血清中天然细胞毒因子的分离

血清对异种细胞或同种变异胞细的损伤效应在高等动物中是普遍存在的.早在六十年代初期即有人认为血清对异种细胞的损伤效应是由血清中天然存在的细胞溶解因子所引起的,并试图从血清中提取这种因子.近年来,从正常或经免疫激活动物的血清或体液中提取细胞毒因子的工作进展很快,对其性质和功能已有了多方面的研究.然而目前尚难确认其究竟属于何种物质,是同一类物质在不同实验条件下的不同表现,还是不同物质具有类似的细胞毒作用.本文报导家禽血清中天然细胞毒因子的分离,探讨它的组成与功能,初步证实提纯的细胞毒效应基团可能是一类不饱和脂肪酸,对小鼠HAC腹水癌细胞具有细胞毒作用.     

溴代香豆素对胃癌细胞的细胞毒活性与致死机制研究

为探究合成化合物溴代香豆素的生物活性,将该化合物作用于胃癌细胞进行了体外研究.本研究分别采用磺酰罗丹明染色法和生长曲线法研究了药物的细胞毒活性和癌细胞的致死过程.以彗星电泳技术和瑞士—吉姆萨染色法观察了化合物对细胞核形态变化和核酸损伤效应,最后以琼脂糖凝胶电泳法检测了药物对细胞总DNA的影响.结果显示,溴代香豆素对胃癌细胞具有显著的细胞毒活性,其IC50为21.56μg/m L.药物对细胞的增殖抑制效应和致死效应都具有显著的时间—剂量依赖性.药物作用癌细胞后可引起细胞核形态变化和染色质凝集断裂,并损伤细胞DNA,在电泳中呈梯度降解状态.结果表明,溴代香豆素对胃癌细胞的生长与增殖具有显著的细胞毒活性,并能诱导胃癌细胞发生凋亡.     

山奈素与牛血清白蛋白的相互作用研究

血清白蛋白在哺乳动物体内起着重要的贮存和运输作用,它能与多种内源和外源性物质结合[1].研究药物特别是中药活性组分与血清白蛋白相互作用,探讨作用机理,为中药的发展与更有效的推广应用提供可靠的理论依据;通过研究各种条件对血清白蛋白的影响,为合理给药提供理论依据[2].本文利用光谱法研究了溶液体系中山奈素与牛血清白蛋白的相互作用,初步探讨了山奈素与牛血清白蛋白两者之间的相互作用.     

哺乳动物细胞适应无血清培养的改造

哺乳动物细胞是目前最成功的医学制品表达宿主细胞.但在大规模培养中哺乳动物细胞会面临着对无血清培养基的适应性差、贴壁性差以及细胞凋亡等很多难题.对哺乳动物细胞本身进行改造已成为优化哺乳动物表达系统的新的热点.     

人视网膜色素上皮细胞生长特性及可见光对其影响

 研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞的生长特性及可见光对其影响.用倒置相差显微镜和透射电镜观察人视网膜色素上皮(hRPE)细胞形态和超微结构,用计数法和噻唑蓝(MTT)法绘制生长曲线.从光照时间、光照时有无血清、光照后是否换液、光照后培养时间这4方面考查可见光对hRPE细胞的损伤情况.实验结果表明,体外培养的hRPE细胞为多角形,有极性,细胞器正常,生长旺盛.(8423±359)lx的可见光光照2h就能对hRPE细胞造成显著损伤.光照时间为5h,光照时培养液中含10%胎牛血清,光照后不换培养液,光照后培养时间为24h,此条件下hRPE损伤率为58%.体外培养的hRPE细胞具有正常的形态结构和生长规律.可见光可对hRPE细胞造成损伤,并且损伤程度有时间积累效应.因此,在日常生活中应尽可能避免阳光直射,减少光照时间,以降低视网膜光损伤发生率,保护眼睛.     

