Notch和Wnt信号通路联合对雏鸡听觉毛细胞再生的影响

哺乳类听觉毛细胞(hair cell,HC)损伤后无法再生,鸟类听觉毛细胞损伤后可以再生,研究鸟类毛细胞再生机制将会为研究哺乳动物毛细胞再生提供理论依据.本文选取出生后7d的小鸡作为动物模型,对小鸡基底乳突(basilar papilla,BP)进行体外培养,研究鸟类基底乳突毛细胞再生过程中Notch和Wnt信号通路的作用.研究结果表明:Wnt(Wnt/β-catenin)信号通路与Notch信号通路都对毛细胞的再生作用显著,新生的毛细胞主要来源于支持细胞(supporting cell,SC);抑制Notch信号通路会促进支持细胞转分化变成毛细胞,这个过程会消耗大量的支持细胞,毛细胞的正常功能离不开支持细胞的营养和支撑,支持细胞的过度消耗对长远再生是不可取的;Wnt通路的激动可以促进支持细胞的增殖.本文联合2种信号通路,同时抑制Notch信号通路、激动Wnt信号通路,使大量支持细胞转分化形成毛细胞并不断促进支持细胞的增殖,使毛细胞的再生效果达到最佳状态.     

FEZF1在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达及临床意义

本文旨在探究FEZF1蛋白在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达和其临床意义.通过免疫组化实验和Western Blot实验以及细胞实验,发现FEZF1在结直肠癌组织中低表达,并且其表达与肿瘤淋巴结转移(tumor node metastasis,TNM)分期具有显著相关性,在FEZF1低表达时,RKO细胞增殖和迁移能力提高,FEZF1高表达时RKO细胞增殖能力减弱.本研究证明了FEZF1是结直肠癌中的一个低表达蛋白,其表达与结直肠组织癌变的发生、发展相关,并且FEZF1会抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移.     

藻蓝色素蛋白通过调控miR-642a-5p抑制LTEP-a2细胞的增殖和迁移

研究藻蓝色素蛋白抑制非小细胞肺癌LTEP-a2体外增殖迁移的机制.以LTEP-a2细胞为模型,采用高通量miRNA转录组学对藻蓝蛋白处理后细胞中差异表达的miRNA进行了筛选;对筛选出的差异miRNA,利用体外转染mimics的方法对细胞的增殖、迁移能力进行验证.研究结果显示,藻蓝蛋白处理LTEP-a2细胞后能够显著增加细胞内miR-642a-5p的表达水平;过表达miR-642a-5p能够显著抑制细胞的体外增殖、迁移能力;此外,藻蓝蛋白可以通过上调miR-642a-5p表达抑制核受体NF-κB信号通路,降低蛋白磷酸化水平,进而抑制LTEP-a2细胞的增殖迁移能力.研究能够为藻蓝色素蛋白的应用以及非小细胞肺癌的治疗提供一定的理论基础.      

Wnt信号通路与干细胞定向分化

Wnt信号通路在胚胎发育过程中参与背腹轴的形成、细胞极性的建立以及决定细胞命运.利用干细胞定向分化模型可在体外培养条件下探索Wnt信号通路在哺乳动物早期胚胎发育过程中的分子机理,了解其信号网络对干细胞定向分化中各个事件的调控机制.本文通过综合近期Wnt信号通路的研究,阐述经典Wnt信号通路(Canonical Wnt signaling pathway)在干细胞定向分化中的作用.     

IRS1在藻蓝蛋白介导的H460细胞增殖和迁移调控中的作用

藻蓝蛋白来源于海洋藻类,是我国认可的食品着色剂和功能型食品．初期研究表明,藻蓝蛋白处理能抑制人类非小细胞肺癌系H460的体外增殖能力和迁移能力,使得其体外集落形成能力减弱．通过转录组学测序分析进一步探究具体作用机制,从藻蓝蛋白处理前后发生显著变化的基因中,筛选出了一个藻蓝蛋白处理后发生显著下调的基因,即胰岛素受体底物1（irs1）,并通过体外转染siRNA的方法抑制IRS1的表达,来研究其对非小细胞肺癌系H460的增殖和迁移能力的影响．采用MTT法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期分布．结果表明,下调IRS1的表达后,与对照组相比,细胞的生长速率降低,迁移能力、集落形成能力受到抑制,同时使细胞周期被阻滞到G1期．PI3K-AKT信号通路研究表明,藻蓝蛋白处理使得PI3K-AKT信号通路活性受到抑制,下调IRS1的表达使得PI3K-AKT信号通路部分蛋白表达也下调,通路活性受到一定程度抑制．本研究结果表明,藻蓝蛋白抑制非小细胞肺癌系H460体外活性功能的机制,可能与IRS1的表达和PI3K-AKT信号通路的活性有关,这为藻蓝蛋白的调控机制提供了有力的理论基础．      

