冬虫夏草无性型确证及其新的生物学特征研究

冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)由于被过渡挖采而濒临灭绝.人工培育其无性型作为冬虫夏草野生资源的替代品具有广阔的市场.由于已经报道的冬虫夏草无性型很多,确定冬虫夏草的真正无性型对于打击假冒伪劣产品和规范冬虫夏草市场非常关键.作者对采自迪庆藏族自治州的冬虫夏草子实体进行了微循环产孢研究,利用真实的产孢图片作为证据证明中国被毛孢(Hirsutella sinensis)是冬虫夏草菌的真正无性型;同时利用3株子实体及其来源的无性型菌株作为材料,基于ITS nrDNA区域的系统发育分析在此验证了中国被毛孢是冬虫夏草菌的真正无性型.此外,作者新报道了冬虫夏草的子座生长速率和子囊孢子生物量等新的生物学特征.     

西藏冬虫夏草无性型5.8S rDNA,ITS间区系统发育分析

 采用相对较低的培养温度(5~12℃),从西藏那曲当年产风干冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]分离得到菌株C21,综合其菌丝形态学特征及5.8S rDNA和ITS间区的系统发育分析结果,证实菌株C21为冬虫夏草菌的无性型,即中国被毛孢(Hirsutella sinensis).     

奇特的冬虫夏草

冬虫夏草又名虫草、冬虫草、夏草冬虫、春虫夏草等,是子囊虫草属的总称,在分类上属于真菌界、真菌门、子囊菌亚门、子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、虫草属。冬虫夏草是麦角菌科冬虫夏草菌菌丝侵入鳞翅目、蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾幼虫体内后形成的真菌和虫尸的复合体,由于真菌向外伸     

茯砖茶“金花”菌生长条件研究

茯砖茶“金花”菌谢瓦氏曲霉间型变种生长的pH值范围在pH3—pH6,最适生长为pH5:最高生长温度为38℃,最适生长温度为30℃,子囊孢子和分生孢子两种单孢子萌发率接近,前者为17％,后者为18.5％,两种单孢菌落特征一致,长势一致,均能产子囊孢子和分生孢子。孢子的有性型和无性型在特定条件下可以互相转化。该菌为同宗结合。     

一株绿僵菌的分离鉴定及对桃小食心虫的致病力研究

从山西临汾襄汾景毛乡果园罹病的桃小食心虫Carposina sasakii(Matsumura)(Lepidoptera:Carposini-dae)幼虫虫尸中分离纯化获得一株新菌株,命名为TSL06.通过对该菌株的培养性状、光学显微和扫描电镜下的形态特征观察,以及ITS基因序列分析,鉴定出TSL06菌株为绿僵菌属Metarhizium Sorokin的金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae(Metsch.)Sorokin.用该菌株的5种浓度孢子悬液对桃小食心虫幼虫进行毒力试验,结果表明,浓度为1.2×109孢子/mL的孢子悬液对桃小食心虫幼虫的校正致死率最高,达到86.08%.     

石榴、芋头、甘薯寄主的甘薯长喙壳菌形态学研究

对来自云南的以石榴,甘薯,芋头为寄主的甘薯长喙壳病菌在有性时代(子囊壳,子囊孢子),无性时代(厚垣孢子,桶状分生孢子,圆柱形分生孢子)进行观察、测量.结果发现来自3个寄主的病菌无性时代的厚垣孢子,桶状分生孢子,圆柱形分生孢子无显著差异;有性时代的子囊壳,子囊孢子形态均较为一致.但在子囊壳喙长上,来自石榴,芋头的菌株一致,而来自甘薯的菌株明显长于石榴和芋头的菌株,存在显著性差异.     

