Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备

Pericardin 基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin 基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropyl β-D-thiogal actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot 检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin 多克隆抗体,为Pericardin 功能的进一步研究奠定了基础.     

果蝇血液发育标记基因mrj的多克隆抗体制备及检测

mrj是黑腹果蝇中一个蛋白编码基因.根据已报道的mrj基因序列,利用生物信息学分析选取果蝇mrj基因抗原亲水区,通过PCR扩增出其部分编码区序列,将其连接到pET-28a原核表达载体上.经酶切及测序鉴定质粒构建成功后,将重组质粒(pET-28a-mrj)转入Rosetta菌后通过IPTG(Isopropy1β-D-thiogalactoside)诱导表达出带His标签的重组融合蛋白后用镍柱纯化.将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体的效价和特异性.     

小鼠Shh蛋白N端基因的克隆与原核表达

从小鼠(C57BL/6)10.5d胚胎中提取总RNA经RT-PCR扩增出编码小鼠Shh基因N端cDNA序列,克隆到大肠杆菌表达载体pQEN3构建重组表达质粒pQEN3-Shh-N.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol/L IPTG诱导,在SDS-PAGE上检测到20kDa目的蛋白带,与Shh N端蛋白预期大小一致,其蛋白表达量达到了全菌总蛋白的约30%.重组蛋白经Western blot鉴定结果显示,在20kDa处出现单一的显色条带,说明表达的重组蛋白为Shh N端蛋白,为研究Shh蛋白N端与毛发生长的功能奠定了基础.     

杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备

目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multieapsid nueleopolyhedrovirus,SeMNPV) ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体,方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌B...     

约氏疟原虫对肿瘤的抑制作用研究

本文以约氏疟原虫感染接种S180瘤细胞的小鼠,研究约氏疟原虫对小鼠瘤块大小及存活情况的影响,结果表明：疟原虫清除后再接种S180的实验组和先接种S180再感染约氏疟原虫的实验组的瘤块大小明显小于单纯接种S180的对照组。实验组小鼠的存活时间也显著得到延长．表明约氏疟原虫虽然不能抑制肿瘤的发生,但对S180瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用．     

斑马鱼loc558117基因的多克隆抗体制备

loc558117基因是trim45在斑马鱼中的同源基因,小鼠及果蝇研究结果表明该基因与血细胞发育有关.利用PCR技术扩增斑马鱼loc558117基因部分编码区,并将其插入到原核表达载体pET-28a中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pET-28a-loc558117)转入Rosseta感受态细胞,通过IPTG诱导...     

果蝇Mef2基因多克隆抗体的制备及检测

为了在果蝇模型中进一步研究Mef2基因的功能,制备了Mef2多克隆抗体.以果蝇cDNA文库为模板,PCR扩增出亲水性和特异性均好的果蝇Mef2基因片段,将其克隆入pET-28a原核表达载体,然后将重组质粒转化入大肠杆菌菌株Rossetea,用IPTG诱导表达融合蛋白.融合蛋白先经Ni-IDA凝胶柱纯化,再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,然后用不同浓度的抗体分别进行Western-blot实验检测抗体效价.所得结果显示获得了较高效价的果蝇Mef2多克隆抗体.     

果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备

果蝇基因srp是血液发育的早期标记基因,为了研究果蝇这一模式动物中血液发育的详尽过程,通过提取野生型成体果蝇的总RNA,反转录获得其cDNA文库,设计引物克隆出srp基因,将所得片段插入原核表达载体pET28a中,经酶切和序列鉴定,成功构建重组质粒,并通过IPTG诱导表达出His-srp融合蛋白,经Ni-IDA凝胶柱纯...     

果蝇nulp1特异性多克隆抗体制备及检测

为了利用果蝇模型研究nulp1蛋白在早期心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出果蝇nulp1基因的部分编码区并插入到pET28a表达载体中.之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)Rosetta( DE3);通过IPTG诱导表达His-nulpl融合蛋白,该融合蛋白采用Ni2+金属螯合层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多...     