脱水穿心莲内脂丁二酸单酯钠盐的抗早孕机理初探

采用放射免疫分析测定技术,研究了脱水穿心莲内酯丁二酸单酯钠盐制剂对体外培养的人绒毛组织激素分泌的影响,并应用透射电镜技术,从超微结构的水平上观察分析了穿心莲制剂组织特异性细胞毒效应,发现这种穿心莲制剂能特异性破坏绒毛合体滋养层细胞结构,包括蛋白质的合成系统,使hCG的合成受影响。用放射免疫法测定培养液中的hCG,以确定该激素的合成与分泌状态,结果发现,穿心莲制剂处理的实验组,hCG的合成和分泌明显受阻,与对照组差异显著。超微结构观察表明,穿心莲制剂的细胞毒作用是组织特异性和剂量依赖性的,特异地作用于绒毛的合体滋养层细胞而对细胞滋养层及间质组织均无损伤。     

细胞凋亡与动物再生

凋亡是有机体自主程序性死亡方式之一,是生物体正常的生理机能.再生主要指生物体组织或器官在遭受到损伤之后,重建恢复的过程.越来越多的研究表明,细胞凋亡能促进再生程序启动,两者之间存在紧密关系.本文根据动物在演化进程中的地位,阐述了细胞凋亡在低等无脊椎动物、鱼类、有尾两栖类及高等哺乳动物再生过程中的主要成果和最新进展,并总结了细胞凋亡对动物再生可能的作用机制.     

大金发藓乙酸乙酯提取物对K562细胞膜的损伤效应

为了探讨大金发藓乙酸乙酯提取物(PC-EEF)对K562细胞的膜损伤效应,应用MTT法检测PC-EEF对多种肿瘤细胞的细胞毒活性,台盼蓝拒染实验检测细胞存活力,相差显微镜观察K562细胞形态的变化,FDA-PI双染检测细胞膜通透性变化,DiBAC4(3)染色检测细胞膜电位变化,Hoechst33342-PI双染进一步验证细胞死亡的发生。研究结果显示:PC-EEF能显著地杀伤多种肿瘤细胞,其中对K562细胞最为敏感,PC-EEF以时间和剂量依赖性的方式降低K562细胞存活力。PC-EEF可诱导K562细胞发生显著膜损伤效应,表现为膜形态改变、膜通透性增加和膜电位下降。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞影响

观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞增殖的影响.采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察灵芪胶囊含药血清对K562细胞增殖的影响,采用Wright-Giemsa染色观察肿瘤细胞形态学变化.不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.当含药血清作用96h后,其抑制作用开始减弱.高剂量LQC含药血清对K562细胞形态学有明显的影响.灵芪胶囊含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关.     

连花清瘟胶囊抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药连花清瘟胶囊进行了体外抗柯萨奇病毒B4（CVB4）的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应（CPE）、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明：中药连花清瘟胶囊对CVB4有直接灭活作用,并能阻止CVB4的吸附细胞和抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度（IC50）分别为410.00,343.13和410.32μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.67,3.20和2.66.其中抗病毒吸附作用最强（P〈0.01）.在100～1600μg/mL范围内连花清瘟胶囊与CVB4抑制率呈明显的量效关系（P〈0.05）,在500μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖大于50%.研究表明中药连花清瘟胶囊能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用表现为直接灭活病毒,阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的杀伤作用

通过台盼蓝拒染法,以细胞存活率为指标用扫描电镜观察超声激活原卟啉Ⅸ(Protoporphyrin Ⅸ,PP Ⅸ)对艾氏腹水肿瘤(Ehrlich ascites tumor,EAT)细胞的杀伤作用;采用硫代巴比妥酸法检测超声激活PP Ⅸ对EAT细胞膜脂质过氧化水平的影响,研究超声激活Ⅸ对EAT细胞的杀伤效应.结果显示,超声结合PP Ⅸ杀伤EAT细胞与超声强度、处理时间及PP Ⅸ药物浓度呈正相关,超声结合PP Ⅸ对EAT细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PP Ⅸ表现出无明显的细胞毒作用;超声激活PP Ⅸ后膜的脂质过氧化水平显著增加.实验表明超声激活PP Ⅸ对EAT细胞具有明显的协同杀伤效应,推测可能是超声激活PP Ⅸ增加了膜脂质过氧化量,从而使细胞受损,并且质膜可能是超声激活PP Ⅸ杀伤EAT细胞的主要靶点之一.     

