红豆树下胚轴再生体系建立及高效微体繁殖

以成熟红豆果为外植体,在新成熟红豆果外壳生长点处进行机械剪口破壳处理后,接种于经高压灭菌的种子胚芽诱导培养基WPM+6-BA4.44μmol/L+NAA0.54μmol/L+Su 3%+AC 0.15%+Ag 0.65%中,待种胚芽长至5~6 cm时,切取芽的顶部、中段分别作为扩大繁殖的繁殖体,余下的子叶部分采用机械处理方式诱导潜伏芽的形成.适宜下胚轴芽诱导培养基为WPM+6-BA 4.44μmol/L+NAA 0.54μmo儿+TDZ 0.05μmol/L+Su 3%+AC 0.1 5%+Ag 0.65%,芽诱导率约达80%;适宜不定芽诱导培养基为WPM+6-BA 4.44μmol/L+TDZ 0.05μmol/L+NAA 1.61μmol/L+KT 2.23μmol/L+Su 3%+AC 0.15%+Ag 0.65%;适宜壮苗培养基为WPM+6-BA2.22μnol/L+NAA 1.6lμmol/L+KT 2.23μmol/L+Su 3%+AC 0.15%+Ag 0.65%;适宜生根培养基为1/2WPM+IBA 4.92μmol/L+NAA 2.67μmol/L+Su 3%+AC 0.15%+Ag 0.65%.成功诱导下胚轴潜伏芽萌发并形成完整植株,为木本植物红豆树高效繁殖提供了一个新途径和有效方法.     

美洲商陆高频再生体系的建立

美洲商陆为商陆科多年生草本植物,在工业、农业和医药上具有很高的应用价值.本实验拟从外植体选择、激素组合、GA3和AgNO3等物质应用角度进行试验,分析各条件对愈伤组织诱导,不定芽分化、伸长以及不定根诱导等方面的影响,旨在构建美洲商陆稳定高效的再生体系.实验结果表明:愈伤组织诱导和不定芽分化的最适外植体为茎节;将无菌苗的上部经诱导培养基转接、壮苗后,再取茎节进行愈伤组织诱导和不定芽分化,可以显著提早不定芽分化、提高芽增殖系数;不定芽诱导分化最佳培养基为MS+6-BA(3.0 mg/L)+NAA(0.01 mg/L)+TDZ(0.02 mg/L),增殖系数达12.7;不定芽伸长的最佳培养基为MS+TDZ(0.02 mg/L)+6-BA(3.0 mg/L)+NAA(0.01 mg/L)+GA3(2.0 mg/L);生根最佳培养基为1/2MS+NAA(0.4 mg/L),生根率可达91.7%以上.AgNO3处理抑制了美洲商陆不定芽的分化.     

金叶复叶槭水培嫩枝组织培养体系研究

【目的】筛选基本培养基、增殖和生根培养基最佳激素组合,探索炼苗移栽方法,建立金叶复叶槭组织培养体系,为该树种优良种苗规模化生产提供新途径。【方法】以金叶复叶槭水培嫩枝为试材,通过单因子逐步筛选法,研究MS、WPM、B₅培养基对初代培养,6-BA、TDZ和NAA对增殖培养,IBA和NAA对生根培养,以及相对湿度对移栽成活的影响。【结果】MS和WPM诱导外植体腋芽萌发率显著高于B₅培养基,但MS培养基在促进新芽伸长生长方面优于WPM。6-BA、NAA与低浓度的TDZ联合使用可有效地提高不定芽增殖系数,在MS附加0.5 mg/L 6-BA、0.01 mg/L TDZ、0.06 mg/L NAA的增殖培养基中,每个外植体可增殖5.8个新芽。添加生长素可显著提高增殖芽生根率,添加IBA生根效果显著好于NAA,1/2 MS附加0.05 mg/L IBA即可使生根率达100%。85%的相对湿度条件下组培苗移栽成活率可达95%。【结论】适宜金叶复叶槭水培嫩枝组培快繁的基本培养基为MS培养基,最佳增殖培养基为MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.01 mg/L TDZ + 0.06 mg/L NAA;最佳生根培养基为1/2 MS + 0.05 mg/L IBA;金叶复叶槭组培苗对移栽基质要求不高,保湿是关键。     