三种替代冬虫夏草发酵菌粉的营养成分和活性成分的比较研究

为评价三种替代冬虫夏草发酵菌粉的应用价值,对虫草头孢菌粉、蝙蝠蛾拟青霉菌粉及虫草被孢菌粉的主要活性成分和营养成分进行了比较分析.结果表明:蝙蝠蛾拟青霉菌粉总蛋白和粗纤维含量最高,虫草被孢菌粉碳水化合物含量最高;虫草头孢菌粉胞苷含量最高,3个发酵菌粉中均未检出虫草素和肌苷;虫草被孢菌粉多糖中葡萄糖含量明显低于其他菌粉,虫草头孢菌粉多糖分子量最高,虫草被孢菌粉和蝙蝠蛾拟青霉菌粉多糖的分子量差异不大.与文献报道的天然冬虫夏草的活性成分和营养成分进行比较,发现三种替代冬虫夏草发酵菌粉在腺苷、胞苷含量上均高于天然冬虫夏草.这些结果揭示三种替代冬虫夏草发酵菌粉在功效上有差异,并且三种菌粉在某些功效上要高于天然冬虫夏草.     

工业化生产的冬虫夏草及其制品

冬虫夏草也叫虫草、假虫草。它是一种寄生在身体很像蚕儿(蝙蝠蛾)的鳞翅目幼虫体上的子囊菌。该菌在幼虫生长的早期侵入体内蔓延,以至最后夺去幼虫生命。冬季,土内只有死亡的幼虫,直到次年夏季气候温暖潮湿时,它才由幼虫的头部长出子实体,露出土面,状似野草。长出土面的棒状子实体内生有像植物种子的子囊孢子,条件适宜它就又会寄生虫体成为冬虫夏草。     

用线粒体Cytb基因序列探讨冬虫夏草寄主蝠蛾的系统进化关系

为探讨冬虫夏草寄主蝠蛾种属间的系统进化关系,采用CTAB法分别从18个冬虫夏草居群的虫草虫体头部和2种寄主蝠蛾中提取基因组DNA,PCR扩增获得冬虫夏草寄主线粒体Cytb基因片段序列.结合GenBank中的蝙蝠蛾科24种冬虫夏草寄主的同源序列,构建NJ系统树.结果表明,双栉蝠蛾属(Bipectilus)先于蝠蛾属(Hepialus)和类蝠蛾属(Hepialiscus)分化;蝠蛾属的冬虫夏草寄主种类众多形态各异,且均有特定的地理分布,蝠蛾属的种间遗传分化也较明显,蝠蛾属可能是多系起源;Cytb基因序列在冬虫夏草寄主蝠蛾种属间存在较丰富的变异,在蝠蛾属中除草地蝠蛾和金沙蝠蛾的该段序列完全一致外,其他种类蝠蛾种间变异率为0.23%—9.24%,Cytb基因序列可用于冬虫夏草寄主昆虫种的鉴定,但有必要获取更多种类的寄主昆虫来进一步验证.通过对冬虫夏草虫体头部提取的DNA进行PCR扩增获得其寄主蝠蛾Cytb基因序列的方法准确有效,有助于进一步获取更多的基因序列对更多的冬虫夏草居群和寄主种类进行系统发育、居群遗传结构及菌虫相互关系等研究.     

白僵菌871菌株毒理及其防治茶丽纹象甲

研究白僵菌 871菌株对茶丽纹象甲的致病机理 ,幼虫是孢子萌发后直接侵染体壁、气门、节间膜等 ;成虫则是大量孢子通过吞食进入体内萌发侵染虫体 ,少量萌发孢子通过体壁、气门等侵染虫体 ,侵染发病后形成白色僵尸。它对茶丽纹象甲幼虫、成虫均有极强的致病力 ,室内试验处理罹病率达 90 %以上 ,其侵染速率与温度呈正相关 ,即温度高 ,侵染速率快。用该菌防治茶丽纹象甲幼虫、蛹、成虫 ,面积 2 0 0 0 ha,防效达 6 8.2 % -96 .3% ,平均防效 81.8%。     

土木香内生真菌YIGZ-3抗菌活性及菌种鉴定

采用组织分离法从药用植物土木香根、茎和叶片中分离出32株内生真菌,通过纸片扩散法测定20株土木香内生真菌,筛选出1株具有较强抑菌活性的菌株,命名为YIGZ-3.用薄层层析法（TLC）法和高效液相色谱法（HPLC）法检测其发酵液中的土木香内脂,通过形态学特征观察和rRNA基因内转录间隔区（ITS）序列分析对菌株进行鉴定.结果显示：菌株YIGZ-3对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念球菌均有较强的抑菌活性,其发酵液中检测到与土木香内脂相似的化合物,根据真菌形态特征和ITS序列同源性鉴定表明菌株YIGZ-3为塔宾曲霉菌（Aspergillus tubingensis）.     