香兰素衍生物VND3207对α粒子辐射诱发人成纤维细胞基因组DNA损伤的防护研究

 高能α粒子辐射所致基因组DNA损伤形式为复杂的簇集损伤,修复难度大,生物效应严重,目前尚缺乏有效防护药物。前期发现香兰素衍生物VND3207具有抗氧化损伤、促进DNA双链断裂损伤修复的作用,能有效防护低传能线密度（LET） γ射线诱发细胞凋亡和基因组损伤。本研究旨在探讨VND3207对高能α粒子辐射诱发人成纤维细胞基因组DNA损伤的防护效应。细胞克隆形成实验表明,VND3207无论是照射前加药还是照射后加药作用均能增强人成纤维HFS细胞对α粒子的辐射损伤抗性。通过中性单细胞凝胶电泳（彗星电泳）、γ-H2AX免疫荧光簇集点、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞微核等多个基因组DNA损伤指标分析,表明了VND3207对α粒子辐射诱发细胞基因组DNA损伤的有效防护作用,其在5 ~ 10μmol/L浓度下,就可产生显著辐射防护效果,既能减轻α粒子辐射诱发细胞DNA的原初损伤水平,又能提高细胞的DNA修复能力。因此,VND3207具有维护高能粒子辐照细胞的基因组稳定性的作用,有开发成为抗高LET辐射损伤新药的价值。     

mTOR复合物在细胞迁移中的作用

细胞迁移是一个高度有序且多信号通路协调控制的过程,在个体发育、器官形成、伤口愈合及肿瘤恶性转移过程中具有重要作用.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)广泛存在于从酵母到哺乳动物的细胞中,参与调控与细胞生长和代谢密切相关的多种生命过程,其参与形成的复合物在调控细胞迁移过程中发挥重要作用.对雷帕霉素靶蛋白复合物的组成和它们在细胞迁移中的作用的最新研究进行系统阐述.     

咖啡因与牛血清和人血清白蛋白相互作用:荧光光谱“内滤光效应”的校正

用荧光光谱和紫外吸收光谱法研究咖啡因与牛血清白蛋白和人血清白蛋白的相互作用.实验结果表明,咖啡因与牛血清白蛋白的结合主要是静态猝灭过程,而与人血清白蛋白的结合则是动态猝灭过程.获得了不同温度下,咖啡因与血清白蛋白作用的结合常数以及ΔH、ΔG和ΔS等热力学参数.由于咖啡因在荧光激发波长处有吸收,其猝灭行为中包含有"内滤光效应",因此我们对荧光实验数据进行了校正,结果显示"内滤光效应"使咖啡因与血清白蛋白的结合常数升高.另外,用紫外光谱和圆二色谱考察了咖啡因对血清白蛋白二级结构的影响,位点竞争实验表明咖啡因与牛血清白蛋白的结合主要发生在siteⅠ(sub-domainⅡA)位.     

猪血清胸腺因子免疫活性的测定

根据哺乳动物循环血液中所含有的血清胸腺因子(STF)能使θ-阴性的玫瑰花瓣状形成细胞(RFC~-)转变成RFC~+,同时提高其对抗θ抗原血清的代用品硫唑嘌呤的敏感性的原理,采用成熟的BALB/C品系小鼠,经摘去胸腺后的鼠脾脏淋巴细胞和绵羊红细胞(SRBC)之间,在STF和硫唑嘌呤同时共存的条件下具有抑制玫瑰花结形成的作用,从而建立了对哺乳动物循环血液中的STF(九肽)的超微量生物活性测定方法。用本方法对猪血清和血浆的检测结果,其活性滴度分别为1:512、1:1024。     