碳源对不同产地香樟体细胞胚胎发生及植株再生的影响

【目的】 探究渗透调节物质种类及其不同浓度对香樟体细胞胚胎发生及植株再生的影响,为提高香樟体胚诱导率、优化体细胞胚胎发生体系奠定理论基础。【方法】 以7月初在湖南省郴州、长沙、娄底及怀化市采集的香樟(Cinnamomum camphora L.)的未成熟合子胚为试验材料,分析不同碳源种类、浓度及组合方式对香樟体胚诱导、芽萌发、生根等方面的影响。【结果】 适合香樟的体胚诱导培养基为MS+1.0 mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.3 mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+1.0 mg/L 链霉素+15 g/L 蔗糖+30 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂+700 mg/L水解酪蛋白;增殖培养基为MS+15 g/L 蔗糖+30 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂+700 mg/L 水解酪蛋白;芽萌发培养基为MS+0.1 mg/L 苯基噻二唑基脲(TDZ)+0.5 mg/L 萘乙酸(NAA)+0.1 mg/L 吲哚丁酸(IBA)+15 g/L 蔗糖+15 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂;生根培养基为MS+1.0 mg/L IBA+15 g/L 蔗糖+15 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂。【结论】 经过改良,添加15 g/L蔗糖和30 g/L山梨醇的组合碳源,香樟体胚的诱导率明显提高;添加15 g/L蔗糖和15 g/L山梨醇的组合碳源处理的新植株生根条数多、主根明显,生长状况更优。     

黑松丛生芽的诱导及植株再生

以黑松带子叶顶芽为外植体建立了包括丛生芽诱导、伸长和生根的植株再生体系。结果表明:培养基中激素的种类、浓度以及外植体年龄对丛生芽的诱导有较大影响。单独使用6-BA能诱导产生丛生芽,但数量少,生长慢,NAA与6-BA配合使用能取得更好的效果。在试验的所有组合中,4.0 mg/L 6-BA 0.05 mg/L NAA效果最佳。截取黑松外植体的最佳苗龄为22~28 d。已分化的丛生芽在无6-BA但附加0.1 mg/L NAA的改良GD培养基中伸长较明显,GA3不能促进黑松丛生芽的生长且有毒害作用。将伸长的丛生芽接种在附加0.2 mg/L NAA的1/2 WPM培养基上培养14 d再转移至无激素的1/2 WPM中,1个月后,生根率达23.3%。     

引种珙桐的组织培养研究

以引种珙桐一年生的茎段为外植体进行珙桐的组织培养,用不同种类消毒剂对外植体进行消毒,以筛选最佳消毒效果,即0.1%HgCl_2消毒15 min,存活率达到61.12%;通过对基本培养基的筛选,发现Woody Plant Medium(WPM)基本培养基最适于珙桐生长;诱导不定芽的最佳培养基为WPM+IBA 0.2 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+GA_3 0.5 mg/L,增殖系数为3.33.试验构建了用芽来繁殖不定芽的体系,但增殖系数有待提高,在组织过程中,褐化问题和组培苗的生根有待进一步研究.     

