照组17名）外周血单个核细胞，采用荧光实时定量PCR检测各组PBMC线粒体DNA相对舍量，其与严重程度、预后的相关性。结果重症急性胰腺炎患者线粒体DNA含量较健康对照组明显降低（P〈0．05）。患者单个核细胞线粒体DNA拷贝教与APACHEⅡ评分呈负相关（r=-0．425）其中并发症组mtDNA拷贝数显著低于无并发症组（P〈0．05）。结论重症急性胰腺炎患者外周血单个核细胞中线粒体DNA含量显著下降，与患者APACHEⅡ评分呈负相关，且低水平的线粒体DNA拷贝数提示并发症发生率的升高，因此，线粒体DNA拷贝数可作为潜在评估患者病情危重程度及预后的指标，这一发现值得进一步大型，前瞻性的研究。     

内源性硫化氢与皮质发育障碍模型大鼠认知功能损害的相关性研究。

目的探讨皮质发育障碍DCDs（disorders of cortical development）模型鼠的认知功能与H2s的变化关系。方法用1射线照射孕15d Wistar大鼠，制作DCDs模型。采用Morris水迷宫法测试P30（出生后30天）、P60、P90F1代DCDs模型鼠和对照组大鼠的学习能力和空间记忆能力。用敏感硫电极法检测大鼠血液及海马组织中H2s浓度。用亚甲基蓝法测定大鼠海马神经元细胞胱硫醚，B-合酶CBS（cystathionine。beta-synthase）酶活性。结果水迷宫实验：P60、P90模型组大鼠较正常对照组潜伏期明显延长（P〈0．05），且随月龄增加潜伏期越长。P60、P90模型纽大鼠较对照组血液也s浓度分别降低6．5、11．5μmol,／L、海马组织H2s含量分别减少3．2、5．6μLmol／L．mg，海马组织神经元细胞CBS酶活性降低24．94、34．46μmol／L．g．min。P30模型组与对照组的各项变化不明显。结论DCDs模型鼠脑内H，S含量及海马组织神经元细胞CBS酶活性降低，内源性H2s降低与DCDs认知功能损害可能具有相关性，并为治疗皮质发育障碍的认知功能损害可能提供治疗途径。     

尿毒症患者血清对内皮细胞小凹蛋白-1的影响及意义

目的体外观察尿毒症患者血液透析前后血清和健康人血清对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell, HUVECs)小凹蛋白 1(caveolin 1)表达的影响.方法取对数生长的 HUVECs,分为健康组(DMEM+健康人血清,n=8)、透前组(DMEM+尿毒症患者透前血清,n=18)、透后组(DMEM+尿毒症患者透后血清,n=18).采用 MTT法检测细胞活力,免疫组化SABC法和 Westernblot检测各组细胞内 caveolin 1蛋白的分布和含量.结果 MTT法筛选血清最佳干预时间和浓度分别为12小时、10%的血清干预浓度.与健康组比较,透前组细胞内 caveolin 1的蛋白表达水平明显下调(p<0.05),透后组改变不明显(p>0.05);而透后组细胞内 caveolin 1的蛋白表达水平较透前组细胞内 caveolin 1的蛋白表达水平上调(p<0.05).结论血液透析不能降低尿毒症患者动脉粥样硬化的形成的发生率,caveolin 1的变化可能是尿毒症血透患者动脉粥样硬化加速的原因之一     

DBP在难治性癫痫患者脑组织中的异常表达

目的通过观察白蛋白D．位点结合蛋白（DBP）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在难治性癫痫（IE）患者脑组织中的表达，探讨其在癫痫的发生、发展中的作用。方法用免疫组织化学及DBP／MAPK荧光双标法检测35倒难治性癫痫患者手术后脑组织标本中DBP、MAPK的表达，并与15例对照组进行比较。结果DBP主要在神经元表达，MAPK在神经元和胶质细胞中均有表达，主要分布于神经元，且IE中表达（DBP0．4737±0．0262、MAPK0．2935±0．0106）高于对照组（DBP0．2476±0．0229、MAPK0．2370±O．0125．P〈0．05），荧光双标显示DBP与MAPK分布在同一神经元上。结论DBP和MAPK在难活性癫痫患者手术后脑组织标本中表达上调，且共同表达在同一细胞上，提示两者在难治性癫痫的发生发展中可能存在一定的相互作用。     

A decrease in the estimated frequency of the extended HLA haplotype B18 CF130 DR3 DQw2 is common to non-insulin-dependent diabetes,juvenile rheumatoid arthritis,and Berger's disease

Extended HLA haplotypes frequencies were estimated from the HLA, C2, Bf and C4 phenotypes of 74 patients with non-insulin-dependent diabetes (NIDD), 92 with juvenile rheumatoid arthritis (JRA), 44 with Berger's disease (BD), 83 with insulin-dependent diabetes (IDD), and 140 healthy controls. The extended HLA haplotype B18 CF130 DR3 DQw2, which is common (around 10% phenotype frequency) in healthy Spaniards and in other populations of paleo-North African origin, was found to be significantly less frequent in NIDD, JRA and BD, whereas its frequency was normal in IDD (although DR3 DQw2 haplotypes were increased in the latter disease). These data support the existence of a common HLA-linked pathogeneic mechanism in NIDD, JRA and BD, and point to a genetic difference between IDD and NIDD at the HLA level. This effect is readily detectable in our population because the uncommon BfF1 allele marks that haplotype instead of the more common BfS, which marks B8 CS01 DR3 DQw2 in other Caucasians. Our results support the hypothesis of strong selective pressures operating at the HLA level to preserve extended HLA haplotypes with advantageous gene sets from dilution by crossing-over. Imbalanced incomplete haplotypes may give rise to inappropriate T-cell repertoire selection in the thymus and/or antigen handling in the periphery, and be partly responsible for the pathogenesis of certain HLA-linked diseases (i.e. NIDD, JRA, and BD).     