IPTG诱导浓度、时间及温度对重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因表达的影响

以重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因pGEX(CGRP/msCT)的工程菌为研究对象,利用IPTG作为诱导剂,分析比较在不同IPTG诱导条件下融合基因表达的效果,确定最佳IPTG诱导条件。结果表明∶在IPTG终浓度为0.2 mmol.L-1,诱导温度为37℃,诱导时间为5 h的条件下,该融合蛋白的表达量最大。利用光密度扫描对表达产物进行初步定量的结果表明,目的蛋白约占菌体总蛋白的32.11%。     

虎纹捕鸟蛛雌蛛粗毒的毛细管区带电泳分离分析

采用毛细管区带电泳（ＣａｐｉｌａｒｙＺｏｎｅＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,简称ＣＺＥ）模式,以虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）雌蛛粗毒为样品进行电泳分离分析．对电泳缓冲溶液的ｐＨ、浓度以及有机试剂和两性离子添加剂的加入对粗毒分离的影响作了研究．结果表明,粗毒在ｐＨ１１．５,７５ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液中可以得到最佳的分离．两性离子添加剂（三甲基氨基丙磺酸）能明显改善分离效果;并在实验中确定了虎纹毒素－Ｉ（Ｈｕｗｅｎｔｏｘｉｎ－Ｉ,简称ＨＷＴＸ－Ｉ）和虎纹凝集素－Ｉ（Ｓｅ－ｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａｌｅｃｔｉｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ－Ｉ,简称ＳＨＬＰ－Ｉ）在粗毒电泳图谱中的位置．     

凯氏定氮法测定啤酒酵母碱溶性多糖中蛋白质的质量分数

从啤酒酵母中提取出碱溶性粗多糖ASP,经乙醇分级、savag法脱蛋白以及分子筛层析进一步纯化得ASP2和ASP3,采用半微量凯氏定氮法,通过消化、蒸馏、滴定后计算其蛋白质质量分数,ASP,ASP2,ASP3分别为15.41%,3.17%和2.89%.     

蝎提取物对离体蛙心收缩活动的影响

研究了活蝎不同组织、干全蝎提取液以及蝎毒稀释液分别对离体蛙心收缩张力和心率的影响。结果表明：活蝎的头、四肢、蝎毒提取物和全蝎均对心脏收缩力有抑制性影响，其中蝎毒与全蝎不仅抑制心收缩力，且对心率具有较强的抑制作用，而蝎尾提取液则对收缩力有兴奋性影响。     

拟南芥FIE基因特异片段的克隆及序列测定

根据拟南芥FIE基因的序列设计PCR引物,以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR反应扩增FIE基因特异性片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长为1633bp,与预期结果相符。将该基因片段定向克隆到pGEM-T载体上,得到重组质粒p1633,酶切鉴定及测序分析结果表明该克隆为拟南芥FIE基因特异片段,与拟南芥FIE基因比较同源性达99.8％,可以作为探针使用。     

纳米Cu_2O原药与悬浮液对菜瓜灰霉病菌的抑制作用

为比较纳米Cu2O原药与悬浮液对菜瓜灰霉病菌的抑制作用,研究采用含药培养基法进行了毒力测定.试验结果表明:同一质量浓度的纳米Cu2O悬浮液对菜瓜灰霉病菌的抑菌效果明显优于纳米Cu2O原药,抑制作用与质量浓度呈正相关;毒力回归方程的相关系数分别为0.892 2和0.996 1,纳米Cu2O原药与悬浮液对菜瓜灰霉病菌的有效中浓度EC50分别为3 948.9mg/kg和167.9mg/kg.因此纳米Cu2O原药对菜瓜灰霉病菌有一定的抑制作用,而纳米Cu2O悬浮液对菜瓜灰霉病菌的抑制作用非常明显.     

TGEV截短S基因片段在多酵母表达系统中的表达

在多酵母表达系统中表达了含有猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段.经检测表明,不同类型酵母表达系统蛋白表达量和抗原性差异不大,研究中获得的重组蛋白为建立TGE血清学检测方法提供了必要的物质基础.