赤桉叶片的离体培养与植株再生

以无菌苗叶片为外植体进行了赤桉不定芽的诱导及植株再生。结果表明,在MS 0.8 mg/L BA 0.3 mg/L KT 0.05 mg/L NAA的培养基上,丛生芽诱导率为35.4%;附加0.8 mg/L BA 0.05 mg/L TDZ 0.1 mg/L NAA的MS培养基能促进赤桉不定芽的诱导,其诱导率达42.9%;暗培养10 d能促进不定芽的分化。当芽长至2~3 cm时,切下生长健壮的芽并接入生根培养基,生根率达100%,移栽成活率超过80%。     

TDZ促进花生外植体分化及基因转化

以花生成熟胚的上胚轴和胚叶为外植体，通过农杆菌介导转化Bt和CpTI双基因，在共培养基和诱导培养基中加入TDZ诱导不定芽和体细胞胚，实验证明，TDZ有明显促进花生外植体分化的作用，当诱导培养基组成为TDZ0．3mg/L NAA 0.4mg/L，诱导时间为28d，分化培养基为MS时采用TDZ发胚培养基萌发的轴外植体分化率最高，可达73％，GUS基因阳性率3．5％，当诱导培养基组成的TDZ0．2mg/L NAA0.4mg/L，诱导时间为21d，分化培养基为MS时水萌发种胚叶外植体分化率最高，达56％，GUS基因阳性率2．5％。     

常绿杨植株再生体系的建立

以水培常绿杨(Populus deltoides60/160×P.nigra'chile')枝条得到的叶柄为外植体,探讨了常绿杨植株再生的方法.结果表明:在MS BA0.3 mg/L NAA0.1 mg/L培养基上,不定芽的分化率最高,为82.5%;不定芽在MS BA0.2 mg/L NAA0.05 mg/L培养基上的继代增殖系数为7.2;在继代增殖培养基中添加0.4 mg/L GA3时,对不定芽的增殖和伸长有显著效果;在生根培养基1/2MS NAA0.05 mg/L上,生根率达到96.5%.     

白术胚轴和胚根直接分化不定芽的再生体系

为了建立白术Atractylodes macrocephala Koidz.通过胚轴、胚根外植体直接分化不定芽的高效离体再生体系,研究了外植体类型、植物生长调节剂种类及质量浓度对不定芽直接分化的影响.研究结果表明,以白术无菌苗的胚轴、胚根为外植体,在分化培养基上可直接诱导不定芽分化,其中胚轴不定芽分化率最高可达91.18%,每个外植体产生芽的数量最高可达13个;诱导不定芽分化的最佳培养基为MS(Murashige and Skoog)+ TDZ(thidiazuron)1.5 mg/L+ NAA(naphthylacetic acid)0.2 mg/L.将分化的不定芽培养于附加IBA(indol 3-butiric acid)0.5 mg/L的1/2 MS培养基中诱导生根,生根率达66.66%以上.本研究为药用植物白术的工厂化育苗和脱病毒以及利用植物基因工程技术进行品质改良提供了有效的再生途径.     

铁线莲‘朱卡’组织培养技术及再生体系的建立

【目的】以铁线莲‘朱卡’(Clematis ‘Julka’)的带芽茎段为起始材料,通过组织培养方法建立再生体系。【方法】利用腋芽诱导—不定芽增殖—生根和愈伤组织诱导—增殖—分化—生根两种途径,建立该品种的组织培养再生体系,形成铁线莲‘朱卡’完整植株。【结果】铁线莲‘朱卡’组织培养最适宜灭菌条件为质量分数10%次氯酸钠溶液灭菌12min;带芽茎段诱导腋芽最适培养基为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,不定芽增殖最适培养基为MS+IBA 0.20 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+GA₃ 0.2 mg/L;带芽茎段诱导愈伤组织最适培养基为MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,愈伤组织增殖最适培养基为MS+NAA 0.20 mg/L +6-BA 2.0 mg/L,愈伤组织分化最适培养基为MS+NAA 0.03 mg/L+6-BA 3.0 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.3 mg/L。【结论】首次用两种器官发生方法建立了稳定高效的铁线莲‘朱卡’再生体系。直接形成不定芽时增殖倍数可达5.52。诱导愈伤组织途径的器官发生中,愈伤组织分化率可达76.7%,分化不定芽平均数超过3。两种途径诱导生根率都在90%以上。     