运用磁珠分选法建立免疫细胞共培养体系

目的以相互作用的几种免疫细胞上共同表达的抗原物质为标志,运用磁珠分选技术,从慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中同时获得并建立体外多细胞共培养体系,体外观察细胞之间的相互作用.方法采用梯度离心法分离30例慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠分选法分离获得 CXCR5+细胞,通过流式细胞仪检测 CXCR5+细胞纯度和组成,并将 CXCR5+细胞进行体外培养.在分离得到的 CXCR5+细胞的基础上,将 CXCR5+细胞分为3组,分别为对照组:不加任何刺激;实验组一:加入 IL 21刺激培养,实验组二:与人肝癌细胞系(HepG2)2215细胞混合培养.体外培养一周后,流式细胞仪检测实验组与对照组细胞 B细胞数量变化,ELISA测定培养体系中上清液 HBe抗体的含量.结果1)用流式细胞仪鉴定 CXCR5+细胞的纯度和构成:CXCR5+细胞纯度为85.5±5.8%,其中 Tfh细胞占23.8±7.4%,B细胞占35.6±7.6%;2)培养7天后,IL 21刺激组 B细胞百分率为47.2±1.8%,与(HepG2)2215混合培养组 B细胞百分率为40.2±3.5%,空白对照组 B细胞百分率为36.6±7.5%,IL 21刺激组与对照组,(HepG2)2215混合培养组与对照组 B细胞百分率均有显著差异(p<0.05);3)ELISA检测培养液上清 HBeAb定量,IL 21刺激组为0.668±0.094pg/ml,空白对照组为0.378±0.088pg/ml,两组有显著差异(p<0.05).结论使用间接免疫磁珠分离法可成功建立 CXCR5+B淋巴细胞和 Tfh细胞的共培养体系,为进一步体外研究细胞之间相互关系奠定基础     

连续性血液净化治疗对重症急性胰腺炎患者内皮细胞通透性的影响

目的探讨连续性血液净化治疗对重症急性胰腺炎(severeacutepancreatitis,SAP)患者内皮细胞的作用.方法人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells,HUVEC)按实验分组分别用16例健康对照组血清,38例 SAP患者连续性血液净化(ContinuousBloodPurificantion,CBP)治疗前、治疗6h、治疗20h血清体外干预脐静脉内皮细胞5h.transwell小室观察内皮细胞通透性变化,激光共聚焦显微镜观察 F actin应力微丝的表达及分布.结果 SAP患者 CBP治疗前内皮细胞通透性较健康对照组明显增高(P<0.01),CBP治疗6h、治疗20h后通透性均降低(P<0.05),但治疗20h组与治疗6h组相比,差异无显著性(P>0.05).激光共聚焦结果显示,与健康对照组相比,CBP治疗前 SAP患者内皮细胞 F actin应力微丝的数量及密度均明显增加,CBP治疗6h后,F actin应力微丝形成减少,治疗20h后减少更加显著.结论重症急性胰腺炎患者内皮细胞通透性明显增加,CBP治疗可以显著降低 SAP患者内皮细胞通透性,其机制可能与调节 F actin应力微丝形成与分布有关     

Resting energy expenditure in patients with cirrhosis of the liver measured by indirect calorimetry,anthropometry and bioelectrical impedance analysis

Energy expenditure was investigated in 15 patients with liver cirrhosis and 20 healthy controls by three methods: indirect calorimetry, anthropometry using the Harris-Benedict equation and bioelectrical impedance analysis. The energy expenditure was expressed in kcal/day, kcal/kg BW/day (BW — body weight), kcal/kg LBM/day (LBM — lean body mass, derived by bioelectrical impedance analysis) or in kcal/m²/day. We did not find statistical differences between values of resting energy expenditure obtained in patients with cirrhosis of the liver and healthy controls whichever method we used. We also did not find statistical differences between values obtained by indirect calorimetry, anthropometry and bioelectrical impedance analysis. There was a significant correlation between indirect calorimetry and anthropometry in both groups. We found significant correlations between indirect calorimetry and anthropometry, and between indirect calorimetry and bioelectrical impedance analysis, in the control group only. We can conclude that (1) resting energy expenditure of patients with cirrhosis of the liver is not changed when compared with healthy controls, and (2) bioelectrical impedance is a useful method to calculate body composition from which energy expenditure is derived; however, it gives an appropriate result only in healthy people, and only approximate values in patients with cirrhosis.