纤溶酶高产菌株筛选及其液体发酵条件研究

研究实验室自主分离的2株纤溶酶高产菌株发酵条件,采用4因素、3水平的正交试验设计方法对液体发酵培养基的碳源、氮源、无机盐进行了优化,并对培养基初始pH、发酵时间、发酵温度对产酶量的影响进行了测定.结果表明:菌株1液体发酵合适的产酶培养基配方为大豆粉的质量分数为6%,葡萄糖2%,CaCl2 0.06%,MgSO4 0.07%;菌株2液体发酵合适的产酶培养基配方为大豆粉的质量分数为6%,玉米淀粉2%,CaCl2 0.06%,MgSO4 0.07%.培养基初始pH均为6.5时酶活性最高;发酵温度均以38℃最好;而菌株1和菌株2的适宜发酵时间分别为48～84 h和60～84 h.在优化条件下,菌株1、菌株2液体发酵最高酶活分别为306.46 IU/mL和319.76 IU/mL。     

桔青霉生产核酸酶P1发酵条件优化研究

选用经紫外线诱变的桔青霉茵株ZM-48，采用单因子和正交试验对生产核酸酶P1的发酵条件进行了优化研究，筛选得到最佳培养基组分为(除麸皮浸出汁为体积分数外，其余均为质量分数)：葡萄糖和麸皮浸出液各3％，蛋白胨和酵母膏各0．3％，K2HPO4和KH2PO4各0．05％，CaCl2 0．08％，MgSO4和MnSO4各0．049／6，ZnSO4 0．02％；发酵条件为：起始pH值5．69，接种量10％，温度34℃，摇床转速180r／min，发酵时间72h。在此优化条件下，桔青霉发酵液的核酸酶P1活力从实验初的140U／ml提高到240U／m1．     

米曲霉固态发酵产淀粉酶条件优化的研究

以米曲霉A—l为出发菌株,在研究培养基加水量、温度、无机盐和培养时间等单因素的基础上,采用正交试验方法进行固态发酵产淀粉酶条件优化研究,并对正交试验结果进行了验证。试验结果表明,该菌株固态发酵产淀粉酶的最优条件为：加水量10mL,麸皮与豆饼粉的比例为8：2,MgS047H：0添加量为1％,在30℃发酵84h,酶活达269U／g。     

弗氏链霉菌变种S-221产弹性蛋白酶发酵培养基的优化研究

通过对弗氏链霉菌（Streptomyces fiadiae）变种S-221产弹性蛋白酶发酵培养基的优化,以提高该菌株所产的弹性蛋白酶酶活。试验采用单因素与正交试验对发酵培养基的成分进行优化研究。优化后发酵培养基的成分为：果糖6％,干酪素1.5％,碳酸铵0.3％,K2HPO4·3H2O 0.05％。MnSO4·H2O 0.001％。在此条件下该菌所产弹性蛋白酶酶活达到96.63U／mL,优化后的发酵培养基与优化前相比所产弹性蛋白酶酶活提高了30％。     

产转糖基β-半乳糖苷酶菌株F3的鉴定、产酶条件及转糖基活性研究

菌株乃从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析;菌株乃被鉴定为扩张青霉（Penicillumexpansum）。通过单因子试验和正交试验,对菌株乃产生转糖基阻半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2％、酵母粉1％、蛋白胨1．5％、氯化钠0．3％。在初始pH6．0,28℃培养40h时,其产酶量为2245．2U／L,比优化前提高约3倍。菌株乃产生的转糖基肛半乳糖苷酶以pH4．5缓冲液配制的30％乳糖为底物,50℃反应24h,低聚半乳糖产量为30．6％,其中80％以上为三糖。     

乳酸生产菌的选育及发酵的研究

以分离到的一株德氏乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ） １－１为出发菌株，经紫外线、硫酸二乙酯、亚硝酸钠等诱变剂处理，筛选出一株产乳酸较高的突变株ＺＬ－５１３，乳酸钙产量由５．８％提高至９．４％。以正交试验为基础对发酵培养基进行优化，采用优化后的培养基发酵 ３ ｄ，残糖降至 ０．１％以下，乳酸钙产量达 １５％。比优化前产酸提高 ６０％，缩短发酵周期 １ｄ。以质量分数 ８％～１５％的玉米粉为原料进行发酵，乳酸钙产量分别为１０％～１８．５％。     

巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHCMVp的研究

目的：提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法：将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS—PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果：摇瓶培养时,转化子在体积分数1％的甲醇pH6．0的条件下诱导72h,A600(菌体密度)为45．2,目的蛋白表达量达到10．2mg／L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1％甲醇诱导48h,最终A600(菌体密度)达到124,每升发酵液中含目的蛋白57．21mg。结论：通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。     

哈茨木霉SDU3.87耐碱性纤维素酶液体发酵条件的研究

从碱性土样中分离出的1株哈茨木霉(T．harzianum)，液体发酵条件的实验表明，产酶最适的培养基初始pH为7．5，培养温度为28℃，摇床转速为160r／min；最适的单一碳源为麸皮，添加量为质量分数3．0％～5．0％；添加质量分数0．5％左右的复合氮源有利于产酶的提高；诱导物纤维素CF—11和微晶纤维素的最适添加量分别为质量分数2．0％和1．0％；添加吐温80有利于产酶的提高，添加量质量分数0．2％；用300mL三角瓶液体摇床发酵时装样量80mL左右为宜；发酵周期5～6d，获得的粗酶液的内切酶活最高为1．85U/mL，FPA为0．96U/mL．水杨素酶活为0.81U／mL。     

短杆菌（Brevibacterium sp WX-10）产酶条件研究

研究了碳源、氮源、无机盐、金属离子等培养基组成和初始pH、通风量、温度等发酵条件对短杆菌(Brevibacterium sp WX-10)产酶的影响，通过正校试验优化得到的产酶培养基组成及发酵条件：蔗糖1％,NaCl2.5％，牛肉膏0．05％，NaNO3 0．05％，pH7．5，500mL三角瓶装培养基50mL，30℃于220r／min旋转式摇床上培养72h，在该培养条件下WX-10产酶量是原培养条件下的1．85倍。     

康氏木霉产酶发酵固体培养基优化研究

为利用廉价的培养基生产纤维素酶复合制剂，本实验采用培养基配方选择试验和双温度培养法对康氏木霉F244产酶特性进行了研究．在测定滤纸酶(FPA)、棉花酶、羧甲基纤维素酶(CMCase)、β-葡萄糖苷酶和果胶酶活力的基础上利用SPSS建立回归方程，全相关系数分别达到0．852，0．941，0．964，0．703，0．899，而后通过无约束规划求解找到最佳配方，并对酶活进行了预报和对比．结果表明：各酶活最大时对培养基各成分的含量要求不同；应用稻草粉质量分数20．3％，麸皮质量分数26．1％，(NH4)2SO4质量分数7．9％，水分质量分数45．7％的配方发酵时，F244的FPA、棉花酶、CMCase、β-葡萄糖苷酶、果胶酶活可望达14．1，20．1，43．9，21．6，16．8IU／g，基本与里氏木霉Q9414在其推荐培养基上的产酶水平相当，而且该配方用料来源广泛，成本低廉，工艺简单，产品安全无毒．     

降胆固醇干酪乳杆菌HC12的培养条件优化

干酪乳杆菌HC12具有降低培养基中胆固醇的能力,通过单因子、正交试验对其培养条件和培养基进行了优化.在MRS培养基的基础上,培养基最佳配比为酵母粉2.0%,葡萄糖2.5%,胰蛋白胨1.5%,牛肉膏1.0%;最适的起始pH值为6.0,最适温度为28℃.优化后的培养基、培养条件使干酪乳杆菌HC12的生长量(OD值)达到了1.502,去除胆固醇的量达到54.3 ug/mL.     

A群链球菌制剂的制备工艺

采用改良后的无血培养基,将筛选选育后得到的A群链球菌进行制剂的制备研究,以发酵后菌悬液的OD值为指标,通过正交试验分析对其进行条件优化。得到的制备工艺为：在37℃、摇床转速140r／min下,装瓶量150mL、pH值7．5、酵母粉用量0．5％、胰蛋白胨用量1．5％、牛肉膏用量0．4％、葡萄糖用量0．5％。实验表明,菌体在改良后的培养基上生长良好,形态特征符合A群链球菌的形态特征。     

丁酸梭菌产1,3-丙二醇的培养基优化

为提高丁酸梭菌(Clostridium butyricum)VPI 1718产1,3-丙二醇的能力,采用均匀设计试验和人工神经网络结合遗传算法对培养基进行优化,得到最优配方(g/L):废甘油70,酵母粉2.0,KH2PO4 0.6,K2HPO4 1.2,(NH4)2SO42.6,MgSO4 0.2;使用该培养基在5 L发酵罐中分批培养14 h丁酸梭菌后,1,3-丙二醇质量浓度为33.0g/L,转化率为55.3%,生产强度为2.36 g/(L·h),较优化前分别提高了32.5%,7.17%和33.3%.     