新疆羊肚菌rDNA的ITS序列分析

根据生境和形态学特征与大型真菌图鉴对照,从形体上挑选了4个羊肚菌子实体（其中3个来自哈密巴里坤,1个来自乌鲁木齐南山）,同时从四川绵阳某研究所购得一株高羊肚菌菌种做为实验阳性对照,为了确定收集的羊肚菌分类学地位,采用PCR技术,以rDNA—ITS为分子指标,对子实体和菌丝进行了ITS序列测定与分析,结合系统进化树确定品种归属。     

分子标记技术在白木香遗传变异研究中的应用

采用简单重复序列区间扩增(ISSR)技术和核糖体RNA基因(rDNA)转录间隔区(ITS)序列分析技术, 对不同地区白木香的遗传变异、亲缘关系及分子鉴定进行研究. 共筛选出7条ISSR引物, 扩增得到80条带, 其中多态性条带的比率是58.8％. 白木香9个居群之间的遗传距离是0.0733～0.4213, 居群间遗传差异不大; 筛选出的引物IS-8可以进行白木香种内和种间的鉴别. ITS序列在白木香种内的变异很小, 只有6个变异位点, 种内遗传距离为0.0％～1.1％. 根据白木香ITS的序列特征可准确鉴别白木香与近缘种. 两种分子标记方法得到的UPGMA聚类图不一致, 但大致趋势相同, 说明ISSR标记与ITS序列分析均可用于白木香遗传变异及亲缘关系的研究, 但ITS序列分析技术在种内遗传变异研究的分辨力不及ISSR高.     

内蒙古蚋类rDNA-ITS1序列分析

对内蒙古2属4亚属7蚋种rDNA-ITS1长度及序列变异进行分析。陆氏后克蚋和长鞭纺蚋的ITS1长340nt左右,宽跗副布蚋、辽宁蚋、内蒙蚋、纳克蚋和红头厌蚋的ITS1长约100nt。陆氏后克蚋的ITS1长度,可作为将后克蚋属归为蚋族的一个佐证。宽跗副布蚋的ITS1序列与近来LaRue等提出的蚋类ITS1存在由8个短保守区构成的39nt核心的这一结论仅部分相符,提示该结论的适用范围有一定限制。     

中华绒螯蟹（Eriocheir japonica sinensis）内转录间隔区1（ITS1）大小变异的研究

在对中华绒螯蟹（Eriocheir japonica sinensis）（又称河蟹）核糖体DNA内转录间隔区1（ITS1）进行研究时，由于在软甲亚纲中还没有已知序列和5.8SrDNA 序列的报道，所以在设计引物时，主要参考了其它节肢动物的序列。用此引物对河蟹的ITS1 进行扩增，发现其个体内的ITS1如同其它一些无脊椎动物一样，存在大小变异。为了进一步确证这发现，首先将得到的所有扩增产物进行测序，然后再扩增出河蟹的整个ITS区并测序。通过所得序列的比较，发现河蟹个体内ITS1的大小变异是有引物错配而引起的赝相。为了检验这一理论的可靠性，该文在测出河蟹5.8SrDNA 序列的基础上，重新设计了引物，并再次扩增了河蟹的ITS1，然后对产物进行测序，最后再同上述结果进行比较；同事在改变扩增条件的情况下用原引物重新扩增ITS1，并检验其结果。最终证实河蟹个体内ITS1的大小变异是由引物错配而引起的赝相。该文同时还报道了中华绒螯蟹ITS1的序列。     