抗松材线虫病马尾松体胚发生与植株再生条件的优化

【目的】为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)快速大规模繁殖,对抗性马尾松体细胞胚胎发生和植株再生条件进行优化。【方法】以抗病马尾松未成熟合子胚为材料,探讨胚性愈伤组织的诱导、增殖与维持、分化成熟以及萌发的合适培养条件,并对体细胞胚进行生根诱导,对再生植株进行壮苗培养以及驯化移栽。【结果】以LP为基本培养基,添加2.0 mg/L 2,4-D(二氯苯氧乙酸)和1.0 mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤),抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率最高达27.8%。在胚性愈伤组织增殖维持过程中,悬浮培养中的增殖系数和同步化程度都显著高于固体培养,且经过悬浮培养的细胞系分化能力更强。萌发过程中只有少量能顺利分化出根系,未能顺利分化出根的体胚于添加适量 IBA和 NAA的生根培养基中能够更好地生根。壮苗培养过程中,添加0.01 mg/L油菜素内酯有助于体胚苗的生长。体胚苗在驯化移栽时不同大小的苗移栽成活率相差较大,5 cm左右的体胚苗成活率最高达90.3%。【结论】生长素2,4-D和6-BA组合(2.0 mg/L和1.0 mg/L)对抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率较好; 悬浮培养后的细胞系更利于诱导体胚,适宜浓度的IBA和NAA(1.0 mg/L和0.2 mg/L)能够促进体胚苗根系生长。在壮苗培养基中添加适量油菜素内酯能够促进抗性马尾松再生植株的生长,待苗长至5 cm左右移栽较好。     

珙桐叶片的脱分化和分化诱导研究

研究了以濒危植物珙桐叶片作为外植体诱导愈伤组织及分化再生植株.结果表明:本实验中,诱导愈伤组织的最佳培养基为1/2MS+2.0 mg/L IBA+1.0 mg/L 6-BA;愈伤组织继代的最佳培养基为1/2MS+3.0 mg/L IBA+1.5 mg/L 6-BA最佳分化培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA+0.2 mg/L GA_3,芽分化率为6.2%;生根最佳培养基为1/2MS+0.4 mg/L IBA,生根率为60%.     

黑芝麻下胚轴离体培养的研究

以晋芝3号黑芝麻(Sesamum indicumDC)无菌苗的下胚轴作为外植体,诱导培养基以MS为基本培养基,添加2.0mg/L6-BA与(0.1mg/L,0.2 mg/L,0.3 mg/L,0.4 mg/L,0.5 mg/L)以及NAA(0.5 mg/L,1.0 mg/L,1.5 mg/L,2.0 mg/L),共9种组合;生根培养基以1/2MS为基本培养基,添加NAA(0.1 mg/L,0.3 mg/L,0.5 mg/L)以及0.1 mg/LNAA和0.1 mg/LIAA,共4种组合,旨在此培养基上诱导黑芝麻下胚轴产生愈伤组织并分化出再生植株。结果表明:在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA培养基上的再生诱导率最高,可达81.8%,并且可使部分下胚轴切段形态学上端形成芽;在1/2MS+0.1mg/L NAA培养基上,再生苗的生根率达100%。     

南丰蜜橘组织培养及植株再生

以南丰蜜橘种子无菌苗的子叶、上胚轴、茎端、下胚轴为材料,在不同激素配比的MS基本培养基上进行外植体筛选和诱导不定芽分化、继代及生根培养,确定了诱导植株再生的最佳外植体和最适条件:(1)诱导不定芽分化最好外植体为上胚轴,不定芽分化率达90%;(2)继代培养中最适激素配比为MS+0.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/LD-泛酸钙;(3)生根最适合培养基为MS/2+0.1 mg/L NAA.     