放线菌降解麦糟释放阿魏酸的发酵培养条件优化

应用均匀设计法设计和二次多项式逐步回归分析,对一株放线菌降解麦糟释放反式阿魏酸的发酵培养条件进行优化.由实验得出最优发酵培养条件:发酵时间为120 h,温度为28℃,摇瓶转速为220 r.min-1,装液量为30 mL,接种量为1 mL,初始pH值为8.0.然后,优化发酵培养基的碳源和氮源配方:麦糟质量浓度为120 g.L-1,麦糟粒径为0.054 mm.在此基础上,反式阿魏酸的最高释放率为25.38%,比发酵培养工艺优化前提高152.0%,而重要的是,放线菌利用麦糟释放阿魏酸的发酵培养基中不需要另外加入酵母粉.     

红曲霉液态发酵多糖工艺条件的优化

研究了红曲霉产多糖的液态发酵条件,得出优化后的培养基组成为:蔗糖45 g/L,酵母粉4.5 g/L,KH2PO4·3H2O 3.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.85 g/L.通过单因素实验和正交试验,得到红曲霉N产多糖的优化发酵工艺条件为:种龄30 h,接种量7.5%,发酵培养基初始pH 5.75,装液量162.5mL/1 000 mL三角瓶,发酵时间84 h.在此条件下,红曲霉液态发酵的多糖质量浓度达999.8 mg/L,比优化前的684.2 mg/L提高46.1%。     

蛹虫草纤溶酶液体发酵条件的优化

在发现蛹虫草具有纤溶酶活性的基础上,对蛹虫草产纤溶酶的液体发酵条件进行了优化,以期获得最佳的产酶条件。研究结果表明,蛹虫草纤溶酶的最优培养基组成是：以20 g/L可溶性淀粉为碳源,10 g/L酵母粉为氮源,Mg2＋浓度为7 mmol/L;最适发酵初始pH值为6;最适发酵时间为4 d。     

产转糖基β半乳糖苷酶菌株F3的鉴定 产酶条件及转糖基活性研究

菌株F3从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶(β-galactosidase) 的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析,菌株F3被鉴定为扩张青霉(Penicillum expansum)。通过单因子试验和正交试验,对菌株F3产生转糖基β-半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2%、酵母粉1%、蛋白胨1.5%、氯化钠0.3%。在初始pH 6.0,28?℃培养40?h时,其产酶量为2?245.2?U/L, 比优化前提高约3倍。菌株F3产生的转糖基β 半乳糖苷酶以pH 4.5缓冲液配制的30%乳糖为底物,50?℃反应24?h,低聚半乳糖产量为30.6%,其中80%以上为三糖。
     

氧化葡萄糖酸杆菌驯化选育及其产二羟丙酮

通过梯度增加种子培养基中甘油浓度驯化氧化葡萄糖酸杆菌（Cluconobater oxydans）,有效地提高了该菌对甘油的耐受性,菌株产二羟丙酮水平比驯化前提高了29%,在此基础上,采用单因素试验,对其发酵工艺进行优化。考察甘油质量浓度、酵母膏质量浓度、CaCO₃质量浓度、接种量对发酵的影响,结果显示最佳工艺条件为:甘油质量浓度为60 g/L,酵母膏质量浓度为5 g/L,CaCO₃质量浓度为10 g/L,接种量4%,在此条件下,经72 h摇瓶发酵甘油转化率达96%,二羟丙酮产量可达57.4 g/L,7.5 L发酵罐分批发酵54 h时甘油转化率达97%,二羟丙酮产量可达58.2 g/L。     

小麦内生多黏类芽孢杆菌hu-4产β-1,3-葡聚糖酶发酵工艺研究

对产β-1,3-葡聚糖酶小麦内生多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus Polymyxa)hu-4的产酶工艺进行了研究,通过正交实验建立和优化了hu-4菌株的发酵产酶培养基,确立了最佳发酵工艺.结果表明,以蛋白胨1.8%,酵母膏0.6%,玉米浆1.2%,酵母葡聚糖0.5%,矿质元素混合溶液0.5%为其最佳发酵培养基构成,pH值7.0;在温度32℃,转速200r/min,接种量2%的工艺条件下,发酵周期为36～38h,产酶效果较好.