Ezrin蛋白对施旺细胞增殖和迁移的影响

施旺细胞参与髓鞘的形成与神经损伤后再生，涉及细胞的增殖和迁移能力。Ezrin蛋白对施旺细胞增殖和迁移的调控机制尚不明确。本文在RSC96细胞中对Ezrin基因干扰和过表达，结合qRT-PCR技术、MMT法、western印迹法和细胞划痕实验，检测Ezrin表达量的变化对RSC96细胞增殖和迁移能力的影响。结果显示Ezrin表达下调能够显著抑制RSC96细胞的增殖和迁移能力，过表达Ezrin则不影响RSC96细胞增殖能力但明显提高其迁移能力。此外，利用Y27632抑制剂降低Ezrin的Thr567磷酸化水平，同样不影响RSC96细胞增殖，但显著抑制其迁移能力。另外，Ezrin表达下调或降低Ezrin的Thr567磷酸化，能抑制PI3K、Akt及ERK的活性。以上结果提示，Ezrin活化激活PI3K/Akt与MAPK/ERK信号通路，对施旺细胞增殖和迁移能力具有促进作用。     

福建大头蛙抗癌多肽FJ-2945抗肿瘤活性研究

探索本课题组自主发现的天然抗肿瘤多肽FJ-2945对肝癌细胞Hep3b增殖、迁移的影响并初步明确其作用机制.通过CCK8与RTCA实验检测FJ-2945对细胞增殖能力的影响;采用Transwell与划痕实验分析FJ-2945对于Hep3b迁移能力的影响;利用流式细胞分析法检测FJ-2945对Hep3b细胞周期的影响;最后通过qRT-PCR与免疫印迹实验检测FJ-2945对Hep3b细胞增殖、迁移相关因子在转录水平与蛋白水平的影响.与对照组相比,FJ-2945显著抑制Hep3b细胞的增殖与迁移能力,并促进Hep3b细胞凋亡.实验组中的Skp2蛋白含量显著降低,最终抑制Hep3b细胞增殖与迁移能力.由此说明多肽FJ-2945可以作为潜在的药物,通过靶向Skp2抑制肝癌细胞Hep3b增殖、迁移等过程,发挥抗肿瘤作用.     

RASA1通过调控Ras-MAPK通路抑制滋养细胞的增殖迁移功能

目的:探索RASA1对滋养细胞HTR-8/Svneo功能的调控作用及机制.方法:收集不明原因复发性流产(URSA)患者胚胎绒毛组织.Western blot检测绒毛组织及HTR-8/Svneo细胞中RASA1表达水平,以及Ras-MAPK通路中关键蛋白Ras活化和p38 MAPK磷酸化水平.CCK-8及划痕实验检测HTR-8/SVneo细胞的增殖及迁移能力.结果:RASA1在URSA患者绒毛组织中显著高表达;RASA1高表达可以下调HTR-8/SVneo细胞Ras活化及p38 MAPK磷酸化;RASA1高表达可以抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖及迁移能力.P38/MAPK抑制剂SB203580对RASA1下调激活Ras-MAPK通路及HTR-8/SVneo细胞增殖迁移具有逆转作用.结论:RASA1在URSA患者绒毛组织中表达增高.HTR-8/SVneo细胞中,RASA1通过调控Ras-MAPK通路进而抑制细胞的增殖迁移能力.     

肥大细胞调控IDO诱导的肺癌细胞转移

建立了小鼠肥大细胞体外诱导体系。探究肥大细胞对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。Transwell迁移和侵袭实验检测了与肥大细胞共培养后的细胞2LL侵袭转移能力变化。实验结果表明:肥大细胞能够抑制IDO诱导的细胞2LL的侵袭转移能力。生物信息学分析发现基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)能够抑制促肿瘤转移的基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)以及基质金属蛋白酶-9(MMP9)的表达。Western blot结果表明肥大细胞通过抑制STAT3磷酸化而减少IDO的表达;并通过TIMP1信号通路抑制MMP2、MMP9和VEGF的表达。这些结果表明肥大细胞通过抑制STAT3信号通路磷酸化调控IDO表达和抑制下游TIMP1、MMP2、MMP9信号通路抑制细胞2LL转移能力。     

miR-194-5p通过Wnt5a抑制肝星状细胞活化

为研究miR-194-5p对肝星状细胞(HSCs)活化的影响及作用机制,采用CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、Transwell、划痕、集落形成实验和RT-qPCR、Western blot分别检测miR-194-5p对LX-2细胞生物学特性、细胞活化标志物和靶基因表达的影响,并用生物信息学和双荧光素酶报告实验确定miR-194-5p靶基因.结果显示：miR-194-5p抑制LX-2细胞增殖、细胞集落形成、迁移能力以及LX-2细胞中活化标志物的表达,促进LX-2细胞衰老;Wnt5a为miR-194-5p的直接靶基因.研究表明miR-194-5p通过靶定Wnt5a抑制LX-2细胞活化,miR-194-5p和Wnt5a可能是治疗肝纤维化新的靶点.     