铁线莲‘Multi Blue’体细胞胚诱导和植株再生

以铁线莲品种‘Multi Blue’的茎尖为外植体,1/2MS为基本培养基,进行胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导及植株再生条件的选择。结果表明：茎尖外植体在1/2MS+TDZ(1.0 mg/L)+NAA(0.5 mg/L)+2 %蔗糖+0.7 %琼脂的固体培养基中培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤组织,经继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织;体细胞胚诱导以1/2MS+TDZ(0.2 mg/L)+IBA(0.1 mg/L)+ABA(0.3 mg/L)+CH(0.5 g/L)为佳,诱导率可达96 %;而适宜的体细胞胚萌发培养基为1/2MS+6-BA(0.2 mg/L)+IBA(0.05 mg/L)。体胚再生植株经驯化后,移 栽成活率可达80 %以上。     

铁线莲'Multi-Blue'体细胞胚诱导和植株再生

以铁线莲品种'Multi-Blue'的茎尖为外植体,1/2MS为基本培养基,进行胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导及植株再生条件的选择.结果表明:茎尖外植体在1/2MS+TDZ(1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)+2%蔗糖+0.7%琼脂的固体培养基中培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤组织,经继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织;体细胞胚诱导以1/2MS+TDZ(0.2mg/L)+IBA(0.1mg/L)+ABA(0.3mg/L)+CH(0.5g/L)为佳,诱导率可达96%;而适宜的体细胞胚萌发培养基为1/2MS+6-BA(0.2mg/L)+IBA(0.05mg/L).体胚再生植株经驯化后,移栽成活率可达80%以上.     

青钱柳离体胚的培养及快速繁殖

以青钱柳离体胚为材料,采用正交试验设计对影响其萌发、快速成苗的各种因素进行研究,并进行了诱导增殖试验.结果表明,基本培养基种类是影响青钱柳离体胚萌发和成苗最关键的因素.离体胚萌发的最佳培养基组合为WPM GA3(10 mg/L) 蔗糖(30 g/L),萌发率可达100%;适宜成苗的培养基组合是WPM GA3(5 mg/L) 麦芽糖(30 g/L),培养60 d的无菌苗移栽成活率为100%;最适的增殖培养基为WPM 6-BA(0.5 mg/L),平均增殖系数为3.45.     

文心兰丛生芽继代增殖关键技术研究

为建立文心兰(Oncidium)丛生芽工厂化继代增殖途径技术体系,对培养基、激素种类、激素浓度配比和继代增殖次数等影响丛生芽增殖增殖分化的关键因子进行比较研究。结果表明:以文心兰花梗为外植体,添加2.5~3.0 mg/L TDZ与0.2~0.4 mg/L NAA组合和1g/L活性炭和亚硫酸钠后诱导丛生芽分化丛生芽或原球茎效果好。TDZ与NAA浓度比值为8.93或8.75时,丛生芽诱导分化率最高,为90.0%,增殖系数为6.0~7.4;丛生芽分化途径最佳继代增殖培养基为:1/2MS+10 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+1g/LAC+1g亚硫酸钠+2.8 mg/LTDZ+0.32 mg/LNAA;经5-6代继代增殖培养后,丛生芽变异率仅为0.1%。     

福建山樱花的组织培养及植株再生

以春季萌发的福建山樱花嫩枝为外植体诱导丛生芽。在 1 /4MS +BA1 .0mg/L +IBA0 .0 1mg/L的培养基上 ,其丛生芽诱导率达 87.5 % ;在继代培养中选择MS +BA1 .0mg/L +IBA0 .1mg/L +GA30 .3mg/L或KT1 .0mg/L +NAA0 .1mg/L +GA30 .3mg/L培养基 ,不定芽增殖较快。赤霉素对其不定芽的伸长有明显效果 ,当芽伸长至 3～ 4cm时 ,切下置于生根培养基 1 /2MS +NAA1 .0mg/L +IBA1 .0mg/L +BA0 .75mg/L中 ,生根率达 90 %以上 ,移栽成活率达 95 %。