海带硫酸多糖对小鼠腹腔巨噬细胞激活及细胞毒作用的影响

目的:探讨海带硫酸多糖(LPS)对小鼠腹腔巨噬细胞MΦ的激活及细胞毒作用,为研究LPS作用机体抑制S-180细胞生长的作用提供实验依据。方法:小鼠随机分为5组,生理盐水NC为对照组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为实验组,分别腹腔注射不同浓度的LPS 20、40、80和120mg/kg·d,连续注射2 d,然后制备腹腔MΦ效应细胞和用传代8 d龄腹水型S-180瘤细胞制备靶细胞,使效:靶之比为5:1,在96孔培养板上进行MΦ细胞毒活性测定。结论:海带硫酸多糖能激活小鼠腹腔巨噬细胞,对S-180肿瘤细胞具有较好的杀伤作用。     

运动诱导心脏再生:治疗心血管疾病的新途径

虽然成年哺乳动物的心脏具备有限的再生能力,但在心肌损伤后无法弥补丢失的心肌细胞.运动诱导心脏再生,不仅能促进心肌细胞的肥大和自我更新、抑制凋亡,而且能影响血管内皮细胞和成纤维细胞的功能.IGF-1/PI3K/Akt信号通路、C/EBPβ/CITED4转录因子、一氧化氮是运动促进心脏再生的重要分子机制.微小RNA作为生物学标记物,在运动诱导的心脏再生中的作用日益受到关注.更重要的是,运动诱导的心脏再生对心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤、代谢型心肌病、衰老相关的心肌损伤具有保护效应.基于运动诱导的心脏再生将成为治疗心血管疾病的新途径.     

β淀粉样蛋白25-35片段最佳损伤建模条件的研究

为探讨淀粉样蛋白25-35片段(Αβ25-35)诱导细胞损伤的最佳条件,为后续Αβ作用机制研究奠定实验基础。采用正常血清培养和血清饥饿培养两种预处理方法,以Αβ25-35为诱导剂,建立SH-SY5Y细胞损伤模型,通过细胞形态学和存活率两个指标来确定损伤模型建立的最佳条件。结果显示,血清在Aβ25-35引起的SH-SY5Y细胞损伤中具有保护作用。由此可知,采用血清饥饿法培养SH-SY5Y细胞,以40μM的Aβ25-35处理细胞48h是建立细胞损伤模型的最佳条件。     

虫草素对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的应用Aβ25-35孵育PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨虫草素对PC12细胞损伤的保护作用.方法将不同组别PC12细胞用Aβ25-35诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中SOD活性和MDA含量,Western blot法检测PC12细胞中Caspase-3的表达.结果与模型组相比,两种剂量的虫草素均使细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,细胞中SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞Caspase-3的表达.结论虫草素对Aβ25-35诱导的PC12细胞死亡、氧化损伤和细胞凋亡有明显保护作用.     

特异性提高TNFR55在内皮细胞中的表达量的研究

以KDRp为启动子 ,实现TNFR5 5基因在内皮细胞中的特异表达 ,提高其表达量 .构建特异表达TNFR5 5的逆转录病毒载体pLXN D2 99 KDRp TNFR5 5 ,将编码TNFR5 5的cDNA转入内皮细胞中 ,检测感染后的内皮细胞中TNFR5 5表达量的变化及其对TNF细胞毒作用的影响 .结果显示 ,TNFR5 5在内皮细胞中的表达量有显著提高 (P <0 .0 1) ,TNF对内皮细胞的细胞毒作用增强 .而同样经病毒感染的NIH3T3细胞表面TNFR的表达量无明显变化 .编码TNFR5 5的cDNA能够在KDRp指导下实现在内皮细胞中的特异表达 ;内皮细胞表面TNFR数量提高后能加强TNF对其的细胞毒作用 .