木犀草素对脉络膜恶性黑色素瘤细胞的影响

为探讨木犀草素调节Wnt/β-catenin信号通路对人脉络膜恶性黑色素瘤细胞(MuM-2C)凋亡、迁移和侵袭的影响,采用CCK-8法测定0,5,10,15,20,25μmol/L浓度木犀草素处理24 h后的MuM-2C活力,以筛选合适的药物作用浓度.将体外培养的MuM-2C随机分为3组：对照组、木犀草素组及木犀草素+氯化锂组,木犀草素组以15μmol/L木犀草素处理,木犀草素+氯化锂组以15μmol/L木犀草素和10μmol/L的氯化锂联合处理.采用流式细胞技术和Hoechst 33258染色检测MuM-2C的凋亡情况,采用划痕实验和Transwell实验检测各组MuM-2C的迁移、侵袭情况,采用免疫荧光检测各组MuM-2C中凋亡蛋白BAX与BCL-2表达,采用免疫印记检测各组MuM-2C中EMT标志蛋白(E-cadherin, N-cadherin, Vimentin)和Wnt/β-catenin信号相关蛋白(Wnt1,β-catenin)表达,结果表明：不同剂量木犀草素均可抑制MuM-2C生长,并在一定范围内随剂量升高而作用增强;与对照组比较,木犀草素组细胞核形态固缩而大小不一,...     

ARID1A对结肠癌细胞迁移的调控作用

为研究ARID1A对结肠癌细胞迁移的影响,并进一步分析ARID1A调控细胞迁移的机制,本文通过在结肠癌细胞系HCT116中过表达和干扰ARID1A基因,观察细胞迁移率的变化,通过比较HCT116与正常组织中的基因表达数据,筛选出ARID1A共表达基因,进行GO和KEGG分析.结果显示,过表达ARID1A后,细胞迁移率降低,而干扰ARID1A则与之相反.在1212个相关系数大于0.9的ARID1A共表达基因中,仅有4个基因参与细胞增殖,29个基因参与细胞迁移,涉及趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用等多个信号通路.以上结果说明ARID1A抑制细胞迁移,并可能通过多个信号通路调控细胞迁移.     

LncRNA SIL沉默促进A549细胞增殖和迁移

研究了lncRNA SIL与肺纤维化中肺泡上皮细胞的增殖和迁移之间的关系.设计小干扰RNA沉默内源性lncRNA SIL的表达,通过RT-PCR、MTT、Western blot、细胞损伤修复实验及Transwell实验研究沉默后细胞的增殖和迁移变化.MTT结果显示:沉默lncRNA SIL后细胞的增殖能力与对照组相比显著增加,细胞增殖相关蛋白PCNA和Ki67的表达量也显著增加.细胞损伤修复实验和Transwell实验结果都显示,沉默lncRNA SIL后细胞的迁移能力与对照组相比显著增加.上述结果说明lncRNA SIL沉默后能够促进肺泡上皮细胞A549的增殖和迁移,lncRNA SIL很可能是潜在的肺纤维化的抑制因子.     

靶向Wnt/β-catenin信号通路抑制剂研究进展

Wnt/β-catenin信号通路高度复杂,与Notch通路、Hedgehog通路等都有密切联系,参与机体胚胎发育、调控生物体细胞增殖、代谢等多个方面.研究发现,该信号通路的异常激活与肿瘤密切相关.据汤森路透数据库统计发现,截至2014-04-24,共报道Wnt信号通路抑制剂228个,主要分为受体抑制剂和胞内小分子抑制剂等.本文综述了Wnt/β-catenin信号通路抑制剂及其调控机制,旨在为肿瘤预防与治疗提供新素材.     

Repressor activity of Headless/Tcf3 is essential for vertebrate head formation

The vertebrate organizer can induce a complete body axis when transplanted to the ventral side of a host embryo by virtue of its distinct head and trunk inducing properties. Wingless/Wnt antagonists secreted by the organizer have been identified as head inducers. Their ectopic expression can promote head formation, whereas ectopic activation of Wnt signalling during early gastrulation blocks head formation. These observations suggest that the ability of head inducers to inhibit Wnt signalling during formation of anterior structures is what distinguishes them from trunk inducers that permit the operation of posteriorizing Wnt signals. Here we describe the zebrafish headless (hdl) mutant and show that its severe head defects are due to a mutation in T-cell factor-3 (Tcf3), a member of the Tcf/Lef family. Loss of Tcf3 function in the hdl mutant reveals that hdl represses Wnt target genes. We provide genetic evidence that a component of the Wnt signalling pathway is essential in vertebrate head formation and patterning.     

Wnt signalling in stem cells and cancer

The canonical Wnt cascade has emerged as a critical regulator of stem cells. In many tissues, activation of Wnt signalling has also been associated with cancer. This has raised the possibility that the tightly regulated self-renewal mediated by Wnt signalling in stem and progenitor cells is subverted in cancer cells to allow malignant proliferation. Insights gained from understanding how the Wnt pathway is integrally involved in both stem cell and cancer cell maintenance and growth in the intestinal, epidermal and haematopoietic systems may serve as a paradigm for understanding the dual nature of self-renewal signals.