具有ACC脱氨酶活性的绞股蓝根际细菌的分离鉴定及其促生作用

为了筛选含ACC脱氨酶的根际促生细菌,以1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)为唯一氮源,从绞股蓝根际土壤中富集和分离ACC脱氨酶阳性细菌,利用α-丁酮酸测定法和CAS平板法分别检测其ACC脱氨酶活性和产嗜铁素能力,利用菌液培养接种法检测细菌的促生作用,最后通过生理生化试验和16SrRNA基因序列分析对所筛选的菌株进行鉴定.经富集筛选法从绞股蓝根际土壤中分离出9株ACC脱氨酶阳性细菌,它们均具有不同程度的ACC脱氨酶活性,其中3株细菌能产生嗜铁素.促生试验结果表明,7株ACC脱氨酶活性细菌对水稻幼苗根系的生长发育表现出不同程度的促生作用,其中菌株JDG127的促生作用最明显,与对照组相比,水稻幼苗的根长和根鲜重增长了约1.6倍.鉴定结果表明,9株细菌中1株属于单胞菌属(Stenotrophomonas),1株属于类芽胞杆菌属(Paenibacillus),1株属于芽孢杆菌属(Bacillus),2株属于肠杆菌属(Enterobacter),4株属于不动杆菌属(Acinetobacter),与ACC脱氨酶相比,铁载体对根际细菌的促生作用更明显.     

实验室条件下西藏冬虫夏草幼虫生理机制变化研究

为研究实验室条件下西藏冬虫夏草幼虫对温度、湿度、病害等条件的生理反应以及西藏冬虫夏草幼虫的食性情况,文章对西藏冬虫夏草幼虫的外部形态及其对温度和湿度的反应及食性等方面进行观察,并绘制出西藏冬虫夏草幼虫生长曲线。结果表明：①实验室中培养西藏冬虫夏草幼虫的最佳温度范围为12℃-14℃;②西藏冬虫夏草幼虫最喜啃食红萝卜,其次为土豆和莴笋;③西藏冬虫夏草幼虫对温度具有很高的敏感性,当温度达到20℃时,幼虫完全失去活动的能力,并且此时幼虫身体表面容易感染病菌。     

木霉属中国新记录种Trichoderma paratroviride

从山东保护地土壤中分离得到木霉菌Y15,结合ITS、tef1 α和形态学特征进行鉴定。 结果发现Y15菌株为近深绿木霉（Trichoderma paratroviride）。该菌株在PDA上菌落稠密,老熟后毡状,灰绿色;分生孢子梗主轴长,着生短的二次分枝,再次分枝少,分枝成对或轮生。瓶梗通常2~4个轮状排列,烧瓶形或锥形,直或弯曲;分生孢子亚球形至卵圆形,绿色,光滑。tef1 α序列与近深绿木霉模式菌株S489和S385序列同源性高达99%,在系统进化树中与其亲缘关系也最近。该种在国内首次报道和描述,为木霉属中国新记录种。     

酒鬼酒制曲车间产淀粉酶细菌筛选和系统发育

采用平板水解圈法对酒鬼酒制曲车间空气的细菌进行产淀粉酶活性筛选,运用基于16SrRNA基因序列的分析法对高酶活菌株进行系统发育分析.研究结果表明,65株受试菌株中,有24.6%的菌株(16株)淀粉水解酶活性呈阳性,其中有4株(JSM 2145008,JSM 2155001,JSM 2155017,JSM 2175012)产淀粉水解酶能力较强.基于16SrRNA基因序列的系统发育分析表明,这4个菌株分别属于细菌域3个大的系统发育类群中3个科的3个属.菌株JSM 2145008属于放线菌门微球菌科,与节杆菌属(Arthrobacter)的氧化节杆菌的系统发育关系最为密切,它们之间的16SrRNA基因序列相似性高达99.8%,且在系统进化树上形成一个稳定的亚分支;菌株JSM 2155001和JSM 2175012属于异常球菌——栖热菌群异常球菌科的异常球菌属(Deinococcus),分别与该属的大琼异常球菌和云威异常球菌系统发育关系最为密切(序列相似性分别为99.6%和99.9%);菌株JSM 2155017属于厚壁菌门芽孢杆菌科,与芽孢杆菌属(Bacillus)的同温层芽孢杆菌系统发育关系最为密切(序列相似性为100%),它们以极高的自展值支持(boostrap value,100%)在系统进化树上聚在一起.上述实验结果表明,酒鬼酒制曲车间空气源细菌中存在较高比例的产淀粉酶菌株,且这些菌株具有较高的类群多样性.